Ё
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования тромбоопасности при атеросклерозе. Цель изобретения - повышение точности способа - достигается путем дополнительного исследования гемокоагулирующих свойств эритроцитов, активности антиокси- дантной системы, вычисления коэффициента тромбоопасности по формуле К (а- Ь)/(с- d), где а - разница между временем рекаль- цификации субстратной плазмы и плазмы при добавлении эритроцитов; с - время ре- кальцификации тромбоцитной плазмы; b - время лизиса эуглобулинового сгустка тромбоцитной плазмы; d - активность суперок- сиддисмутазы, а при К S 120 прогнозируют тромбоопасность у больного атеросклерозом. 6 табл.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки коагу- ляционного, фибринолитического и антиокислительного потенциала крови больных атеросклерозом.
Наиболее близким к предлагаемому является способ оценки тромбоопасности при различных заболеваниях, в том числе и при атеросклерозе путем выполнения и анализа коагулограммы, включающей следующий набор тестов: время рекальцификации, про- тромбиновое время, фибриноген, толерантность плазмы к гепарину, фибринолиз плазмы.
Недостатком данного способа является малая его достоверность из-за возможной разнонаправленности отклонений показателей от нормы. Кроме того, в применяемой коагулограмме не учитываются прокоагу- лянтные свойства эритроцитов, что значительно искажает результаты исследований.
Целью изобретения является повышение точности способа.
Цель достигается тем, что согласно способу прогнозирования, включающему анализ коагулограммы, вводят исследование гемокоагулирующих свойств эритроцитов, активности антиоксидантной системы, вычисляют коэффициент тромбоопасности (К) по формуле:
К
С
где а - разница между временем рекальцификации сусбтратной плазмы и плазмы при добавлении эритроцитов;
с - время рекальцификации тромбоцитной плазмы;
b - фибринолитическая активность тромбоцитной плазмы;
d - активность супероксиддисмутазы,
и при значениях К 120 прогнозируют тромбоопасность у больного.
Способ осуществляют следующим образом.
У больного кожу в области локтевого сгиба обрабатывают спиртом. После высыхания спирта из локтевой вены пункцией силиконированной иглой забирают 4 мл крови в пробирку, содержащую 0,4 мл 3,8%- ного раствора цитрата натрия. Первые 5-6 капель выпускаются на тампон и для исследования не берутся . Кровь в пробирку набирают свободным током, перемешивая ее с антикоагулянтом покачиванием или легким встряхиванием без вспенивания.
Из пробирки забирают 0,5 мл крови для определения активности супероксиддисму- тазы. Остальную кровь центрифугируют при 1500 об/мин (около ЗООд) в течение 7 мин. 0,1 мл тромбоцитной плазмы используют для определения времени рекальцифика- ции и 0,5 мл - для исследования ее фибри- нолитической активности.
Оставшуюся кровь центрифугируют при 400 об/мин (1200д) в течение 20 мин. При этом получают бестромбоцитную плазму, используемую в качестве субстрата при определении времени рекальцификации плазмы при добавлении эритроцитов. Для определения времени рекальцификации плазмы при добавлении эритроцитов необходимо 0,2 мл бестромбоцитной плазмы и 0,1 мл эритроцитов. Вычисляют разницу между временем рекальцификации субстратной плазмы при добавлении эритроци- тов,
Определение времени рекальцификации плазмы.
Метод основан на определении времени свертывания плазмы при добавлении к ней оптимального количества CaCl2.
Реактивы: 0,277%-ный раствор CaCl2.
0,85%-ный раствор NaCI.
Приборы: водяная баня 37°С, секундомер.
Ход определения. В пробирку, установленную на водяной бане при 37°С, вводят 0,2 мл раствора CaCl2 и 0,1 мл 0,85%-ного раствора NaCI. Через 60с в пробирку вводят 0,1 мл тромбоцитной плазмы и включают секундомер. Определяют время свертывания плазмы. Определение повторяют2-3 раза.
Определение времени рекальцификации плазмы при добавлении эритроцитов.
Исследование проводят аналогичным образом. В контроле определяют время рекальцификации субстратной (бестромбоцитной) плазмы, а в опыте вместо
физиологического раствора добавляют 0,1 мл взвеси эритроцитов.
Вычисляют разницу между временем рекальцификации субстратной плазмы и плазмы при добавлении эритроцитов а.
