Способ определения стимулирующего действия фармпрепаратов на кислородсвязывающую функцию крови Советский патент 1992 года по МПК G01N33/72 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть использовано для отбора и оценки воздействия фармакологических препаратов на кис лородотранспортную. - функцию крови.

Цель изобретения - повышение экономичности способа и точности определения.

Указанная цель достигается тем, что в качестве пробы крови применяют отмытые эритроциты человека, взвешенные в изотоническом 0,2 М фосфатном буферном растворе с рН 6,0-6,5 в концентрации «10 в 1 л, причем отмытые эритроциты получают из донорской крови со сроком хранения более 21 дня, а оксигенатор в контуре цир-, кулирующей пробы крови выполняют мембранным.

Описываемый способ осуществляется следующим образом.

Из флакона с донорской кровью более 21 дня хранения получают отмытые эритроциты по стандартной методике. Далее эритроцитарную массу помещают в раствор изотонического 0,2 М фосфатного буфера с рН 6,0-6,5 в-кон- . центрации 109в t л. Полученную взвесь эритроцитов разделяют на две или более равных порций, например,, по 100 мл. Одну-из порций вводят в замкнутый контур циркуляции, в котором содержатся насос, оксигенатор и оксигемометр. После заполнения цир- ;куляторного контура Пробой крови, .(взвесь эритроцитов и растворе) меряют имеющийся уровень парциального давления кислорода и оксигемоглси бина. После этого, регулируя скорость вращения насоса, начинают рециркуляцию пробы крови в контуре и одновременно начинают производить пг дачу кислорода в камеру оксигенато 1

оэ со

к

со сд

pa. отделенную от крови полупроницаемой мембраной. За счет регуляции скорости циркуляции пробы крови в контуре и объема подачи кислорода устанавливают последовательно нарастающие уровни парциального давления кислорода и определяют соответствующие им величины оксигемоглобина, строя таким образом зависимость между этими параметрами (кривая диссоциации оксигемоглобина), После этого контур промывают физиологическим раствором и вновь заполняют второй порцией подготовленной пробы крови, в которую добавляют исследуемый фармакологический препарат в нужной дозировке. Далее повторяют процедуру получения зависимости между парциальным давлением кислорода и содержанием оксигемоглобина. После этого сопоставляют зависимости, полученные для обеих порций пробы крови, т.е. исходной и с наличием исследуемого фармакологического препарата. По разнице полученных зависимостей судят о действии данного фармакологического препарата на кислородсвязы- вающую функцию крови. Аналогичным образом может осуществляться подбор доз препаратов.

Пример 1. Отмытые эритроциты из донорской крови 22 дней хранения взвешены в изотоническом 0,2М Фосфатном буферном растворе с рЧ 6,2 в концентрации 109 в 1 л. Весь объем взвеси эритроцитов был разделен на 5 проб по 100 мл. Цир- куляторный замкнутый контур состоял из насоса типа АТ-2 (перфузионный роликовый насос), гемооксиметра фирмы НИХОН КОДЕН Япония и мембранного малопоточного оксигенатора МАГ-01 (экспериментальный образец) с полупроницаемой мембраной Карбоксил-АС. После заполнения контура первой порцией эритроцитарной взвеси производили последовательные измерения содержания оксигемоглобина при наращивании уровня парциального давления кислорода до 3.00 мм рт.ст. Затем циркуляция была прекращена, контур был промыт физиологическим раствором и вновь заполнен порцией эритроцитарной взвеси с добавлением иссле15

20

25

действия, аналогичные предыдущим, по определению кривой диссоциации ок сигемоглобина. Пробы были также повторены при дозах унитиола 0,4; 0,6} 0,8, 1,0 мг на 100 мл эритроцитарной взвеси.

В качестве примеров были выбраны также спедующие препараты: дибазол

IQ (как препарат( повышающий резистент .ность организма), цитохром-С (при-1 меняемый в качестве антигипоксанта). D-пеницилламин (тиолсодержащий анти- оксидант).

Пример 2, Исследования проводили согласно предлагаемому способу и способу-прототипу. Оксигенацию крови проводили при постоянном уровне парциального давления кислорода 250 мм рт„ст.

Диабазол вносили в исследуемую пробу в количестве 0,2, О,, 0,6, 0,8 и 1 мг на 100 мл крови. Подобные концентрации достигаются при пар энтеральном введении препарата пациентам. Ни при одной из перечисленных концентраций препарата уровень оксигемоглобина статистически-досто- верно не отличался от исходного (в

JQ пробе крови без добавления препарата), он колебался в пределах 96-98% (при способе-прототипе) и 61-66% (при данном способе) без какой-либо заметной тенденции.

