Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью Советский патент 1992 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, из сырья растительного и животного происхождения.

Пример. Измельчают траву багульника болотного 80 г, чистотела большого 60 г, корни левзеи сафлоровидной 200 г, заливают двумя литрами воды при t 100°C и настаивают на водяной бане в течение 20 мин. После фильтрации полученного извлечения в него добавляют 300 г пчелиного меда, доводят вновь водой t 100°C до 2 л, затем полученный полупродукт заливают в две емкости. В первую, большей вместимостью (5/6 частей полупродукта), опускают отрицательно заряженный электрод, а во вторую, меньшей вместимостью, емкостью (1 /6

часть полупродукта) - положительно заряженный электрод. Длительность электролиза 2 ч, в течение этого времени происходит полное разделение на фракции (кислую и щелочную) раствора заданной концентрации.

Для осуществления электролиза используют выпрямитель-зарядный агрегат ВАЗ 6-12-6-УУ с напряжением 12 В (электроды алюминиевые, расстояние между электродами 2 см).

На чертеже показана схема электролиза.

Для электролиза берут емкость 1 большей вместимости, брезентовую емкость 2 меньшей вместимости, отрицательно заряженный электрод 3, положительно заряженный электрод 4.

После отключения электрического тока фракции разделяют и исследуют на рН-мет 1CJ

го к ел

ре: щелочную фракцию при -8,75; кислую фракцию при рН - 3,5.

В качестве иммуномодулирующего средства используют щелочную фракцию.

Тестирование препарата in vitro на смешанной культуре лейкоцитов человека.

Исследование выполнено на смешанной культуре лейкоцитов человека, полученных из венозной крови четырех практически здоровых лиц и четырех больных с иммунологической недостаточностью, согласно общепринятой методике, принцип которой состоит в том, что на большинство лимфоцитов теофиллин оказывает тормозящее влияние.

Теофиллинрезистентные Т-лимфоциты, т.е. те, на которые обработка препаратом не влияла, обогащены клетками с хелперной активностью, а теофиллинчувствительные Т-лимфоциты, которые прекращают розет- кообразование после обработки этим препаратом, обогащены клетками с супрессорной и цитоклической активностью.

В связи с этим Е-РОК с теофиллином использовали как простой, быстрый, достаточно хорошо ориентирующий метод для оценки субпопуляций Т-супрессоров и Т-по- мощников в норме и при различных заболеваниях.

Использовались препараты следующей концентрации: цельный препарат в количестве 0,05 мл - 0,05 мл культуры лейкоцитов; разведенный 1:10(0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); разведенный 1:100 (0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); разведенный 1:1000(0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); контроль (среда 199 0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов).

Инкубация лейкоцитарной взвеси в четырех концентрациях препарата и контроле осуществлялась в течение 1 ч. Результаты исследования представлены в таблице.

Из представленных в таблице данных видно, что индекс стимуляции препарата в тесте спонтанного розеткообразования был эффективным (более 10%) по сравнению с контролем в широком диапазоне доз от разведения 1:10 до 1:1000.

На смешанной культуре лейкоцитов у больных иммунозависимой патологией индекс стимуляции был достоверно выше, чем у практически здоровых лиц и составил соответственно 1,3-1,62 и 1,18-1,33. Наиболеевысокиепоказателирозеткообразующей способности Т-лимфо- цитов отмечены в разведениях препарата в диапазоне 1:100-1:1000. Эта закономерность прослеживается у всех восьми наблюдаемых человек.

Анализ активности препарата в тесте теофиллинзависимого розеткообразования свидетельствует о достоверном повышении как теофиллинчувствительных, так и теофиллинрезистивных Т-лимфоцитов.

У больных иммунозависимой патологией индекс стимуляции теофиллинрези- стивных Т-лимфоцитов был более выраженным, превышая аналогичный показатель здоровых лиц на 11% в разведении препарата 1:10, на 28 и 21% соответственно в разведениях 1:100-1:1000.

В то же время отмечалась обратная картина в показателях теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов, которые значительно увеличивались в группе здоровых лиц и менее выражено в группе больных.

Наиболее высокие показатели индексов стимуляции в тесте теофиллинзависимого

розеткообразования выявлены в разведениях препарата 1:100-1:1000, а по теофил- линчувствительным Т-лимфоцитам в разведении 1:100.

Таким образом, можно предполагать,

что для стимуляции теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов необходимо увеличить дозу препарата,

В высоких концентрациях (цельный препарат) происходило снижение индекса

стимуляции на 14% у здоровых лиц и на 12% у больных.

В других разведениях (1:10,1:100,1:1000) снижение индекса стимуляции не зарегистрировано (Р 0,05).

Оценка фагоцитарной активности нейт- рофилов свидетельствует о выраженной стимуляции фагоцитоза в разведении препарата 1:100 как у больных, так и у здоровых лиц,

Менее выраженные сдвиги в процентном содержании фагоцитирующих нейтро- филов выявлены в разведении препарата 1:1000.

Аналогичная закономерность отмечается при анализе фагоцитарного индекса.

Таким образом,тестирование препарата in vitro на смешанной культуре лейкоцитов свидетельствует, что препарат вызывает стимуляцию клеточного иммунитета и фагоцитарной системы.

Наиболее эффективными являются разведения препарата 1:100-1:1000, а для иммунорегуляторных теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов в разведении 1:10.

Кроме этого проводились экспериментальные исследования по изучению токсичности средства, оценке его иммунотропной активности in vivo, действия на хемилюми- несценцию лейкоцитов, а также на хемилюминесценцию лейкоцитов в присутствии вирусов кори и паротита.

Проведенные эксперименты свидетельствуют о том, что препарат, полученный предлагаемым способом, является иммуно- модулятором и практически нетоксичен.

Формула изобретения Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, путем экстракции корневища с корнями левзеи и фильтрации экстракта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности, дополнительно

0

5

экстракции подвергают траву чистотела и траву багульника при следующем соотношении компонентов, г/л:

Трава багульника болотного (Ledum palustre) 40

Трава чистотела большого (Chelidonium majus) 30

Корневища с корнями левзеи сафлоро- видной (Leuzea carthamoldes) 100 экстракцию проводят при 100°С в течение 20 мин, после фильтрации добавляют пчелиный мед 150 г, полученную смесь доводят водой до 1 л и электролизуют в течение 2 ч и отбирают щелочную фракцию.

Использование: изобретение относится к медицине и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирую- щей активностью, из сырья растительного и животного происхождения. Цель - повышение специфической активности средства. Сущность изобретения: экстракции водой при 100°С в течение 20 мин подвергают растительное сырье при следующем соотношении компонентов: трава багульника болотного - 80 г, трава чистотела большого - 60 г, корневища с корнями левзеи сафлоро- видной - 200 г, полученный экстракт фильтруют, добавляют пчелиный мед - 300 г, и полученную смесь электролизуют в течение 2 ч, после чего отбирают щелочную фракцию - целевой продукт. Положительный эффект: полученное средство обладает более выраженной иммуномодулирующей активностью, чем экстракт левзеи. 1 ил., 1 табл.

Примечай в опытной пробе

и я: Индекс иммуностимуляции определяли путем соотношения показателя по отношению к контролю.

- Статистически значимые различия с контролем ,05 - 0,01).