Определение фибринолитической активности плазмы эуглобулиновым методом.
Принцип основан на осаждении в кислой среде и при низкой температуре эугло- булиновой фракции, содержащей факторы свертывания крови и фибринолиза. Полученный осадок эуглобулинов растворения, фибриноген превращается в фибрин. Время от момента образования сгустка фибрина до его растворения выражает фибринолитиче- скую активность исследуемой крови.
Реактивы: раствор борнокислого натрия (9 г NaCI и 1 г NaaB/iO растворяют в 1 л дистиллированной воды), 1 %-ный раствор уксусной кислоты, 0,277%-ный .раствор CaCl2.
Приборы: центрифуга 1500 об/мин, холодильник 4°С, водяная баня 37°С. часы.
Ход определения. В пробирку вносят 0,5 мл тромбоцитной плазмы, 8 мл дистиллированной воды,0,15 мл уксусной кислоты. Смесь устанавливают в холодильник при 4°С. Через 30 мин смесь центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин, жидкость над осадком удаляют, а пробирку высушивают перевертыванием на фильтрованную бумагу втечение 1 мин. В пробирку приливают 0,5 мл бората, осадок растворяют и свертывают 0,1 мл раствора CaCl2. Пробирку после образования сгустка ставят на водяную баню и засекают время его растворения.
Определение активности супероксид- дисмутазы.
Метод основан на фотометрическом определении скорости ингибирования супер- оксиддисмутазойаутоокисления
адреналина.
Реактивы: трис-HCI .буфер, 0,005 М, рН 7,4; осадитель гемоглобина - смесь 25 мл этанола и 15 мл хлороформа; 0,01 М раствора лимонной кислоты (0,48 г лимонной кислоты растворитель в 250 мл дистиллированной воды); карбонатный буфер, 0,2 М, рН 10,2 (0,7 г карбоната натрия + 0,9 г гидрокарбоната натрия растворить в 1000 мл дистил. воды); адреналин (готовится перед употреблением), 0,01 М раствор - 33 мг адреналина гидротар- трата растворить в 10 мл раствора лимонной кислоты.
Приборы: фотоэлектроколориметр КФК-2, кювета 10 мм, светофильтр 490 нм; секундомер, центрифуга 3500 об/мин.
Ход определения.
К 0,5 мл трис-буфера добавляют 0,5 мл крови, размешивают и доливают 2,0 мл смеси для осаждения гемоглобина, встряхивают, размешивают и оставляют в морозиль- ной камере на сутки. После размораживания центрифугируют 30 мин при 3500 об/мин. Для контроля берут 4,4 мл карбонатного буфера, 0,1 мл дистиллированной воды, 0,5 мл раствора адреналина, включают секундомер, размешивают, измеряют экстинцию каждую минуту до повторения трех одинаковых значений. В опыте вместо воды берут 0,1 мл фугата. Расчет:
Т% :
100%;
активность в условных единицах
Т%
100-т %
где Т - процент торможения аутоокисления адреналина;
Еконтр. - максимальная экстинкция кон- троля;
Еопыт. - максимальная эстинкция опыта;
At - время, в течение которого происходит окисление адреналина.
Исследовано 32 пациента обоего пола в возрасте от 40 до 80 лет, больных атеросклерозом артерий сердца и мозга, поступивших с диагнозами: ИБС, острый инфаркт миокарда; церебральный атеросклероз, острые явления ишемического инсульта. Кон- трольной группой служили 19 практически здоровых людей того же возраста. Коэффициент тромбоопасности определен также у 32 больных обоего пола в возрасте от 40 до 80 лет с диагнозом: ИБС, стенокардия на- пряжения, атеросклеротический коронаро- кардиосклероз.
Индивидуальные коэффициенты тромбоопасности представлены в табл. 1-3. Из табл. 2 видно, что у больных острым инфар- ктом миокарда или острым ишемическим инсультом коэффициент тромбоопасности находится в пределах 180-1836, а у здоровых людей 10-60.
Интервал между максимальным коэф- фициентом у здоровых людей и минимальным коэффициентом у больных составляет 120. Если к максимальному коэффициенту у здоровых людей прибавить 60 (120:2), то получим 120, а если от минимального коэф- фициента у больных отнять 60, получим тоже 120. Отсюда следует, что при определении коэффициента больше 120
5 0
5
0
5
0 5 0
5
0 5
прогнозируют тромбоопасность у больных атеросклерозом.
