Способ определения иммунных нарушений при ревматоидном артрите Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и внутренним болезням, а именно к способам диагностики иммунных нарушений при ревматоидном артрите (РА).

Целью изобретения является повышение точности определения.

Поставленная цель достигается применением НСТ-теста восстановления нитроси- неготетразолия нейтрофилами с использованием индифферентного стимулятора - зимоэана в лекарственных препаратах, используемых в терапии заболевания: иммунодепрессзнта проспи- дина и иммунбмодулятора диуцифона.

Предлагаемый способ реализуется следующим образом.

В индуцированном НСТ-тесте исследуемая реактивность клеток фагоцитарной системы в ответ на стимуляцию препаратами, имеющими разнонаправленное действие на

иммунную систему: иммунодепрессант про- спидин и иммуностимулятор диуцифон.

Реактивы: гепарин 100 ед/мл в фосфатном буфере, фосфатный буфер рН 7.0-7,2, стимуляторы: зимозан г/мл, проспидин г/мл, диуцифон г/мл, 0,2% раствор нитросиний тетразолий (НСТ), метанол, 2% раствор метилового зеленого.

Ход реакции: стенки лунок смачивают гепарином. Для опыта (спонтан.ная реакция) в первую лунку заливают 0,1 мл крови, 0.05 мл буфера и 0.05 мл НСТ.

Стимулированная реакция: вторую лунку наполняют 0,05 мл зимозана, третью 0,05 мл проспидина, четвертую 0,5 мл диуцифона в указанных концентрациях и по 0,05 мл НСТ в каждую лунку. Далее планшет помещают в термостат на 30 мин при 37°С. Через 30 мин из каждой лунки готовят мазки по общепринятой методике и красят их ме- тиленовым зеленым 15 мин Считают в каждом мазке процент клеток, восстановивших

(Л

С

2 с

Сл)

НСТ в диформазан, который в виде синих глыбок откладывается в цитоплазме нейтро- филов, ядра которых окрашены в бледно-зеленый цвет. Вычисляют индекс активации по соотношению количества клеток, восстановивших НСТ в индуцированном и спонтанном тестах.

У 22 больных наблюдалась высокая активность процесса, высокий титр ревматоидного фактора, ЦИК, Ig, внесуставные проявления заболевания, что было оценено как состояние патологической активации В- лимфоцитов, требующее иммунодепрессив- ной терапии, У этой же группы больных в предлагаемом тесте ИА нейтрофилов составили: 7,3-2,2 на проспидин и 2,8-0,3 на ди- уцифон, В 10 таких случаях терапия проспидином была проведена со значительным клиническим эффектом.

П р и м е р 1. Больная М.Н., 48 лет. Поступила в клинику с жалобами на боли во всех суставах, невозможность передвигаться из-за опухоли коленных суставов, утреннюю скованность в течение дня, похудание на 6 кг за месяц. Считает себя больной в течение 3 лет, когда после переохлаждения появились боли и припухлость в мелких суставах кистей. Лечилась стационарно, установлен диагноз РА. Постоянно принимает НПВП, периодически физиолечение. Последнее ухудшение состояния связывает с простудой.

Объективно: состояние средней тяжести, больная не ходит самостоятельно, пита- ние пониженное, кожа и слизистые бледные, иктеричные. Отмечается незначительная дефигурация суставов кистей и коленных суставов за счет экссудативных явлений. Ограничены движения в локтевых и плечевых суставах из-за болей. Увеличены подчелюстные и подмышечные л/узлы до размера 1,5-1,5 см, мягкие, безболезненные, подвижные. Изменений со стороны внутренних органов не обнаружено.

Лабораторные данные: СОЭ 42 мм/ч; Не 8,6; Л 7000 мм3 п 4; с 56; л 27; м 13; СРВ ++; ДРФ-н-; IgA 2Б; IgM 4,0; IgG 16,1.

Рентгенологическая стадия III.

Индекс активации в НСТ-тесте: 1,6; 0,3; 2,8 на зимозан, диуцифон и проспидин соответственно, Гиперреактивй-ый тип нарушения,

Диагноз: РА с системными проявлениями, серопозитивный, активность III, медленно прогрессирующий, II стадия, ФН11.

