Штамм вируса гриппа А/Япония/1/57(H2N1) для моделирования инфекции у мышей Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

тить, что в естественных условиях мыши резистентны к инфицированию вирусами гриппа.

В настоящее время известны штаммы вируса гриппа А, вызывающие летальную пневмонию у мышей-A/WSN /33/(H1N1), A/PR/8/34 (H1N1). А/СССР/90/77 (H1N1), A/Aichi/2/68 (H3N2). Наиболее известным является штамм A/Aichi/2/68, прошедший более 100 пассажей через легкие мышей и обладающий высокой пневмовирулентно- стью. Вирулентные для мышей штаммы ис- пользуются как для решения задач практического здравоохранения (определение протективных свойств при отборе кандидатов в вакцинные штаммы, изучение активности химиопрепаратов), так и в научных исследованиях.

Указанные аналоги представляют собой штаммы вируса гриппа А с гемагглюти- нином подтипа Н1 или НЗ. Заявляемый штамм А /Япония/ 1 /57 (H2N1) сходен с вышеперечисленными аналогами по существу, но представляет собой новый в антигенном отношении вариант. Штамм относится к вирусам гриппа А с гемагглютинином подтипа Н2. К преимуществам данного рекомбинан- тного штамма относится наличие в его составе нейраминидазы N1, что отличает его от других штаммов с гемагглютинином подтипа Н2 и позволяет устранить влияние ан- тинейраминидазных антител на результаты опытов по выявлению протективных свойств этих штаммов

Цель изобретения - получение вирулентного для мышей штамма вируса гриппа, пригодного для моделирования экспериментальной инфекции.

История получения штамма.

Штамм получен в результате 22 последовательных пассажей через легкие белых мышей массой 6-8 г при интраназальном заражении. При первичном инфицировании в качестве исходного материала использовали неразведенную аллантоисную жидкость, в дальнейших пассажах - 10%-ную суспензию легких белых мышей, забитых через 48 ч после заражения.

Предлагаемый штамм обладает всеми признаками и характеристиками вируса гриппа А и хранится в коллекции лаборатории музейных штаммов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР

(кодовый номер ГКВ 2336). Штамм характеризуется следующими морфологическими, биологическими и антигенными свойствами.

Морфологические признаки. При негативном контрастировании в популяции содержатся вирионы гриппа стандартной

сферической формы со средним диаметром 80-120 мм (75,0%). Имеются также каплеобразные формы (24,0%), большие сферы (1,0%). Следует отметить, что при исследовании 200 частиц в популяции адаптированного к мышам штамма А/Япония/1/57 (H2N1) по сравнению с исходным отмечено увеличение каплеобразных и больших сферических форм с 1,5 до 25,0% (табл. 1),

0 Биологические свойства. Исходный вариант не размножался в легких белых мышей. Однако в ходе пассирования происходит селекция мутантов, приобретших способность размножаться в организ5 ме другого хозяина (мыши), при этом наблюдается изменение инфекционной активности, гемагглютинирующих свойств. Инфекционная активность адаптированного штамма - 7,7 Ig ЭЙД 50/0,2 мл.

0Антигенные свойства По антигенной

композиции гемагглютинина (определяемой в РТГА с поликлональными крысиными сыворотками) адаптированный штамм не отличается от исходного (табл 2) Отмечены

5 различия в способности связываться с мо- ноклональными антителами N 1, N 185, N 342 к гемагглютинину Н2. Показана большая реактивность вирулентного для мышей штамма А /Япония/ 1 /57 взаимодействовать

0 с моноклинальными антителами к М-белку, наибольшие различия установлены для 3 антигенного сайта (табл. 3).

Иммуногенные свойства. Предлагаемый штамм обладает способностью более ак5 тивно вырабатывать антитела у мышей по сравнению с исходными авирулентными для мышей штаммами вируса гриппа.

Патогенность для мышей Адаптированный вирус вызывает выраженные патологи0 ческие изменения в легких, а также гибель мышей в течение 10 сут наблюдения. 50% гибели животных отмечено при интраназальном введении 50 мкл вируса в разведении 105,1, т.е Ig Л Д 50 5,1. Вирулентность

5 адаптированного к мышам штамма равна 1.5.