Из табл. 3 следует, что у ряда больных коэффициент тромбоопасности превышает 120.
В лечении этих больных, учитывая опасность тромботических осложнений, было рекомендовано применение антикоагулянт- ных и антиоксидантных препаратов.
П р и м е р 1. Больной, 64 года, поступил в кардиологическое отделение с жалобами на периодические боли в области сердца, появляющиеся при физической нагрузке, одышку. Болеет в течение 10 лет.
На основании жалоб, объективного обследования, данных лабораторных исследо- ваний был поставлен диагноз: ИБС. Стенокардия напряжения, стабильная. Функциональный класс II. Атеросклероз венечных артерий и аорты. Кардиосклероз атеросклеротический, Н Пд стадии.
Коагулограмма: время рекальцифика- ции тромбоцитной плазмы - 180 с (в норме 100-155 с), толерантность плазмы к гепарину- 6 мин (в норме 5,5-11 мин), фибриноген - 5,0 г/л (в норме 2,0-4,0 г/л), протромбино- вое время - 10 с (в норме 12-15 с), фибрино- лиз тромбоцитной плазмы - 200 мин (в норме 120-240 мин).
Анализ коагулограммы показал, что время рекальцификации тромбоцитной плазмы указывает на гипокоагуляцию, толерантность плазмы к гепарину - нормокоагуля- цию, фибриноген, протромбиновое время - гиперкоагуляцию, фибринолиз в норме.
Дополнительно определено: время рекальцификации плазмы при добавлении эритроцитов 105 с, активность супероксид- дисмутазы 0,9 у.е., К 130.
П р и м е р 2. Больной, 59 лет, поступил с жалобами на боль за грудиной давящего характера, отдающую в левую руку. Впервые такого характера боль возникла 1 мес назад после большого нервного перенапряжения на работе.Дигноз: ИБС. Стенокардия напряжения впервые возникшая. Атеросклероз венечных артерий и аорты. Кардиосклероз атеросклеротический, Н0.
Коагулограмма: время рекальцификации тромбоцитной плазмы 100 с, толерантность плазмы к гепарину 6 мин, фибриноген 2,8 г/л, протромбиновое время 11с, фибринолиз тромбоцитной плазмы 260 мин.
Анализ коагулограммы показал, что время рекальцификации тромбоцитной плазмы и толерантность плазмы к гепарину указывают на нормокоагуляцию, фибриноген - нормокоагуляцию, протромбиновое время - гиперкоагуляцию, фибринолиз ниже нормы.
Проведено дополнительное исследование: разница между временем рекальцифи- кации субстратной плазмы и плазмы при добавлении эритроцитов 59 с, активность супероксиддисмутазы 1,1 у.е., К 139.
Обоим больным наряду с проводимой антиангинальной терапией с целью предотвращения тромботических осложнений рекомендовано применение антикоагулянтов и препаратов, обладающих антиоксидант- ным действием: гепарин 5 тыс. через 6 ч подкожно (7 дней), аскорутин 2 таблетки 3 раза в день, раствор токоферола ацетата в масле (5%-ный) 1 капсула 2 раза в день.
ПримерЗ. Больной, 58 лет, поступил с жалобами на периодически возникающие боли в области сердца и за грудиной сжимающего характера, иррадиирующие в левую лопатку, одышку. Болеет 4 года.
Диагноз: ИБС. Стенокардия напряжения стабильная. Функциональный класс II. Атеросклероз венечных артерий и аорты. Кардиосклероз атеросклеротический, Н Пд стадии.
Коагулограмма: время рекальцифика- ции тромбоцитной плазмы 95 с, толерантность плазмы к гепарину 5 мин, фибриноген 3 г/л, протромбиновое время 12с, фибрино- лиз тромбоцитной плазмы 220 мин.
Анализ коагулограммы показал, что время рекальцификации тромбоцитной плазмы и толерантность плазмы к гепарину указывают на гиперкоагуляцию, фибриноген, протромбиновое время - нормокоагуляция, фибринолиз в пределах нормы.
Дополнительно исследовано: разница между временем рекальцификации субстратной плазмы и плазмы при добавлении эритроцитов 48 с, активность супероксиддисмутазы 1,7 у.е., К 65.
