Способ получения таннина листьев суммаха, обладающего интерферониндуцирующей активностью Советский патент 1992 года по МПК C07H13/02 

Описание патента на изобретение SU1733436A1

мегосин токсичны и их химико-терапевтический индекс значительно ниже такового предлагаемого вещества. Использование мегосина в качестве индуктора человеческого лейкоцитарного интерферона в больших масштабах препятствует нехватка донорской крови,

Цель изобретения - создание эффективного водорастворимого малотоксичного и относительно дешевого индуктора интерферона из растительного сырья, обладающего этим видом активности как при парентеральном, так и пероральном введении.

Поставленная цель достигается использованием таннина листьев любого из трех видов сумаха (Rhus glabra, Rh.typhina, Rh.coriaria), получаемого экстрагированием листьев 70%-ным водным ацетоном при 50- 55°С с последующей выпариванием водно- ацетонового экстракта, 3-кратной обработкой водного остатка сначала хлороформом в соотношении 1:3, затем этилаце- татом (5 раз) в том же соотношении, высушиванием этилацетатной вытяжки свежепрокаленным сернокислым натрием в те- чение 22-24 ч, концентрированием высушенной и отфильтрованной этилацетатной вытяжки под вакуумом при 38-40°С до небольшого объема и осаждением таннина 4-кратным объемом гексана или петро- лейного эфира. Отфильтрованный осадок, представляющий собой таннин в смеси с другими полифенолами, промывают гекса- ном или петролейным эфиром и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 45-50°С в течение 5 ч, Выход составляет 11-13% от воздушно-сухой массы. Полученный таннин для очистки от сопутствующих полифенолов хроматографируют на колонке с силикаге- лем.

Проведение сравнительное изучение интерферониндуцирующей активности таннина листьев сумаха, госсипола и мегосина (табл.1), а также их токсического и цитоток- сического действия {табл. 2 и 3). Так как таннин листьев сумаха хорошо растворим в воде (госсипол и мегосин в воде не растворимы) при исследовании на животных его растворяли в физиологическом растворе, а при проведении экспериментов с культурами ткани - в питательной среде.

Изучение интерферониндуцирующей активности предлагаемого препарата проводили на культурах клеток различного происхождения, так-как известно, что различные культуры клеток проявляют неодинаковую способность к продукции интерферона. Были использованы перевиваемые линии клеток трансформированных фибробластов мыши L-929, диплоидные клетки фибробластов эмбриона человека М-19 и лимфоцитарные культуры периферической крови человека.

5Как видно из табл. 1. предлагаемый препарат является высокоактивным индуктором интерферона как на культурах фибробластного типа, так и в лимфоцитах крови человека, и его активность значитель- 0 но выше активности госсипола.

По приведенным данным видно, что

таннин сумаха оказался нетоксичным при

максимально растворимых дозах, в то

время как прототип оказался токсичным в

5 дозе 100 мг/кг.

Из табл. 3 видно, что для L-клеток сравнительно менее токсичным оказался предлагаемый препарат, который даже в дозе 100 мкг/мл не оказывал заметного воздей- 0 ствия на культуру клеток в течение 24 ч.

Для установления оптимальныхусловий

экстракции (концентрация ацетона в экстрагенте, температура) были взяты навески

по 20 г. Определение выхода таннина про5 водили по известной методике.

Результаты приведены в табл. 4.

Установлено, что наиболее оптимально соотношение водный концентрат:хлоро- форм 3:1. При соотношении 4:1 извлечение 0 липофильных веществ неполное, что в дальнейшем приводит к осмолению экстракта при осаждении. Соотношение водный кон- центрат:хлороформ 1:1 или 2:1 не дает существенного улучшения качества водного 5 концентрата при значительных затратах хлороформа.

Двухкратная обработка хлороформом водного концентрата не позволяет полностью освободиться от сопутствующих ве- 0 ществ, а проведение четырехкратной обработки излишне; наиболее оптимальным является проведение трехкратной обработки.

Данные зависимости выхода таннина 5 от кратности обработки и соотношения эти- лацетата к водному остатку приведены в табл. 5.