Цитохром-С добавляли из расчета

35 0,1, 0,2, 0,3, 0,k и 0,5 мг на 100мл пробы крови. Сходные концентрации препарата в крови имеют место при внутривенном его введении в процессе общепринятой методики лечения. Уровень оксигемоглобина в пробах крови при указанных концентрациях цито- хрома-С в ходе оксигенации не поднимался выше исходного на статистически-достоверную величину, он ко& лебался в пределах (при способе-прототипе) и 61-63% (при данном способе).

D-пеницилламин добавляли из расче- та 0,3, 0,6, 0,9, 1,2, 1,5 мг на

100 мл пробы крови. Концентрации такого порядка имеют место при лечении данным препаратом согласно схемам приема, приводимым в Фармакологических справочниках. При спосо40

дуемого фармакологического препарата 5$ бе-прототипе не удалось выявить ста5

5

действия, аналогичные предыдущим, по определению кривой диссоциации оксигемоглобина. Пробы были также повторены при дозах унитиола 0,4; 0,6} 0,8, 1,0 мг на 100 мл эритроцитарной взвеси.

В качестве примеров были выбраны также спедующие препараты: дибазол

(как препарат( повышающий резистент- .ность организма), цитохром-С (при-1 меняемый в качестве антигипоксанта). D-пеницилламин (тиолсодержащий анти- оксидант).

Пример 2, Исследования проводили согласно предлагаемому способу и способу-прототипу. Оксигенацию крови проводили при постоянном уровне парциального давления кислорода 250 мм рт„ст.

Диабазол вносили в исследуемую пробу в количестве 0,2, О,, 0,6, 0,8 и 1 мг на 100 мл крови. Подобные концентрации достигаются при пар энтеральном введении препарата пациентам. Ни при одной из перечисленных концентраций препарата уровень оксигемоглобина статистически-досто- верно не отличался от исходного (в

Q пробе крови без добавления препарата), он колебался в пределах 96-98% (при способе-прототипе) и 61-66% (при данном способе) без какой-либо заметной тенденции.

Цитохром-С добавляли из расчета

5 0,1, 0,2, 0,3, 0,k и 0,5 мг на 100мл пробы крови. Сходные концентрации препарата в крови имеют место при внутривенном его введении в процессе общепринятой методики лечения. Уровень оксигемоглобина в пробах крови при указанных концентрациях цито- хрома-С в ходе оксигенации не поднимался выше исходного на статистически-достоверную величину, он колебался в пределах (при способе-прототипе) и 61-63% (при данном способе).

D-пеницилламин добавляли из расче- та 0,3, 0,6, 0,9, 1,2, 1,5 мг на

100 мл пробы крови. Концентрации такого порядка имеют место при лечении данным препаратом согласно схемам приема, приводимым в Фармакологических справочниках. При спосо0

$ бе-прототипе не удалось выявить ста

Цель изобретения - повышение экономичности и точности способа. Способ заключается в помещении донорской крови в замкнутый контур, содержащий насос, мембранный оксигенатор и оксигемометр измерения в крови оксигемоглобина до и после введения форморепарзта, причем возможно использовать донорскую кровь со сроком хранения более 21 дня.

например, унитиола в количестве 0,2мг на 100 мл циркулирующей массы эритро- цитарной взвеси. Далее производили

тистически-значимых тенденций в изменениях уровня оксигемоглобина крови в процессе оксигенации. Количество

оксигемоглобина в этом случае воз- растало от %% в исходной пробе крови (без препарата) до 98% в пробе с концентрацией D-пеницилламина 1,2 и снижались до 97$ в пробе с концентрацией 1,5 мг/100 мл. При применении предлагаемого способа отмечалось возрастание количества оксигемоглобина от Ъ0% в контрольной пробе до 7В% в| пробе с концентрацией D-пеницилл- амина 0,9 мг/100 мл и снижение до 72% в пробе с концентрацией препарата 1,5 мг/100 мл. Формула изобретения Способ определения стимулирующего действия фармпрепаратов на кисло739295 . 6

родсвязывающую функцию крови, включающий введение пробы крови в замкнутый контур, содержащий насос, оксигенатор и оксигемометр, измерение в крови оксигемоглобина до и после введения фармпрепарата при заданном парциальном давлении кислорода, о т- личающийся тем, что, с це- IQ лью повышения экономичности способа, точности определения за счет физиоло- гичности и стандартизации условий, оксигенатор выполняют мембранным, а в качестве пробы используют суспензию эритроцитов донорской крови со

15

сроком хранения более 21 дня.