Способ прогнозирования развития послеоперационных воспалительных осложнений у детей с врожденными пороками сердца Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно X кардиохирургии, и может быть использовано для прогнозирования развития послеоперационных осложнений у детей с врожденными пороками сердца.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

У пациентов с врожденными пороками сердца кровь берут натощак из локтевой вены в пробирку с гепарином из расчета 25 ед/мл на 1 мл крови. Лимфоциты выделяют из полученной гепаринизированной крови центрифугированием в градиенте плотности (1,077 г/см3 фиколлпака) Ortho (Швеция). Выделенные клетки дважды отмывают охлажденным (4° С) забуференный фосфатами (рН 7,2) физиологическим раствором в течение 10 мин при 1500 об/мин. Затем готовят рабочую концентрацию 3x106 клеток в 1 мл забуференном фосфатами физиологическом растворе. Реакцию проводят на предметных стеклах, предварительно отмытых и обезжиренных, покрытых 0,01%-ным раствором поли-1 -лизина (мол.масса 40-80 тыс. дальтон) в забуференном фосфатами физиологическом растворе. На стекло со слоем поли-Ышзина наносят 0,05 мл приготовленной суспензии лимфоцитов. Клетки осаждают на стекле во влажной камере в течение 15-20 мин при 37° С. После отмыв1

ки мазков Т-клетки и их субпопуляции определяют непрямым иммунофлюоресцентным методом. Для чего наносят 50 мкл мышиных моноклональных антител к рецепторам CD5+r CD4+, CD8+ (соответственно: для выявления общего количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов, и Т-супрессоров) в заранее подобранных рабочих разведениях. Мазки инкубируют в течение 20-30 мин при 4° С. Затем наносят на 50 мкл кроличьего анти- мышинного глобулина, меченного флюорес- цин тиоционатом (ФИТЦ) (Sevac ЧССР), разведенного 1: 50 в забуференном фосфатами физиологическом растворе с последующей инкубацией в течение 30 мин при 20° С. В-лимфоциты и их субпопуляции определяют прямым иммунофлюоресцентным методом с помощью машинных моноклональных антител к иммуноглобулинам классов М, G, А человека, меченных ФИТЦ (Sevac ЧССР). На мазок лимфоцитов, приготовленный, как описано выше, наносят 50 мкл соответствующего моноклонального антитела в забуфе- ренный фосфатами физиологическом растворе с последующей инкубацией во влажной камере в течение 40 мин при 20° С. Препараты исследуют в люминисцентном микроскопе, оснащенном фазово-контроль- ным устройством (ЛЮМАМ-НЗ). Вначале при фазовом контрасте подсчитывают общее количество клеток в поле зрения, а затем определяют число светящихся клеток в спектре возбуждения люминисценции. Учитывают клетки, имеющие кольцевое по типу колец или шапочек, свечение. Диффуз- но-окрашенные клетки (погибшие) не учитывают. Процент Т- м В-лимфоцитов и их субпопуляций определяют после подсчета 200-300 клеток в препарате. Уменьшение общей субпопуляции периферических Т- лимфоцитов (CD54) менее 25% (в абсолютных цифрах (абс.) менее 0,6x10 /л) и при содержании общей субпопуллции В-лимфоцитов меньше 9% (абс меньше 0,2х109/л) с коэффициентом отношения Т-хелперов (CD44) к Т-супрессорам (CD84) меньше 0,9 свидетельствует о прогнозе на осложненный послеоперационный период. Содержание общей субпопуляции Т-лимфоцитов (CD54) больше 40% (абс. больше 1,1хЮ9/л) и при содержании общей субпопуляции В- лимфоцитоо больше 12% (абс. больше 0,2x109/л) с коэффициентом отношения Т- хелпероз к Т-супрессорам (соответственно CD4+ с CDS4) больше 1,1 дает прогноз на гладкий послеоперационный период.

Способ иллюстрируют следующими примерами.

П р и м е р 1. Больная Ц., 5 лет. Клинический диагноз: врожденный порок сердца,

дефект межпредсердной перегородки, недостаточность митрального клапана, легочная гипертензия 2-й степени (38 мм рт.ст.) по классификации ИССХ им. Бакулева.

До операции: общий анализ крови и биохимические анализы без патологических изменений. Посев крови стерилен. Содержание субпопуляции Т-лимфоцитов: общая (С05) 21% (абс. 0,55х109/л). Соотношение

0 Т-хелперов (CD44) и Т-супрессоров (CD84) О J. Содержание субпопуляции В-лимфоцитов: общая pan В+6% (абс. 0,2x109/л). Производительность сердца снижена: сердечный индекс 1,8 л/мин.м . Отмечалась

5 достоверная.корреляция между гемодина- мическими (низкий сердечный индекс) и иммунологическими нарушениями (низкий иммунорегуляторный индекс), что указывало на возможность развития осложнений в

0 послеоперационном периоде. Согласие родителей на операцию получено.

14.02.89 г. Проведена радикальная коррекция порока в условиях искусственного кровообращения. Холодовая кардиоплегия.