Установлено, что наиболее оптимальным временем высушивания этилацетатной 0 вытяжки безводным сернокислым натрием является 22-24 ч. При меньшем промежутке времени в этилацетатной вытяжке сохраняются следы влаги, и конечный продукт не осаждается при обработке петролейным 5 эфиром или гексаном, более продолжительное высушивание этилацетатной вытяжки сернокислым натрием излишне.

Выявлено, что концентрирование этилацетатной вытяжки лучше проводить при 38-40°С, так как более высокая температура

приводит к изменению конечного продукта, а при более низких температурах затягивается время перегонки, что также приводит к нежелательным изменениям продукта (гидролизу).

Данные о зависимости полноты осаждения таннина от соотношения этилацетатно- го концентрата и петролейного эфира (гексана) приведены в табл.6.

Установлено, что оптимальными уело- виями высушивания конечного продукта является сушка его под вакуумом при 45-50°С в течение 5 ч, Более высокая температура приводит к разложению таннина, а проведение высушивания менее 5 ч недостаточно для полного высушивания,

Пример. Получение таннина.

1 кг воздушно-сухих листьев растения четырехкратно экстрагируют 70%-ным водным ацетоном противоточным способом (модуль 1:10) при 50°С. Полученные экстракты объединяют, ацетон отгоняют под вакуу- мом при 40°С. Водный концентрат обрабатывают в делительной воронке 3 раза хлороформом в объемном соотношении водный концентрат:хлороформ 3:1, затем водный концентрат обрабатывают 5 раз этилацетатом в том же соотношении. Этила- цетатные вытяжки объединяют, сушат свежепрокаленным сернокислым натрием (на 1 л вытяжки 200 г соли) в течение 22 ч. Затем этилацетатную вытяжку фильтруют, этила- цетат отгоняют под вакуумом при 38°С до помутнения раствора и появления светлого налета на стенках колбы и осаждаюттаннин в смеси с другими фенольными соединениями 4-кратным объемом гексана или петролейного эфира. Осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают 500 мл гексана или петролейного эфира и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 45°С в течение 5 ч. Выход препарата (110 г) составляет 11% от веса сырья. Полученный препарат очищают от сопутствующих фенольных соединений с помощью колоночной хроматог- рафии на силикагеле. Выход очищенного таннина (62,0 г) составляет 56% от веса исходного препарата,

Полученный препарат таннина представляет собой аморфный порошок светло- кремового цвета, хорошо растворим в воде, спирте, метаноле, ацетоне, ДМСО, ДМФА, растворим в этилацетате, плохо растворим в диэтиловом эфире, не растворим в хлороформе, гексане, петролейном эфире. Rf 0,53 (ХБ Filtrak, система растворителей н.бута- нол - уксусная кислота - вода 40:12:28);

УФ-спектр (метанол, 0,01) 217,280 нм;

спектр ПМР снят на приборе Х-200 Varian с рабочей частотой 200 МГц: широкий бесструктурный синглет при 8,43 м.д. принадлежит протонам фенольных групп; ароматические протоны остатков галловой кислоты резонируют в области 6,9-7,7 м.д. в виде набора узких сигналов; при 6,36, 6,05, 5,68 и в области 4,25 - 4,70 м,д. с интегральным отношением 1:1:2:3 соответственно расположены сигналы протонов сахарного остатка D-глюкозы. Исходя из интегральной кривой, на один сахарный остаток приходится семь остатков галловой кислоты. Из низкопольного расположения сигналов протонов сахарного остатка следует, что все гидроксильные группы D-глюкозы замещены и, следовательно, в молекуле таннина присутствуют два дигалловых остатка, причем их место присоединения предпочтительнее в положениях 2 и 4 или 3 и 5.

Пример 2. Аналогичен примеру 1, но температура экстракции 53°С, температура концентрирования водно-ацетонового экстракта-43°С, время высушивания этилаце- татной вытяжки 23 ч, температура концентрирования этилацетатной вытяжки 39°С, температура высушивания таннина 48°С. Выход таннина 69,5 г.

Пример 3. Аналогичен примеру 1, но температура экстракции 55°С, температура концентрирования водно-ацетонового экстракта 45°С, время высушивания этилацетатной вытяжки 24 ч, температура концентрирования этилацетатной вытяжки 40°С, температура высушивания таннина 50°С. Выход таннина 78 г.

