СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ В- И Т-ЛИМФОЦИТОВ В МАЗКЕ КРОВИ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к клиническим лабораторным методам.

Известен способ идентификации B- и T-лимфоцитов в мазке крови, предусматривающий инкубацию мазка в парах формальдегида с последующим исследованием препарата в люминесцентном микроскопе.

Описанный в качестве прототипа способ не позволяет получать препараты высокого качества и требует особых условий для обработки мазков (инкубации их в парах формальдегида), что создает определенные методические трудности.

Цель предлагаемого изобретения заключается в упрощении способа и повышении качества препаратов.

Поставленная цель достигается тем, что мазок крови одновременно фиксируется и окрашивается спиртовым раствором хлортетрациклина, подсушивается, заключается в иммерсионное масло и исследуется под большим увеличением в люминесцентном микроскопе.

Отличие предлагаемого изобретения от известного решения заключается в том, что мазок одновременно фиксируется и флуорохромируется в течение 1 мин в 0,01%-ном спиртовом растворе хлортетрациклина, затем подсушивается на воздухе, заключается в иммерсионное масло и исследуется в люминесцентном микроскопе (объектив 90x, светофильтры ФС-1 и ЖС-18).

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, что привело к достижению нового положительного решения. Впервые предложено для идентификации B- и T-лимфоцитов обрабатывать мазки крови спиртовым раствором хлортетрациклина, затем их подсушивать на воздухе, заключать в иммерсионное масло.

Экспериментально установлено, что наилучшие результаты получаются при использовании 0,01%-ного спиртового раствора хлортетрациклина, продолжительности обработки им мазков в течение 1 мин, последующем просушивании последних на воздухе и заключении в иммерсионное масло. С учетом изложенного следует считать заявляемое решение соответствующим критерию "существенные отличия".

Предлагаем конкретные примеры выполнения способа.

Пример 1. У здорового человека берется кровь путем прокола мякоти пальца и используется для приготовления мазков. Последние погружаются на 1 мин в 0,01%-ный спиртовой раствор хлортетрациклина, в результате чего происходит одновременная фиксация и окраска мазков. Затем они слегка подсушиваются на воздухе, заключаются в иммерсионное масло и исследуются в люминесцентном микроскопе (объектив 90x, светофильтры ФС-1 и ЖС-18).

У здорового человека B- и T-лимфоциты дают значительную по интенсивности люминесценцию, более яркую в первых. В B-лимфоцитах в области цитоплазмы и ядра выявляется желто-зеленая люминесценция, в то время как в T-лимфоцитах обнаруживается зеленое свечение цитоплазменного ободка, а центрально расположенное ядро дает слабую люминесценцию либо вовсе не светится.

Интенсивность люминесцентной реакции хлортетрациклина в лимфоцитах можно определять полуколичественным методом (по трехбальной системе) или методом микрофлуориметрии. За один балл принимается слабая по интенсивности реакция, два балла - умеренная, три балла - выраженная люминесценция клеток. При подсчете на 50 клетках выводится средняя величина интенсивности люминесцентной цитохимической реакции хлортетрациклина.

Пример 2. У больного с иммунодефицитным состоянием берется кровь из пальца и используется для приготовления мазков, которые затем обрабатываются раствором хлортетрациклина, подсушиваются, заключаются и микроскопируются, как описано выше. На препаратах отмечается более слабая люминесценция лимфоцитов по сравнению с нормой.

Обоснование преимуществ предлагаемого способа. Предлагаемый способ, в отличие от известного, более прост и удобен (не требует инкубации мазков в парах формальдегида), позволяет получать более яркие и контрастные картины люминесценции в лимфоцитах. Способ может применяться для идентификации субпопуляции лимфоцитов и оценки их функционального состояния, показателем которого может служить интенсивность цитохимической реакции хлортетрациклина. Предлагаемый способ может использоваться в качестве диагностического теста при иммунодефицитных состояниях, его простота и быстрота выполнения позволяют применять способ во время массовых обследований людей, например при медицинских осмотрах на промышленных предприятиях, в экологически неблагоприятных регионах и др. По-видимому, способ получит применение при диагностике некоторых форм лейкозов, прогнозировании исходов и оценке эффективности лечебных мероприятий, касающихся этой группы заболеваний.

Использование: в медицине, в частности в клинической лабораторной диагностике. Сущность изобретения: мазок крови одновременно фиксируется и флуорохромируется в 0,01%-ном спиртовом растворе хлортетрацеклина, после чего его высушивают и исследуют в люминесцентном микроскопе, и при наличии в области цитоплазмы и ядра лимфоцита желто-зеленой люминесценции его идентифицируют как В-лимфоцит, а при выявлении зеленого свечения цитоплазменного ободка и слабой люминесценции или ее отсутствии в ядре - как Т-лимфоцит. Способ прост в исполнении и позволяет повысить качество препаратов.

Способ идентификации В- и Т-лимфоцитов в мазке крови путем его обработки химическими веществами с последующим исследованием в люминесцентном микроскопе, отличающийся тем, что мазок обрабатывают 0,01%-ным спиртовым раствором хлортетрацеклина в течение 1 мин и при наличии под микроскопом в области цитоплазмы и ядра лимфоцита желто-зеленой люминесценции его идентифицирут как В-лимфоцит, а при выявлении зеленого свечения цитоплазменного ободка и слабой люминесценции или ее отсутствии в ядре - как Т-лимфоцит.