Физико-химические свойства. При исследовании электрофоретической подвижности белков в ПАГе отмечены минорные

0 вариации для НА- и NP-белков у адаптированного штамма по сравнению с исходным Предлагаемый штамм предлагается использовать для изучения проективных свойств штаммов вируса гриппа А с гемагг5 лютинином подтипа Н2 как человеческого, так и животного происхождения. После иммунизации мышей инактивированными препаратами вируса интраназально вводят адаптированный штамм А /Япония/ 1/57 и определяют уровень защиты.

Таким образом, предлагаемый штамм А /Япония/ 1/57 сходен по способу получения с другими вирулентными для мышей штаммами, однако обладает важной особенностью - он относится к другому антигенному подтипу гемагглютинина (Н2). Эта особенность, наряду с достаточно высоким показателем ЛДбо, является основным преимуществом заявляемого штамма. Использование предлагаемого штамма позволит изучать перекрестные протективные свойства вирусов, относящихся к Н2-подтипу гемагглютинина. Адаптированный к мышам штамм А /Япония/ 1/57 наряду с вирусами гриппа А с гемагглютинином Н1 и НЗ может быть использован для изучения действия различных химиопрепаратов в опытах с экспериментальной гриппозной инфекцией.

Пример. Моделирование экспери- метальной гриппозной инфекции у мышей.

Для оценки протективных свойств различных штаммов вирусов гриппа А с гемагглютинином подтипа Н2, изолированных от человека и птиц, был использован предлага- еимый адаптированный к мышам штамм вируса гриппа А /Япония/ 1/57(Н2М1)

Мышей F(DWR) массой 6-8 г (в каждой группе по 25 шт.) иммунизировали инакти- вированными /3-пропиолактоном (0,015 М конечная концентрация) препаратами вирусов гриппа А (Н2). В работе использовали следующие штаммы: А /Япония/ 1/57 (H2N1), А /Ленинград/ 1468/65 (H2N2). А /Токио/ 3/67 (H2N2), А /утка/ /Германия/ 1215/73 (H2N3), А /утка/ Нью-Йорк / 6686/78 (H2N3), А /шилохвость/ Альберта/

211/80 (H2N3), А /чайка-хохотун/ Нью- Джерси/ 75/85 (H2N9). Для каждого препарата определяли дозу 20 мкг белка/мышь, гемагглютинирующую и инфекционную активности (до обработки /J-пропиолактоном). Через 21 день после предварительного определения титра антител в сыворотках животных каждой группы под легким эфирным наркозом мышам интраназально вводили

по 50 мкл патогенного для них штамма вируса гриппа А /Япония/ 1 /57 в дозе 3 ЛДзо Гибель мышей регистрировали в течение 10 дн. после заражения, затем высчитывали % выживаемости животных. В контрольной

группе животных (получавших плацебо-р-р БСА на физиологическом растворе) гибель животных составляла 100%, В остальных группах эти показатели колебались от 0% до 58,0%.

Сравнительный анализ полученных данных о степени защиты экспериментальных животных, получавших препараты различных вирусов гриппа А (Н2), позволяет судить о перекрестных протективных свойствах вирусов. Суммарный анализ этих результатов, а также данных об антигенной специфичности поверхностных белков, позволяет судить о возможности внедрения в человеческую популяцию вирусов гриппа А

(Н2) птиц, продолжающих изолироваться и в современных условиях.

Формула изобретения Штамм вируса гриппа А /Япония/ 1/57 (H2N1) ГКВ 2336 для моделирования вирусной инфекции у мышей.

Таблица 1

Таблица 2

Использование: медицинская вирусология для моделирования экспериментальной гриппозной инфекции. Сущность изобретения: штамм вируса гриппа А /Япония/ 1 /57 (H2N1). Штамм способен размножаться в легких мышей, вызывать у них летальную пневмонию и относится к антигенному подтипу гемагглютинина (Н2). 3 табл. инфекции, но оно должно быть нетоксичным на всех уровнях его изучения и использования. До момента внедрения научных результатов в клиническую практику необходимо проведение опытов по отбору кандидатов в вакцинные штаммы и скрининг химиопрепаратов. Для этих целей необходимы чувст- вительные к гриппозной инфекции экспериментальные лабораторные модели и вирусы гриппа, способные размножаться в организме восприимчивого хозяина. Широкое практическое использование мышей, их низкая стоимость допускают такие лабораторные исследования, которые были бы невозможны при использовании более редких и дорогих животных, например хорьков, обезьян. Поражения легких, вызываемые вирусом гриппа у мышей, представляют собой вирусную пневмонию, похожую во многих отношениях на вирусную пневмонию у человека. Необходимо отмесл С ч| со сл со о со

Таблица 3