Пример 4. Определение интерферо- ниндуцирующей активности таннина сумаха (in vitro).

К монослоям клеток L-929, выращенным при 37°С на 96-луночных панелях под стандартным парциальным давлением С02 (5%), добавляли в различных концентрациях раствор таннина сумаха. После 3-часового контакта с препаратом клетки двухкратно обмывали раствором Хенкса и добавляли 100 мл питательной среды, содержащей 2% бычьей сыворотки.

Титры интерферона в культуральной жидкости определяли через 24 ч по подавлению цитопатического действия (ЦПД) текст-вируса (ЕМС) энцефаломиокардита мышей микрометодом на гомологичных культурах.

Данные представлены в табл. 7.

Специфичность интерферона подтверждали определением его термолабильности (прогревание в течение 30 мин при 56°С), кислотоустойчивости и чувствительности к обработке трипсином (0,2 мл 0,25%-кого раствора в течение 30 мин при 37°С).

П р и ме р 5. Определение интерферонин- дуцирующей активности таннина сумаха на белых беспородных мышах (in vivo).

Белым беспородным мышам (вес 10- 12 г) перорально и внутрибрюшинно вводили препарат в различных концентрациях. Для сравнения использовали препараты госсипола и мегосина. Титры интерферона определяли в сыворотке крови мышей через 48 ч после введения препарата. Данные приведены в табл. 8.

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность получения таннина сумаха с высокой интерферониндуцирующей ативностью при значительно меньшей по сравнению с госсиполом и мегосином токсичностью in vivo и in vitro. Кроме того, таннин сумаха в отличие от госсипола и мегосина хорошо растворим в воде, что позво- ляет вводит его животным как парентерально, так и перорально.

Формула изобретения

Способ получения таннина листьев сумаха, обладающего интерферониндицирующей активностью, отличающийся тем, ч го, с. целью повышения активности и снижения токсичности и придания водорастворимых свойств, листья сумаха вида Rhus

glabra; Phus typhina или Rhus coriaria экстрагируют 70%-ным водным раствором ацентона при 50-55°С, экстракт концентрируют, водный концентрат обрабатывают трехкратно хролоформом в объемном соотношении хлороформ: водный концентрат 1:3, затем пятикратно этилацетатом в объемном соотношении этилацетат: водный концентрат 1:3, высушивают этилацетатную вытяжку безводным сернокислым натрием в течение 22-24 ч, концентрируют под вакуумом при 38--40°С, осаждают гексаном или петролейным эфиром при объемном соотношении экстракт:гексан или петролейный осЬио

, высушивают под вакуумом при 4Б- 50°С в течение 5 ч и очищают целевой продукт с помощью колоночной хроматографии на силикагеле.