Проведено лучение проспидином по схеме, НПВП, физиолечение, ЛФК. Состояние улучшилось, исчезли боли в суставах, утренняя скованность, сохраняются незначительное экссудативные явления в коленных суставах, Лабораторные данные: СОЭ 34; СРБ-t-; ДРФ+: IgA 0.1; IgM 1,0: IgG 8,1. У 10 больных с невысокой активностью

процесса, нормальными или чуть измененными иммунологическими показателями на фоне длительной терапии НПВП и глю- кокортикоидами, ИА в индуцированном НСТ-тесте были одинаково высоки как на

0 иммунодепрессанты, так и на стимуляторы иммунитета и составили: 7,5 + 4,5; 2 + 7,7; 7,8+2,8 на диуцифон, проспидин и зимозан соответственно. Такой недифференцированный ответ клеток на эти препараты сви5 детельствует об утрате функциональной пластичности нейтрофилами на фоне длительного подавления синтеза эндогенного кортизола у больных и указывает на необходимость проведения иммуностимуля0 ции. В пяти таких случаях терапия диуцифоном дала значительный клинический эффект.

П р и м е р 2. Больная Ч.А., 45 лет. Поступила в клинику с жалобами на боли в

5 мелких суставах рук, локтевых суставах, чувство утренней скованности в течение 1,5 ч. Считает себя больной 4 года. Заболела после перенесенной ангины, когда появились боли в мелких суставах рук. Лечилась стаци0 онарно, поставлен диагноз: РА. Принимала НПВП и физиотерапию.

Объективно: состояние удовлетворительное, кожа и слизистые розовые, чистые, дефигурация суставов не отмечается, не5 сколько затруднены движения в локтевых суставах из-за болей. Изменений внутренних органов не обнаружено.

Лабораторные данные СОЭ 33; Нв 10,7; Л 6700 мм; п 4; с 58; л 28; м 16; э 4; СРБ++;

0 ДРФ++; ЦИК 0,038; IgA 2, 6; IgM 1,0; IgG 11,1.

Рентгенологически определяется II стадия заболевания.

Диагноз: РА, суставная форма, серопо5 зитивный, активность II, медленно прогрессирующее течение, I стадия, ФНО.

Индекс активации в НСТ-тесте составил: 12,0; 5 и 12,5 на зимозан, проспидин и диуцифон соответственно. Гипореактив0 ный тип нарушения. Проведено лечение НПВП, физиотерапия, ЛФК, диуцифон, по схеме.

После лечения состояние улучшилось, исчезла утренняя скованность, боли в суета

5 вах, восстановилась функция локтевых суставов. Лабораторные данные: СОЭ 24 мм/ч; СРБ--ДРФ+; ЦИК 0,03.

Таким образом, способ позволяет более целенаправленно определять тип нарушения и проводить лечение.

Формула изобретениярофилы крови в НСТ-тесте и при выявлении

Способ определения иммунных нару-активации нейтрофилов только на действие

шений при ревматоидном артрите путем ис-проспидина определяют гиперактивный тип

следования иммуннокомпетентных клетокнарушения, а при равноценном результате

крови, от л ича ю щийся тем, что, с целью5 реакции клеток на проспидин и диуцифон

повышения точности способа, исследуютопределяют гипореактивный тип нарушевлияние диуцифона и проспидина на нейт-ния.

Использование: изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и внутренним болезням, и может быть использовано в оценке иммунологических нарушений при ревматоидном артрите. Целью изобретения является повышение точности определения. Поставленная цель достигается исследованием реактивности нейтрофилов в индуцированном НСТ-тесте с использованием в качестве стимуляторов иммунодепрессантов и иммуномодулято- ров. По характеру стимуляции оценивается состояние иммунитета. Высокая активация клеток только иммунодепрессантами свидетельствует о гиперактивации В-лимфоци- тов, недифференцированная высокая активация клеток иммунодепрессантами и модуляторами иммунитета свидетельствует о гипоактивном типе нарушения.