Прогноз тромбоопасности, определенный по предлагаемому способу, как и по прототипу, находил подтверждение при наблюдении за больным в ходе .его лечения. Если лечение антикоагулянтами и антиокси- дантами оказывало положительный эффект, т.е. частота приступов стенокардии, их интенсивность уменьшались, нормализовались показатели коагулограммы и антиоксидантной системы (коэффициент тромбоопасности был в пределах нормы), значит тромбоопасность действительно существовала и благодаря правильному лечению она была предотвращена.
В табл. 1 приведены результаты определения тромбоопасности по прототипу у больных стенокардией. Анализ данных показывает, что у больных 3, 5, 8, 9, 14, 22, 24, 29 наблюдается опасность тромбоза и им показаны антикоагулянты. У больных 11 и 17
возможна опасность тромботических ос- .ложнений и антикоагулянты относительно показаны.
Все больные получали антиангиналь- ные препараты. Больным, у которых была выявлена тромбоопасность наряду с этим проводилось лечение антикоагулянтами.
У больной 2 на 3-ти сутки стационарного лечения (тромбоопасность не прогнозиро- 0 валась) был диагностирован инфаркт миокарда. Коагулограмма подтвердила наличие гиперкоагуляции, были назначены антикоагулянты.
Больным 8 и 22 на 4-е сутки лечения 5 антикоагулянты были отменены, так как у первой появились подкожные кровоизлияния, у второго желудочное кровотечение.
У больного 26 через неделю лечения повторное исследование коагулограммы пока- 0 зало гиперкоагуляцию и угнетение фибринолиза, т.е. наблюдалась тромбоопасность, которая раньше по прототипу выявлена не была. В лечение были включены антикоагулянтные препараты. 5У остальных больных осложнений в лечении выявлено не было и назначенное лечение дало положительный эффект.
Таким образом, выявленная по прототипу тромбоопасность дала 2 ложноположи- 0 тельных и 2 ложноотрицательных прогноза.
Наблюдаемым больным проводились и другие исследования, которые впоследствии при анализе результатов позволили установить, что у больной 2 коэффициент 5 тромбоопастности (определенный предлагаемым способом)был равен 197, а у больного 3-167, т.е. превышал 120, и необходимо было уже при поступлении в клинику прогнозировать тромбоопасность и 0 назначить соответствующее лечение.
У больных 8 и 22 коэффициенты тромбоопасности составляли соответственно 45 и 40, т.е. по предлагаемому способу тромбоопасность отсутствовала и показа- 5 ний к назначению антикоагулянтов не было.
В табл. 5 указаны значения полученных показателей при поступлении больного в клинику.
Из табл. 5 следует, что тромбоопас- 0 ность, определенная по прототипу и предлагаемым способом не всегда совпадают. В данной группе больных учитывали тромбоопасность, определенную предлагаемым способом, и этим больным наряду с антиан- 5 гинальной терапией проводили лечение ан- тикоагулянтами и антиоксидантами. Тромбоопасность, определенная по прототипу, в учет не принималась.
Через неделю лечения у всех больных JTOBTOPHO определяли коагулограмму и активность антиоксидантной системы. Результаты представлены в табл. 6.
Как видно из табл, 6, в результате проводимого лечения в основном наступила нормализация исследованных показателей, повышенные коэффициенты тромбоопасно- сти возвратились к норме. Осложнений проводимой терапии (тромбозов, связанных с гиперкоагуляцией, или кровотечений при гипокоагуляции) не наблюдали, т.е. ложно- положительные и ложноотрицательные прогнозы, определенные предлагаемым способом, отсутствовали.
В табл. 4-6 приняты следующие обозначения: ТЭ Г - показатели тромбоэластограм- мы; г - время реакции; k - время образования сгустка, та - максимальная амплитуда ; с - время рекальфикации тром- боцитной плазмы; ТПГ - толерантность плазмы к гепарину; b - время лизиса эугло- булинового сгустка тромбоцитной плазмы; Ф-аза - активность фибриназы; Ф-ген - содержание фибриногена; а - разность между временем рекальцификации субстратной плазмы и плазмы при добавлении эритроци- тов, d - активность супероксиддисмутазы, К - коэффициент тромбоопасности.г- отклонение показателя от нормы, указывающее на гиперкоагуляционный сдвиг,ф- отклоне
Значения полученных показателей и
ние показателя от нормы, указывающее на гипокоагуляционный сдвиг.
