Способ концентрирования суспензии вируса Марбург Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской промышленнбсти и касается концентрирования вируссодержащих суспензий в вирусологической практике.

Для концентрирования различных вируссодержащих суспензий широко используются химические и физико-химические методы. К таким методам относятся методы осаждения вирусов из суспензий солями, водорастворимыми полимерами (полиэтиленгликолем), а также бифазными полимер- содержащими системами.

Известен способ концентрирования вируса японского энцефалита путем обработки суспензии вируса сульфатом аммония. Осаждение вируса производится за счет его высаливания солью. Концентрация сульфата аммония в суспензии вируса составляет 20-40%. Эксперименты показывают, что использование вышеуказанных концентраций сульфата аммония для осаждения вируса Марбург приводит к концентрированию суспензии по объему от 10 до 40 раз при отсутствии эффекта концентрирования по биоактивности (биотитру) вследствие высокой инактивации вируса Марбург.

Недостатком этого способа является высокая инактивация вируса Марбург, японского энцефалита и других вирусов в процессе концентрирования сульфатом аммония, а также высокое содержание оса- дителя (соли) в растворе, что требует последующего удаления соли из суспензии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ концентрирования вируса 6eL шенства методом флокуляции. В качестве флокулянта используют водорастворимый неионогенный полимер полиэтиленгликоль (ПЭГ с мол.массой 60000) в концентрации 1-9%. Экспериментальные исследования полиэтиленгликоля, используемого в качестве реагента для осаждения вируса Марбург, показали, что применение вышеуказанных концентраций ПЭГ для осаждения вируса Марбург позволяет увеличить концентрацию вируса не более чем в

2

х| оо

Os

13 раз по биотитру по сравнению с исходной концентрацией вируса.

Недостатком прототипа является инактивация вирусов (Марбург, бешенства) в процессе их осаждения полиэтиленглико- лем, а также довольно высокое содержание ПЭГ в растворе (до 9%, что требует последующего его удаления из суспензии.

Целью изобретения является повышение степени концентрирования вируса Марбург с сохранением его биологической активности.

Цель достигается тем, что согласно способу проводят обработку суспензии вируса водорастворимым полимером с последующим отделением осадка, содержащего концентрат вируса. В качестве водорастворимого полимера используют раствор полиэтилен имина, который добавляют в вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 1-10 -2,СМСГ2%.

Способ реализуют следующим образом.

Суспензию вируса Марбург, полученную стандартным способом культивирования на клетках ЛЭЧ (легкие эмбрионы человека), разливают по 40 мл в б центрифужных пробирок. Водный раствор поли- этиленимина с мол.массой 60000 и концентрацией 10-20% добавляют в вируссодержащую суспензию до получения конечной его концентрации ,. Операцию введения аликвот полиэтилени- мина проводят при комнатной температуре и перемешивании. Суспензию отстаивают не менее 24 ч при 4°С (температура бытового холодильника). После отстаивания над- осадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 1,2 мл раствора Хенкса или другую стандартную среду и ресуспендируют. В зависимости от соотношения объемов исходной вирусной суспензии и среды для ре- суспендирования получают продукт нужной кратности концентрирования. Определение биоактивности ресуспендированного осадка проводят стандартным методом титрова- ния на монослое клеток vero. Биоактивность выражают в бляшкообразу- ющих единицах (БОЕ) на 1 мл суспензии. Способ может быть использован в лабораторных условиях для повышения концентрации по биотитру вируса Марбург, а также в вирусологической практике для получения антигена указанного вируса из его культу- ральных суспензий низких концентраций.

Конкретные примеры выполнения способа при различных концентрациях поли- этиленимина приведены в табл.1.

Анализ табл.1 показывает, что использование водного раствора полиэтиленимина в диапазоне конечных концентраций 1,0 - 2, позволяет сконцентрировать вирус Марбург более чем в 10 раз по титру при сохранении его биоактивности и

полноте осаждения вируса 40-98%. Начальные концентрации раствора полиэтилени- мина существенного влияния на процесс концентрирования не оказывают. Использование конечных концентраций полиэтиленимина менее 1, ведет к снижению полноты осаждения вируса и степени его концентрирования,.Увеличение концентрации полиэтиленимина более 2,0 ведет к значительной инактивации вируса, снижению полноты осаждения и степени концентрирования по титру. Кроме того, экспериментальные данные по хранению концентрата вируса Марбург, полученного вышеописанным способом, при 4°С

(температурь бытового холодильника) свидетельствует о сохранении его биологической активности в течение 1 мес.

Данные по хранению концентрата вируса Марбург, полученного с использованием

полиэтиленимина приведены в табл.2.

Экспериментальные исследования водного раствора полиэтиленгликоля (прототип) в конечной концентрации в суспензии

1-9% для осаждения вируса Марбург показали (табл.3), что концентрацию вируса можно увеличить не более чем в 13 раз по биотитру по сравнению с исходной его концентрацией.

Данные по концентрированию суспензии вируса Марбург с использованием поли- этиленгликоля приведены в табл.3.

Преимуществом предлагаемого способа концентрирования вируса Марбург

(табл.1) по сравнению со способом-прототипом (табл.2) является повышение степени концентрирования вируса в три и более раз с сохранением его биологической активности. При этом концентрация осадителя в

предлагаемом способе ниже, чем в прототипе на два порядка, вследствие чего не требуется дополнительная очистка от осадителя.

Формула изобретения

Способ концентрирования суспензии вируса Марбург, включающий ее обработку водорастворимым полимером с последующим отделением вирусного осадка, отличающийся тем, что, с целью повышения

степени концентрирования вируса с сохранением его биологической активности, к ви- руссодержащей суспензии добавляют 10-20%-ный водный раствор полиэтиленимина до конечной концентрации - .

Тэблица1

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается концентрирования вируссодержащих суспензий в вирусологической практике. Цель изобретения - повышение степени концентрирования вируса Марбург из суспензии с сохранением его биологической активности. Способ включает обработку суспензии химическим реагентом с последующим отделением осадка, содержащего концентрат вируса. В качестве химического реагента используют водный раствор полиэтиленимина, который добавляют в вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 1-10 - 2,0-КГ %.3табл.

Таблица2

Таблица 3