Способ выявления хроматина в лимфоцитах крови на мазках Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммуноцитохимии, и может быть использовано для оценки иммунологического состояния организма.

Цель изобретения - полное выявление хроматина за счет лучшего контраста хроматиновых структур.

Способ осуществляют следующим образом.

Из крови, взятой из пальца, готовят- стандартные мазки. Мазки фиксируют на предметных стеклах в смеси ацетон: этанол 1:1, проводят через гистологическую батарею спиртов с понижающейся концентрацией (96, 70 30°) дистиллированную воду и наносят на них несколько капель раствора антисыворотки к иммуноглобулинам человека, меченной ИТЦ, или раствора моноспецифических антител к определенному классу иммуноглобулинов человека, меченных ФИТЦ в рабочем разведении.

Мазки помещают во влажную камеру и оставляют в термостатируемом шкафу при 37°С на 30 мин, после чего отмывают дважды по 15 мин физиологическим раствором и проводят флуорохро- мирование раствором бромистого этидия на физиологическом растворе, забуференном 0,01 М трис НС1 (рН 8) в течение 10 мин и снова отмывают физиологическим раствором 1 мин. Для , измерения интенсивности люминесценции флуорохромированных лимфоцитов препарат помещают на предметный столик микроскопа-цитофлуориметра с фотометрической люминесцентной насадкой и цифровым вольтметром. Люминесценцию возбуждают светом с длиной волны 436 нм. Интенсивность люминесценции измеряют при длине волны 615 нм,

Цитофлуориметром измеряют Интенсивность люминесценции: 20 лимфоци

,тов, Hecyujnx поверхностные иммуноглобулины, отличаются от остальных характерным зеленым свечением мембраны и 20 лимфоцитов, не имеющих иммуно- глобулиновых детерминант, и находят средние значения, выраженные в относительных единицах На мазках, обработанных растворами моноспецифических антител к , IqC, , или , меченных ФИТЦ, определяют интенсивность люминесценции 1дА-, IgC-, I9M-, или 19Е - положительных лимфоцитов соответственно.

Активность хроматина лимфоцитов в норме М±т (оценена в группе,состоящей из 10 здоровых человек) состав ляет: 23,701:0.71 отн.едс у Т-Г- клеток; 2,50±1,02 отн,ед у И - клеток.

Пример 1. Больной П„, 50 лет, Диагноз при поступлении: смешанный цирроз печени, портальная гипертен- зияс В анализе крови: лейкоциты 7,6 10Ч/л, лимфоциты - 27%, СОЭ - 31 мм/ч о В иммунологическом профиле крови: Т-лимфоциты - 59%, В-лимфо- циты - 21%.

При проведении цитохимического анализа выявлено, значительное подавление активности хроматина как в субпопуляции Iq- лимфоцитов, так и it - лимфоцитов. Значения -интенсивности их люминесценции составляли 13,86 и 8,53 отн.еДо, соответственно, что ниже нормы на М,5% и 65,2%.

При дальнейшем обследовании больного установлен диагноз первичного рака Печени. Лапароскопически установле наличие множественных метастазов

П р и м е р 2„ Больной Б0, 7лет. Диагноз при обследовании: хронический абструктивный бронхит с астматическим компонентом, эмфизема легких, диффузный иневмосклероз ДН I-II. В периферической крови - лейкопения

0

,

5

5

(3,6 1 (Р/л). В иммунологическом профиле: Т-лимфоцит ы - 50%, В-лимфоци- ты - 22%„

При цитохимическом анализе субпо-. пуляций лимфоцитов активность хроматина L, - клеток находилась в пределах нормы и составляла 21,30 отн0ед,, тогда как функциональная активность хроматина 1 - лимфоцитов, оцениваемая по интенсивности их люминесценции, была снижена по сравнению с нормой на 7,8% и составляла 12,3В отн.еДо Больной прошел курс симптоматического лечения, после чего отмечалась нормализация этого показателя.

Способ повышает точность за счЈт исключения диссоциации хроматина и более полного связывания красителя путем проведения флуорохромирования в 10 М растворе бромистого этидия, приготовленного на забуференном физи- ологичес.ком растворе, а также за счет проведения отмывки препаратов от неспецифически связанного краси- | теля с Кроме того, способ сокращает (время флуорохромированияо

Формула изобретения Способ выявления хроматина в лимфоцитах крови на мазках путем их фиксации и окрашивания в растворе бромистого этидия с последующим спект рофлуорометрическим исследованием, отличающийся тем, что, с целью полного выявления хроматина за счет лучшего контраста хроматино- вых структур, мазки до окрашивания обрабатывают раствором люминисцирую- щих антител к иммуноглобулинам, а для окрашивания используют раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М трис НС1, при этом окрашивание проводят в течение 10- 15 мин о

Изобретение относится к медицине, а именно к иммуноцитохимии. Цель - более полное выявление хроматина за счет лучшего контраста хрома - типовых структур. Мазки крови до окрашивания обрабатывают раствором лю- минисцирующих антител к иммуноглобулинам, а для окрашивания используют 10 М раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М трис НС1, при этом окрашивание проводят в течение 10-15 мин. Способ значительно повышает точность и позволяет дифференцировать виды клеток.