Формула изобретения Способ прогнозирования тромбоопас- ности при атеросклерозе путем исследования свертывающей и фибринолитической систем крови, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, измеряют время рекальцификации тромбоцитар- ной плазмы и время лизиса эуглобулинового сгустка тромбоцитарной плазмы, а также су- пероксиддисмутазную активность крови, затем рассчитывают, используя абсолютные значения измеренных параметров, показатель по формуле
К
где К - определяемый показатель;
а - разница между временем рекальцификации субстратной плазмы и плазмы при добавлении эритроцитов;
с - вреся рекальцификации тромбоци- ратной плазмы;
b - время лизиса эуглобулинового сгустка тромбоциратной плазмы;
d - супероксиддисмутазная активность, и при значении К больше 120 прогнозируют тромбоопасность у пациента.
Таблица коэффициенты
1
Таблица 2
Значения полученных показателей и коэффициенты тромбоопасности у больных острым инфарктом миокарда и острым ишемическим инсультом головного мозга людей
Таблица 3
Значения полученных показателей и коэффициенты тромбоопасности у больных стенокардией
Таблица
Значения полученных показателей и коэффициенты тромбоопасности у больных стенокардией при поступлении в клинику
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
300
300
300
271
270
360|
210
360
360 t
240«
3601
2341
600J
300
288
270
270
300
288
240
24Н
180
240
3001
360
2104
3601
31С
1804
360
380
138
162
102J
150
120f
144
120t
138
120
102
138
108
2104
1204
1024
138
1324
132
138
1024
1024
135
1024
1901
210
174
120}
150
60 4
1024
180
150
554
46
52
46
604
46
65
50
52
621
554
52
48
601
554
48
48
574
48
574
50
52
564
554
52
48
554
584
52
624
571
551
6,0 9,5 10,0 12, Of
7,0
9,0
14,5
11,0
10,0
7,5
6,0
5,0
5,5
7,0
9,0
10,0
11,0
5,5
7,5
9,0
10,5
12,01
8,5
11,0.
7,5
9,0
10,0
9,0
9,0
12,0V
10,0
9,0
5,0
4,5
3,0
2,5
3,5
4,0
3,5
4,0
3,5
3,5
4,0
,5l
3,5
3,5
2,5,
45
4,0
4,0
4,5
4,51
3,5
3,0
4,0
2,5
3,0
3,0
3,5
2,5
4,0
3,5
3,5
3,5
100
120f
65
92
651
1321
110
90
65 t
83
70
81
651
651
82
91
74
65,1
85
97
1,3
96
80
109
601
60i
551
72
89
71
85
105
1601
170j
150
160J
1801
135
120
120
110
117
100
123
148
130
110
120
111
155
138
120
I, 125 110 110 95 109 102 125 100 110 95
40 44 744 37 67 . 105 47 55 581 504 45 58 35 42 23 26 55 514 424 67 451 654 45t 634 30 48 64 f 41 52 f 60 65 55
2551 260),
245|, 180 .
195
200
240
3501
290),
4051
210
3601
240
3401
310
3201
250}
3701
3901
200
235
3401
3451
240
200
220
260 i
3951
235
2701
2501
240
1,5
1,2
0,9V
b3t
2,0
0,91
0,61
2,0
1,8
1,5
1,7
1,0
1,31
0,81
1,7
2,3
1,8
1,
11 1,4 1,7 2,1 1,5 1,21 2,1 2,3 1,7 1,21 0,91 1,8 1,04 1,9 1,3
65
59
118
34
40
130
139
80
79
123
48
212
53
121
32
33
64
155
75
57
42
142
104
65
24
65
127
176
54
162
77
106
СЛ
+ +
+ +
СЯ
-w
Ю
о -J
CD
a
+ +
Значения полученных показателей и коэффициента тромбоопасности у Сольных стенокардией при повторном исследовании (через 7 дней лечения)
ел ел
-J ю
О
-J
CD
| Баллуда В.П | |||
| и др | |||
| Лабораторные методы исследования системы гемостаза | |||
| Томск, 1980, с | |||
| Приспособление для съемки жилетно-карманным фотографическим аппаратом со штатива | 1921 |
|
SU310A1 |
