содержащих сплавов, применяемых в условиях тропиков.
Для получения штамма Tritirachium roseum v Beyma BMKFK3187Д была исследована микрофлора продуктов коррозии металлических об- разцов из алюминиевых сплавов, как не защищенных, так и защищенных консерваци- онными смазочными материалами, проходящими натурные испытания в течение 16 мес. в тропических условиях Республики Куба, Кроме того, были исследованы продукты коррозии деталей из алюминиевых сплавов, входящих в состав технических изделий, эксплуатирующихся в тропиках.
Из различных образцов алюминиевых сплавов, прокорректировавших в результате натурных испытаний в Республике Куба, были выделены различные микромицеты. Наиболее часто на пораженном коррозией сплаве Д16 встречался гриб Tritirachium roseum v. Bey ma. Из 60 образцов сплава Д16 указанный гриб был обнаружен в продуктах коррозии 45 образцов. Наиболее жизнеспособным и агрессивным по отношению к сплаву Д16 оказался предлагаемый штамм Tritiracliium roseum v. Beyma № VI1.
Штамм Tritirachium roseum v Beyma выделен .из продуктов коррозии сплава Д16, находящегося в условиях Республики Куба, в июне 1989 г. Штамм депонирован во Всесо- юзной коллекции микроорганизмов ИБФМ ЛН СССР под номером 87Д.
Культурзльно-морфологические свойства.
Штамм гриба на среде сусло-агар через неделю роста при 20-25°С образует колонии .розового цвета диаметром 3 мм, а при 30- 35°С - колонии диаметром 5-10 мм, т.е. рост замедленный, Обратная сторона колоний темно-коричневого цвета. Конидиеносцы прямостоящие, желтоватые, 300-350x3 мкм, несут 6-7 этажей по 2-3 спороносящие веточки. Спороносящие веточки имеют шиловидную форму с гладким округленным основанием,длиной 20-28 мкм, оканчивают- ся характерной удлиненной тонкой частью, достигающей 40 мкм длины, и имеющей многочисленные мелкие изгибы Конидии возникают го одной на мягких изгибах по всей длине (от основания до верхушки) уд- линейной тонкой части спороносной ветки, иногда числом до 30, сидячие, бесцветные, овальные, 2x2,3-2,6 мкм.
Физиолого-биохимические свойства.
Температурный оптимум роста - 30°С, минимум - 15°С, максимум - 40°С. Штамм хорошо растет на сусле-агаре, среде Чапека, среде БСА (сусло-агар и мясопептонный бульон в соотношении 1:1) при широком диапазоне рН (от 3 до 10) Хорошо способен
расти на консервационных смазочных материалах, на которых чаще всего развивается с бактериями рода Bacillus.
Отношение к источникам углерода: из источников углерода этот штамм лучше всего усваивает консервационные смазочные материалы, наносимые на металлические сплавы, хуже - глюкозу, сахарозу, глицерин, маннит, сорбит, совсем незначительно - крахмал и совсем не усваивает целлюлозу.
Отношение к источнику азота: из источников азота Tritirachium roseum v.Beyma лучше всего усваивает азотнокислый аммоний, хуже - L - аспарагин, DL-аспарагино- вую кислоту, DL- а -лейцин, L-глутамин, мочевину и совсем незначительно -DL- а- аланин, L-глутаминовую кислоту, азотнокислый аммоний и сернокислый аммоний
Антагонистические свойства по отношению к другим культурам, выделенным в тех же условиях, отсутствуют.
Хранить штамм можно в лиофильно высушенном состоянии в стерильных ампулах. Непродолжительное время можно хранить в холодильнике в пробирках с агаризован- ной питательной средой Чапека или сусло- агар Штамм хорошо хранится в пробирках с минеральной средой (состав, г/л КН2Р04 1.0; 0,5; NaN05 3,0, KCI 2,0, вода водопроводная остальное) с минеральным маслом МК-8 в соотношении минеральная среда1 масло 3:2.
Предлагаемый штамм не патогенен.
П р и м е р 1. Выделение штамма.
С пораженных коррозией металлических образцов сплава Д16, экспонировавшегося в натурных условиях Республики Куба, соскабливали стерильным шпателем 0,1 г рыхлых продуктов коррозии сплава, переносили с соблюдением стерильности в ступку, затем измельчали и переносили в чашку Петри с застывшей средой сусло- агар. Помещенные на поверхность питательной среды продукты коррозии алюминиевого сплава тщательно растирали стерильным шпателем по всей поверхности среды сначала в первой чашке, а затем этим же шпателем протирали поверхность среды последовательно во второй-пятой чашках. Чашки закрывали крышками и инкубировали в термостате при 30°С в течение 10-14 сут. По истечении инкубирования в первой чашке наблюдался рост смеси различных микроорганизмов, а в последней преимущественно уже изолированные колонии, из которых небольшое количество спор переливочной иглой переносили в чашки Петри с застывшей средой сусло-агар или .Чапека и также инкубировали при 30° в
течение 10-14 сут. После окончательного пересева, в результате которого была получена чистая культура изолята, проверяли ее чистоту микроскопированием. высевом на питательные среды Чапека, сусло-агар, МПА, БСА (сусло-агар+мясопептонный бульон в соотношении 1:1). Чистую культуру гриба переносили в пробирки с питательной средой Чапека, инкубировали, затем хранили в холодильнике с целью дальнейших ис- пытаний алюминиевых сплавов, в частности сплава Д16 на грибостойкость.
П р и м е р 2, Испытание алюминиевого сплава Д16 на грибостойкость.
