Способ оценки токсичности биологических жидкостей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности оно применимо для определения токсичности биологических жидкостей огра- низма человека при различных заболеваниях, сопровождающихся интоксикацией.

Цель изобретения-упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких oner, раций при одновременном повышении точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу исследуемой биологической жидкости подвергают фильтрации в пенной фазе через фильтр с диаметром пор 45± 5 А° и пропускной способностью 0,5± 0.1 в области мол.м. 50000. В качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе. Жизнеспособность суспензии сперматозиодов быка определяют как произведение среднего времени подвижности на логарифм вели- чины подвижности в момент начала воздействия фильтратом, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в фильтрате относительно жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в глюкозоцитрат- ном растворе.

Выбор характеристик фильтра (а именно, диаметра пор 45± 5А° и пропу- скной способностей 0,5±01) обусловлен необходимостью удаления из образца биологической жидкости высокомолекулярных соединений, вызывающих агглютинацию сперматозоидов. Эо позволяет правильно оценить жизнеспособность суспензии сперматозоидов. Кроме того, характеристики фильтра таковы, что в фильтрат попадают все компоненты, ответственные за токсичность.

Фильтрация в пенной фазе позволяет использовать малые обьемы образца, обеспечивает лучшее перемешивание и удаление фильтрационной корки.

Использование в качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов суспензии сперматозоидов быка в глюкозо- цитратном растворе обусловлено тем, что сперматозоид как клетка млекопитающего по сравнению с парамециями по известному способу более адекватно реагирует на изменение состава биологических жидкостей организма человека.

Пример 1. У больного из катетера, стоящего в одной из центральных вен, берут 10 мл крови, далее ее центрифугируют 15 мин со скоростью 3000 б/мин. Полученную сыворотку подвергают с помощью пе- ристальтического насоса фильтрации через волоконный фильтр с диаметром пор 45±5 А° и пропускной способностью 0,5±0.1 в области мол.м. 50000.

Для определения степени токсичности фильтрат сравнивают с контрольным раствором. Контрольной пробой служиттлюко- зоцитратная среда (цитрат натрия, вода дистиллированная).

Опытным образцом в эксперименте служит фильтрат, доведенный до изотонии. На 5 мл фильтрата добавляют 0,2 г глюкозы и 0,050 г цитрата натрия.

В качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют замороженную в парах жидкого азота гранулированную сперму быка.

Оттаивание каждой гранулы осуществляют в 0,5 мл глюкозоцитратной среды при 40°С. После оттаивания сперму сливают в колбочку и тщательно перемешивают. Затем в 1 мл опытной пробы добавляют 0,2 мл оттаянной спермы. Приготовленные опытный и контрольный образцы помещают в измерительные кюветы. Проводят измерение зависимости подвижности - величины,

равной концентрации подвижных клеток на средний модуль их скорости, от времени в условных единицах для опытного и контрольного образцов. Вычисляют жизнеспособность суспензии сперматозоидов быка в опытном Ж° и контрольном Жк образцах как произведение среднего времени подвижности tcp на логарифм подвижности в начальный момент времени logmt О

Ж° т. V logm° t 0; Жк tcPK logm tK 0. Среднее время подвижности измеряют в минутах, а подвижность в условных единицах.

Определяют токсичность (индекс токсичности) как отношение жизнеспособности опытного образца к жизнеспособности контрольного образца

Ж°

т ;

Жк

100%

0

5

0

5

где 1Т-индекс токсичности.

Для сыворотки крови больного В, с диагнозом панкреанекроз,абсцесс сальниковой сумки с прорывом в свободную брюшную полость, разлитой гнойный перитонит состояние после операций: tcp° 21,7 мин,тм)0 438у.е.,Ж0 57,8минДсрк 51,5 мин,тм).е.,,5мин, Т 44%.

Пример 2. Для сыворотки крови больного А. с диагнозом панкреанекроз, ферментативный перитонит состояние после холецистостомии, дренирования и тампонирования сальниковой сумки и брюшной полости: tcp° 25,1 мин, гти-о° 605 у.е., Ж° 68,6 мин, tcpK 51,5 мин. mt-oK 178 у.е., Жк 131.5 мин, Г 53%.