Т а О л и ц а 1

Похожие патенты SU1733436A1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНОГО ПРЕПАРАТА "ГИПОРАМИН" 1994
  • Толкачев О.Н.
  • Шейченко О.П.
  • Фадеева И.И.
  • Шейченко В.И.
  • Семенова Т.С.
  • Шипулина Л.Д.
  • Вичканова С.А.
RU2098111C1
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1994
  • Шипулина Л.Д.
  • Вичканова С.А.
  • Шейченко О.П.
  • Толкачев О.Н.
RU2118163C1
ЭКСТРАКТ ЛИСТЬЕВ АРОНИИ, ОБЛАДАЮЩИЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2000
  • Ипатова О.М.
  • Прозоровская Н.Н.
  • Прозоровский В.Н.
  • Княжев В.А.
  • Баранова В.С.
  • Груздева А.Е.
RU2171111C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ КОРЫ БЕРЕЗЫ 2008
  • Левданский Владимир Александрович
  • Левданский Александр Владимирович
  • Кузнецов Борис Николаевич
RU2363486C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРАСНОГО ПИЩЕВОГО КРАСИТЕЛЯ ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ 2015
  • Гафизов Гариб Керим Оглы
  • Курбанов Ильгам Салим Оглы
  • Абубекиров Гейбат Шахлар Оглы
  • Гафизов Самир Гариб Оглы
  • Сулейманова Севиль Джаваншир Кызы
RU2627851C2
ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 1995
  • Травкин Олег Викторович
  • Генкин Дмитрий Дмитриевич
RU2103006C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ СУММЫ ТРИТЕРПЕНОВЫХ КИСЛОТ 1991
  • Ралдугин В.А.
  • Шевцов С.А.
  • Щукин Г.И.
  • Ляндрес Г.В.
  • Михеев К.А.
RU2061487C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГОССИПОЛА ИЗ СЫРОГО ЧЕРНОГО ХЛОПКОВОГО МАСЛА 1992
  • Махкамов Хурсанд Мансурович[Uz]
  • Землянская Наиля Рахматуллаевна[Uz]
  • Холодкова Татьяна Павловна[Uz]
  • Розанов Алексей Евгеньевич[Uz]
  • Азизов Азамат Атакузиевич[Uz]
RU2067111C1
Способ комплексной переработки семян масличных и зернобобовых культур 1987
  • Гусакова Светлана Дмитриевна
  • Назарова Инесса Павловна
  • Глушенкова Анна Ивановна
  • Хашимов Дельшад Асымович
  • Алимов Хайрулла Гаппарович
  • Юлдашев Паттах Хаджаевич
SU1500240A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИКОКЦИДИЙНОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ОМОМИЦИНА 1989
  • Иваницкая Л.П.
  • Коробкова Т.П.
  • Дробышева Т.Н.
  • Иванова Т.А.
  • Кудинова М.К.
  • Муренец Н.В.
  • Котуранов П.Н.
  • Воробьева Л.Я.
  • Сазонова Е.М.
  • Ковалев В.Ф.
  • Виолин Б.В.
  • Навашин С.М.
  • Сингал Э.М.
  • Родин С.Д.
SU1684982A1

Реферат патента 1992 года Способ получения таннина листьев суммаха, обладающего интерферониндуцирующей активностью

Изобретение касается производных са- харов, в частности получения таннина листьевсумаха,обладающего интерферониндуцирующей активностью. Цель - повышение активности и снижение токсичности целевого продукта с приданием ему водорастворимых свойств. Процесс ведут экстракцией листьев сумаха вида Rhus glabra, Phus typhina или Phus coriarla 70%-ным водным раствором ацетона при 50-55°С с последующим концентрированием экстракта 3-кратной обработкой концентрата сначала хлороформом, взятым в 3-кратном объемном избытке, затем пятикратно этилацетатом, взятым в 3-кратном избытке, высушиванием безводным Na2S04

Формула изобретения SU 1 733 436 A1

Таблица 3

Количество погибших клеток.

Продолжение табл.3

Таблица 4

Таблица 5

Таблица 6

Таблица 7

П р и м е ч а н и е. На каждую точку брали по 5 мышей.

Продолжение табл.7

Таблица 8

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1992 года SU1733436A1

Садыков А.С., Ершов Ф.И., Новохатский А.С., Асланов Х.А., Ауелбеков С.А, Индукторы интерферона
Ташкент, ФАН, 1978, с.207-208
Индуктор интерферона 1978
  • Садыков Абид Садыкович
  • Ершов Феликс Иванович
  • Асланов Хаким Асланович
  • Новохатский Александр Сергеевич
  • Исмаилов Аминджан Исмаилович
  • Ауелбеков Сейтхан Абдурахманович
  • Биктимиров Лутфимурат
  • Барам Нина Иосифовна
SU721103A1
Устройство для сортировки каменного угля 1921
  • Фоняков А.П.
SU61A1
Природные полифенолы и их производные - противовирусные препараты и индукторы интерферона
Сб.Ташкент, ФАН, 1981, с.3-29, 49-55.

SU 1 733 436 A1

Авторы

Исламбеков Шафкат Юлдашевич

Мавлянов Саидмухтар Максудович

Сайиткулов Аликул Мамаякулович

Исмаилов Аминджон Исмаилович

Каримджанов Акбар Каримджанович

Камаев Фуат Газизович

Ершов Феликс Иванович

Тазулахова Элина Борисовна

Гнатченко Евгений Викторович

Хаидмухамедов Лутфулло Пирмухамедович

Даты

1992-05-15Публикация

1990-01-18Подача