Для испытания алюминиевого сплава на грибостойкость нарезали из листового проката алюминиевого сплава Д16 образцы размером 25x15x2 мм. Торцы зачищали наждачной бумагой от заусенцев. Образиы обезжиривали венской известью с по- мощью щеточки, промывали водопроводной водой, промокали фильтровальной бумагой и высушивали в сушильном шкафу при в течение 15 мин. Высушенные образцы взвешивали на весах Sar|orius с точностью до ±0,0002г, заворачивали в Крафт-бумагу и стерилизовали в сушильном шкафу HS61F при 165°С в течение 2 ч.
Подготовленные к испытаниям образцы подвергали исследованию на грибостой- кость контактнь м методом, сущность которого заключается в выдерживании образцов из алюминиевого сплава Д16 на поверхности агаризованной питательной среды, инокулироьанной тест-культурой,
На поверхность питательной среды сусло-агар в чашках Петри помещают одну бактериологическую петлю спор гриба Tritirachium roseum v.Beyma ВКМР-3187Д и растирают равномерно шпателем по всей поверхности питательной среды. Затем чашки Петри на 7 сут ставят в термостат при 30°С. После термостатороеания t когда нз поверхности среды наблюдается сплошной рост мицелия, на его поверхность стериль- ным пинцетом кладут простерилизованные образцы из алюминиевого сплава Д16. Количество испытанных образцов должно быть не менее 5 шт. Контролем служат те же образцы, но помещенные на поверхность стерильной питательной среды, не засеянной тест-кульгурой.
Подготовленные к испытаниям чашки Петри с металлическими образцами помещают в эксикатор, на дно которого налива- ют стерильную дистиллированную воду, за счет чего в эксикаторе поддерживается влажность 96-98% Эксикаторы располагают в термостатной комнате при 30 ±2°С.
Продолжительность экспозиции опытных и контрольных образцов 9 мес.
Аналогичные испытания проводили со штаммом PeniciMium chrysogenum BKMF 3068Д, который использовали в качестве прототипа.
После окончания испытаний чашки Петри с металлическими образцами подвергали стерилизации в автоклаве ВК-75 при давлении 2 атм и температуре 120°С в течение 2 ч. После убивки (стерилизации) металлические образцы очищали от мицелия, питательной среды-- и продуктов коррозии с помощью скальпеля. Окончательно продукты коррозии алюминиевого сплава Д16 удалялись в растворе состава: окись хрома (VI) 20 , ортофосфорная кислота (пл. 1,59) 50 смудм3. температура 80-95°С.
Образцы пинцетом опускали в стакан с горячим раствором в вертикальном положении, выдерживали 1 мин, затем вынимали из раствора, промывали в воде, просушивали и взвешивали
Потерю массы образцов определяли по формуле
5
Ј А™
- 100 % ,
5
Е то 1
где Д т - потеря массы испытуемого образца, г,
Д , где т0 - масса образца до испытаний, г;
m - масса образца после испытаний и удаления продуктов коррозии, г.
Площадь коррозионных поражений определялась наложением на оцениваемую поверхность металлического образца пластины из прозрачного материала с нанесенной на нее сеткой. По результатам измерения коррозионных очагов вычисляли процент коррозионного поражения металлических образцов по формуле
. 1(Ю %i
Ооценк.
где Si - площадь коррозионного очага на лицевой стороне образца, клетки;
5з - площадь коррозионного очага на оборотной стороне образца, клетки;
Зоцен - площадь оцениваемой поверхности клетки.
Грибостойкость материала обратно пропорциональна площади пораженной поверхности образцов.
Измерение глубины коррозионных поражений определяли на металлографическом микроскопе.
Результаты сравниваемых испытаний на грибостойкость образцов из алюминиевого сплава Д16 с использованием в качестве тест-культурLUTaMMOBTritirachlum roseum v.Beyma ВШР-3187Д и Penicillium chrysogenum ВКМР-3068Д представлены в табл 1-3.
Из табл.1 видно, что предлагаемый штамм Tritirachium roseum v.Beyma BKMF- 3187Д в 2 раза увеличивает площадь пораженной поверхности алюминиевых образцов из сплава Д16 при использовании его в качестве тест-культуры для оценки ми- коло ической стойкости сплава Д16 по сравнению с известным штаммом Penicillium сЬгузодепитВШР-ЗОбВД, что говорит о его более высокой коррозионной активности.
Из представленных результатов исследования видно, что предлагаемый штамм гриба в 4 раза увеличивает потерю массы металла по сравнению со штаммом-прототипом ВКМ-3068Д (табл.2) и способствует увеличению глубины коррозионных язв в 3 раза (табл.3).
Контрольные образцы коррозии не
подвергались.
Таким образом, депонированный
штамм гриба Tritirachium roseum v. Beyma
ВКМР-3187Д способен вызвать коррозию
алюминиевого сплава Д16, выражающуюся
в значительной потере массы металла и в увеличении грубины коррозионных язв по сравнению с известным штаммом гриба Penicillium chrysogenum ВКМР-3068Д. Использование предлагаемого штамма гриба
в качестве тест-культуры повышает достоверность испытаний на грибостойкость алюминиевых медь-марганец содержащих сплавов, применяемых в условиях тропиков.
Формула изобретения
Штамм гриба Tritirachium roseum v. Beyma BKM Р-3187Д как тест-культура для оценки микологической стойкости алюминиевых медь-марганецсодержащих сплавов
в условиях тропического климата.
Т а б л и ц а 1
Влияние штаммов мицелиальных грибов на коррозию алюминиевого сплава Д16 после 9
мес испытаний
Таблица2
Влияние штаммов мицелиал ьных грибов на убыль массы образцов из сплава Д16 после 9
мес испытаний.
Влияние штаммов грибов на глубину коррозионных язв образцов из сплава Д16 после
9 мес испытаний.
Т аб л и ц а 3