Пример 3. Для сыворотки крови больного Я. с диагнозом сепсис, разлитой гнойный перитонит, флегмона забрюшин- ного пространства и парарентальной клетчатки состояние после операций: tcp° 12,8 мин, mt-o° 258у.е., Ж° 30,9 мин, tCpK 34,1 мин, гт-ок 190у,е„ Жк 77,7 мин. т 40%.

Пример 4. Для сыворотки крови здорового человека Т.: tcp° 36,4 мин, mt-o° 217 у.е., Ж° 217,6 мин, tcpK 49,1 мин, int-oK 167 у.е., Жк 167,9 мин, 1Т 130%.

Пример 5. Для сыворотки крови здорового человека К.: tcp° 51,6 мин, пн-о° 335 у.е., Ж° 339 мин, tCpK 62,8 мин, 284 у.е., Жк 284 мин, 1т 119%.

Из примеров 1-4 видно, что больные имеют значение индекса токсичности значительно ниже (выше интоксикация), чем у здоровых людей. У больного Я. по сравнению с больными В. и А. индекс токсичности наименьший, что свидетельствует о большей выраженности интоксикации, которая привела больного к летальному исходу. У всех представленных пациентов с синдромом эпдотоксикоза величина индекса токсичности совпала с клинико-лабораторны- ми данными.

Определенный данным методом индекс токсичности дает возможность объективной оценки степени выраженности эндотокси- коэа, выбора метода дезинтоксикационной терапии и ее оценки.

Пример 6. Экспериментальное животное (собака), диагноз: перитонит.

Получают лимфу, проводят пробоподго- товку аналогично примеру 1: tcp° 17,5 мин, у.е., ,6 мин, .4 мин, тюк - 260 у.е., Жк 77,8 мин. Т 58,6%.

Пример 7. Экспериментальное животное (собака), диагноз: перитонит.

Получают спинномозговую жидкость, проводят пробоподготовку аналогично примерам 1-4: tcp° 18,2 мин, гт-о° 512 у.е., Ж° 49.3 мин, tcp 34,2 мин, mt-o 258 у.е.. Жк 81,9 мин, 1Т 60,2%.

Изобретение позволяет повысить точность способа за счет оценки подвижности по 1000 и более клеткам, а также за счет определения жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка как произведения среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности в момент начала воздействия. В совокупности точность предлагаемого способа увеличивается, по крайней мере, на порядок. Предлагаемый способ позволяет также упростить определение токсичности биологических жидко0

5

0

5

0

стей за счет использования стандартной суспензии сперматозоидов, сохраняемой неограниченного долго до использования в жидком азоте, а также за счет возможности использования инструментальной оценки подвижности суспензии сперматозоидов. Возможность использования суспензии сперматозоидов обеспечивается предварительной фильтрацией исследуемого образца.

Ф о р м у л а и з о б р ет е н и я Способ оценки токсичности биологических жидкостей, включающий исследование воздействия биологической жидкости на суспензию подвижных биологических, микрообъектов с последующей оценкой токсичности по изменению подвижности объектов во времени непосредственно посл.е добавления исследуемой жидкости, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций при од- новременном повышении точности способа, пробу биологической жидкости предварительно подвергают фильтрации в пенной фазе, удаляя ингредиенты с мол.м. более 50000, в .качестве микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе, а жизнеспособность определяют как произведение среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности.

Изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для определения токсичности биологических жидкостей организма человека. Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций при одновременном повышении точности способа. Оценку токсичности производят путем забора пробы биологической жидкости, приготовления фильтрата, воздействия этим фильтратом на суспензию подвижных биологических микрообъектов с последующей регистрацией зависимости подвижности суспензии подвижных микрообъектов от времени. При этом пробу подвергают фильтрации в пенной фазе через фильтр с диаметром пор 45 ± 5 А° и пропускной способностью 0,5± 0,1 в области мол.м. 50000, в качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозо-цитратном растворе, определяют жизнеспособность сперматозоидов быка, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в фильтрате относительно жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе. Предлагаемый способ позволяет повысить точность оценки токсичности биологических жидкостей организма человека при различных заболеваниях, сопровождающихся интоксикацией. ;..,. сл с