Способ определения эндотоксикоза при хирургических операциях Советский патент 1992 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине и Может быть использовано для контроля динамики и прогнозирования состояния больного при тяжелых хирургических зндотоксикозах (разлитой гнойный перитонит, панкреонекроз и др.).

Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.

В реакционную смесь, содержащую нЛдН:с6мН-оксидоредуктазу, люциферазу и их субстраты в насыщающих концентраци- ях, добавляют анализируемую биологическую жидкость с измерением интенсивности свечения .до (И) и после (la) добавления исследуемого субстрата. О динамике заболевания судят по изменению величины 2/ по сравнению с нормой.

Способ осуществляется следующим образом.

В работе используют лиофильно высушенный частично очищенный препаратферментов, содержащий 0,07 единиц активности НАДН:ФМН-о1 сидоредуктазы, люциферазу с активностью 14,6-10 квант с и 0,71 мг белка. Активность НАДН:ФМНоксидоредуктазы определяют спектрофотометрически, за единицу активности принимают активность 1 мг фермента, окисляющего 1 мкг НАДН в минуту.

Перед измерениями приготавливают следующие реактивы.

Лиофильно высушенный препарат люциферазы разводят в 1.0 мл 0.1 М фобфатного буфера, рН 6,8.

0,0025%-ный раствор тетрадеканаля в 0,1 М фосфатном буфере, рН 6,8.

Раствор НАДН ( М).

Раствор ФМН (5,4-10 М).

Измерения проводят на хемилюминометре ХЛМ 1Ц-01 при 25° С следующим образом.

В кювету хемилюминометра помещают 0 мкл 0,0025%-ного раствора тетрадеканаля, 50 мкл ФМН (5,4-10 М), 20 мкл препарата НАДН:ФМН-оксидоредуктазы и люциферазы, 2 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 6,8, 200 мкл ( М). После достижения постоянного уровня свечения И 15000 П./С добавляют 40 мкл анализируемой биологической жидкости (сыворотки крови, лимфы и т.п.). При этом интенсивность свечения изменяется до величины 12. Рассчитывают величину отношения la/li (%). Аналогичным образом измеряют биолюминесценцию биологических жидкостей того же больного в процессе лечения.

Для сывороток крови доноров показатель IZ/H был 46 ± 1,94%, для лимфы и экссудата брюшной полости этот показатель неопределим в связи с невозможностью забора этих сред у здоровых людей.

П р и М е р 1. Больной Ч., 28 лет, поступил через 18 ч от начала заболевания с жалобами на интенсивные боли в животе. Состояние удовлетворительное. При осмотре выявлена резкая болезненность и легкое напряжение мышц в правой половине живота. В крови умеренный лейкоцитоз, анализы мочи без патологии. Тест на токсичность сыворотки крови описанным способом составил 53,6% (токсикоз имеется). В связи с тем, что кл.инически не представлялось возможным исключить деструктивный процесс в брюшной полости, больному выполнена иагностическая лапороскопия, при этом было подтверждено наличие эндотоксикоза.

П р и М е р 2. Больной Л., 40 лет, поступил через 10 дней после перелома костей таза, повреждения прямой кишки, массивной забрюшинной флегмоны, сепсиса. Произведено вскрытие забрюшинной флегмоны, удалено до 600 мл густого гноя с гнилостным запахом. На следующий день состояние больного очень тяжелое: энцефалопатия, явление дыхательной недостаточности, высокая температура, по дренажам из забрюшинного пространства - обильное гнойное отделяемое. В крови анемия, гипопротеинемия, высокий лейкоцитоз с выраженным нейтрофильно-ядерным сдвигом. Кровь больного исследовали описанным способом. Величина 2/ была равна 156,6% (тяжелый токсикоз). В ближайшие дни сохранялась клиника тяжелого эндотоксикоза. Многократные исследования теста на токсичность сыворотки крови предлагаемым способом показывали его очень высокий уровень 153,;i-1707o.

Примерз. Больная П., 83 года, поступила и оперирована по поводу разлитого гнойного перитонита на почве перфорации тонкой кишки. Сразу после операции состояние больной тяжелое; тахикардия, тахипноэ, в крови выраженный лейкоцитоз со значительным сдвигом формулы влево, по дренажам из брюшной полости гнойное отделяемое. Тест на токсичность сыворотки

0 крови описанным способом составил 193,3% (тяжелый токсикоз). В результате проводимой интенсивной терапии отмечена положительная динамика. На 5-й день после операции состояние больной оценено как

5 средней тяжести. Тест на токсичность сыворотки крови предлагаемым способом составил 98% (токсикоз средней степени тяжести), что полностью коррелировало с клиническими и лабораторными данными.

0 Во всех приведенных примерах при использовании способа-прототипа не удалось установить наличие эндотоксикоза (все исследуемые показатели соответствовали норме).

5 Таким образом, способ прост в выполнении, характеризуется повышенной точностью, время анализа сокращено в 10-100 раз, анализ не зависит от введения или наличия в сосудистом русле лекарственных

0 препаратов. Полученные данные коррелируют с состоянием больного и могут быть использованы для объективизации течения болезни, что наиболее важно для больных с тяжелыми хирургическими токсикозами, часто находящихся в терминальном состоянии.

Способ позволяет в ранние сроки послеоперационного периода прогнозировать состояние больного и возможные тяжелые

0 осложнения. Вовремя принятые профилактические меры способствуют повышению эффективности лечения больных, что выражается в снижении количества летальных исходов и уменьшении материальных затрат, связанных с длительным пребыванием больных с постоперационнь1ми осложнениями на излечении. Способ не травматичен для больного, требует минимальных количеств крови (10-40 мкл), методически прост

0 и позволяет проводить серийный анализ на серийно выпускаемых приборах и реактивах.

Формула изобретения Способ определения эндотоксикоза

5 при хирургических операциях путем помещения сыворотки крови больного в среду с тестирующим веществом и сравнения величины физических показаний среды до и после добавления крови, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения

5 17145126

точности способа, в качестве тестирующегосыворотки крови больного, рассчитывают

вещества используют смесь НАДН:ФМН-величину отношения второго показателя к

оксиредуктазы, люциферазы и их субстра-первому и при повышении этого значения

тов в насыщающих концентрациях,более 48% относительно нормы определяопределяют на хемолюминометре уровень5 ют эндотоксикоз. свечения до и после добавления в смесь

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для контроля динамики и прогнозирЧзвания состояния больных при тяжелых хирургических эндотокси- козах. Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа за счет того, что в среду в качестве тестирующего вещества добавляют смесь НАДН:ФМН-ок- сиредуктазы люциферазы и их субстратов в насыщающих концентрациях, далее вносят исследуемую сыворотку |^рови больного. При этом на хемилюминометре определяют уровень свечения смеси до и после внесения сыровотки И и \2 соответственно, рассчитывают величину отношения l2/li и при значении зтого показателя более 48% относительно нормы определяют эндотоксикоз. Способ позволяет повысить точность определения, т.к. исследуются микрообъемы сыворотки крови. Время анализа н^ более 2 мин.сл