5 Ушивание дефекта межпредсердного кровообращения - 1ч 30 мин, время пережатия аорты 60 мин. Коррекция порога адекватная. В течение 2 сут - искусственная вентиляция легких, развитие мозговой комы,

0 сердечная слабость 2а-б степени по Лангу- Стражеско, инотропная поддержка. На 3 сут - углубление мозговой комы, септическая кровь. Начата антибактериальная противовоспалительная терапии с учетом чувстви5 тельности микрофлоры антибиотиками широкого спектра действия, детоксикаци- онная, анксиолитическая, антигипоксант- ная терапия. Проводился формированный диурез, коррекция метаболических и воднр0 электролитных нарушений. Проведен сеанс гемосорбции и оксигенобаротерапии, проведена коррекция иммунного статуса с учетом субпопуляционного анализа Т- и В-клеточного звена иммунитета. В резуль5 тате проведенного лечения удалось к 10-м сут послеоперационного периода стабилизировать состояние ребенка и получить положительную динамику течения болезни. Состояние ребенка улучшилось и через ме0 сяц в удовлетворительном состоянии он был выписан по месту жительства. При повторном осмотре через 6 мес состояние удовлетворительное, посещает детский сад.

Данный пример иллюстрирует пато5 генетическую зависимость гемодинамиче- ских нарушений, развивающихся при врожденных пороках сердца, с нарушениями иммунного гомеостаза, что может служить ценным дополнением к клиническим методам предоперационного обследования

и определения групп риска развития послеоперационных осложнений.

П р и м е р 2. Больной С., 8 лет. Клинический диагноз: врожденный порок сердца, открытый артериальный проток, недоста- точность кровообращения - 0, давление в легочной артерии 18 мм рт.ст.

До.операции: общий анализ крови и биохимические анализы без патологических изменений. Посев крови стерилен. Содер- жание Т-лимфоцитов: общая (CD54) 44% (абс. 1,3x109/л).-Соотношение Т-хелперов (CD44) и Т-супрессоров (CD84) - Г,4. Содержание субпопуляции В-лимфоцитов: общая pan В+19% (абс. 0,35хЮ9/л). Производи- тельность сердца удовлетворительная - сердечный индекс 3,8 л/мин.м. что указывало на отсутствие осложнений в послеоперационный период.

20.12.89 г. Проведена радикальная коррекция порока. Левосторонняя переднебо- ковая торокотомил, ревизия аорты, ушивание открытого артериального протока. Выписан из отделения на 10-е сут после операции.

Предлагаемым способом обследовано более 30 больных с различными врожденными пороками сердца, в том числе 6 с тетрадой Фалло, 4 - с дефектом межжелудочковой перегородки, 4 - с дефектом межпрёдсердной перегородки, 11 - с открытым артериальным протоком, 7 - с ко- арктацией аорты. Полученные данные свидетельствуют о наличии корреляции между содержанием в периферической крови субпопуляций Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, соотношением Т-хелперов (CD44) и Т-супрессоров (CD84) и течением послеоперационного периода.

Прогнозирование развития осложнений в послеоперационном периоде у детей

0 5

0

5

0

5

.0

с врожденными пороками сердца было правильным в 86% случаевло известному 65%, т.е. увеличение точности составляет 21 %.

Результат исследования становится известен в течение 3 ч от момента забора крови у пациента.

Формула изобретения

Способ прогнозирования развития послеоперационных воспалительных осложнений у детей с врожденными пороками сердца, включающий забор крови, выделение лимфоцитов и определение количества Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, Т- лимфоциты определяют с помощью моно- клональных антител, дополнительно с помощью моноклональных антител определяют количество В-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-супрессоров. вычислят соотношение Т- хелперов к Т-супрессорам и при относительном содержании Т-лимфоцитов ниже 25% или при их абсолютном содержании ниже 0,2хЮ9 на 1 л крови, при относительном содержании В-лимфоцитов ниже 9% или при их абсолютном содержании ниже 0,2хЮ9 на 1 л крови и при коэффициенте соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам ниже 0,9 прогнозируют развитие послеоперационных воспалительных осложнений, а при относительном количестве Т-лимфоци-. тов больше 40% или при их абсолютном количестве выше 1,1x10 на 1 л крови, при относительном содержании В-лимфоцитов выше 12% или при их абсолютном содержании свыше 0,2х109 на 1 л крови и коэффициенте соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам свыше 1,1 прогнозируют благоприятное течение послеоперационного периода;

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования развития воспалительных послеоперационных осложнений у детей с врожденными пороками сердца. Цель изобретений-повышение точности способа. У больного производят забор крови, выделение лимфоцитов. С помощью моноклональ- ных антител определяют общее количество Т-клеток, Т-, В-лимфоцитов, Т-супрессоров и Т-хелперов с вычислением соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам и при снижении общего относительного количества Т-лим- фоцитов ниже 25% или пои их абсолютном содержании ниже 0,2x10 на 1 л крови при снижении В-лимфоцитов ниже 9% или при их абсолютном количестве ниже 0,2x109 на 1 л крови, при коэффициенте отношения Т-хелперов к Т-супрессорам ниже 0,9 прогнозируют развитие воспалительных послеоперационных осложнений, а при относительном количестве Т-лимфоцитов больше 40% или при абсолютном их содержании свыше 1,1хЮ9на 1 л крови при относительном содержании В-лимфоцитов выше 12% или при абсолютном их содержании свыше 0,2x109 на 1 л крови и при коэффициенте соотношения Т-хелперам к Т-супрессорам свыше 1,1 -прогнозируют благоприятное течение послеоперационного периода. По сравнению с прототипом точность способа возрастает на 21 %. ел С