Способ концентрирования суспензии вируса Марбург Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Описание патента на изобретение SU1747486A1

Изобретение относится к медицинской промышленнбсти и касается концентрирования вируссодержащих суспензий в вирусологической практике.

Для концентрирования различных вируссодержащих суспензий широко используются химические и физико-химические методы. К таким методам относятся методы осаждения вирусов из суспензий солями, водорастворимыми полимерами (полиэтиленгликолем), а также бифазными полимер- содержащими системами.

Известен способ концентрирования вируса японского энцефалита путем обработки суспензии вируса сульфатом аммония. Осаждение вируса производится за счет его высаливания солью. Концентрация сульфата аммония в суспензии вируса составляет 20-40%. Эксперименты показывают, что использование вышеуказанных концентраций сульфата аммония для осаждения вируса Марбург приводит к концентрированию суспензии по объему от 10 до 40 раз при отсутствии эффекта концентрирования по биоактивности (биотитру) вследствие высокой инактивации вируса Марбург.

Недостатком этого способа является высокая инактивация вируса Марбург, японского энцефалита и других вирусов в процессе концентрирования сульфатом аммония, а также высокое содержание оса- дителя (соли) в растворе, что требует последующего удаления соли из суспензии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ концентрирования вируса 6eL шенства методом флокуляции. В качестве флокулянта используют водорастворимый неионогенный полимер полиэтиленгликоль (ПЭГ с мол.массой 60000) в концентрации 1-9%. Экспериментальные исследования полиэтиленгликоля, используемого в качестве реагента для осаждения вируса Марбург, показали, что применение вышеуказанных концентраций ПЭГ для осаждения вируса Марбург позволяет увеличить концентрацию вируса не более чем в

2

х| оо

Os

13 раз по биотитру по сравнению с исходной концентрацией вируса.

Недостатком прототипа является инактивация вирусов (Марбург, бешенства) в процессе их осаждения полиэтиленглико- лем, а также довольно высокое содержание ПЭГ в растворе (до 9%, что требует последующего его удаления из суспензии.

Целью изобретения является повышение степени концентрирования вируса Марбург с сохранением его биологической активности.

Цель достигается тем, что согласно способу проводят обработку суспензии вируса водорастворимым полимером с последующим отделением осадка, содержащего концентрат вируса. В качестве водорастворимого полимера используют раствор полиэтилен имина, который добавляют в вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 1-10 -2,СМСГ2%.

Способ реализуют следующим образом.

Суспензию вируса Марбург, полученную стандартным способом культивирования на клетках ЛЭЧ (легкие эмбрионы человека), разливают по 40 мл в б центрифужных пробирок. Водный раствор поли- этиленимина с мол.массой 60000 и концентрацией 10-20% добавляют в вируссодержащую суспензию до получения конечной его концентрации ,. Операцию введения аликвот полиэтилени- мина проводят при комнатной температуре и перемешивании. Суспензию отстаивают не менее 24 ч при 4°С (температура бытового холодильника). После отстаивания над- осадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 1,2 мл раствора Хенкса или другую стандартную среду и ресуспендируют. В зависимости от соотношения объемов исходной вирусной суспензии и среды для ре- суспендирования получают продукт нужной кратности концентрирования. Определение биоактивности ресуспендированного осадка проводят стандартным методом титрова- ния на монослое клеток vero. Биоактивность выражают в бляшкообразу- ющих единицах (БОЕ) на 1 мл суспензии. Способ может быть использован в лабораторных условиях для повышения концентрации по биотитру вируса Марбург, а также в вирусологической практике для получения антигена указанного вируса из его культу- ральных суспензий низких концентраций.

Конкретные примеры выполнения способа при различных концентрациях поли- этиленимина приведены в табл.1.

Анализ табл.1 показывает, что использование водного раствора полиэтиленимина в диапазоне конечных концентраций 1,0 - 2, позволяет сконцентрировать вирус Марбург более чем в 10 раз по титру при сохранении его биоактивности и

полноте осаждения вируса 40-98%. Начальные концентрации раствора полиэтилени- мина существенного влияния на процесс концентрирования не оказывают. Использование конечных концентраций полиэтиленимина менее 1, ведет к снижению полноты осаждения вируса и степени его концентрирования,.Увеличение концентрации полиэтиленимина более 2,0 ведет к значительной инактивации вируса, снижению полноты осаждения и степени концентрирования по титру. Кроме того, экспериментальные данные по хранению концентрата вируса Марбург, полученного вышеописанным способом, при 4°С

(температурь бытового холодильника) свидетельствует о сохранении его биологической активности в течение 1 мес.

Данные по хранению концентрата вируса Марбург, полученного с использованием

полиэтиленимина приведены в табл.2.

Экспериментальные исследования водного раствора полиэтиленгликоля (прототип) в конечной концентрации в суспензии

1-9% для осаждения вируса Марбург показали (табл.3), что концентрацию вируса можно увеличить не более чем в 13 раз по биотитру по сравнению с исходной его концентрацией.

Данные по концентрированию суспензии вируса Марбург с использованием поли- этиленгликоля приведены в табл.3.

Преимуществом предлагаемого способа концентрирования вируса Марбург

(табл.1) по сравнению со способом-прототипом (табл.2) является повышение степени концентрирования вируса в три и более раз с сохранением его биологической активности. При этом концентрация осадителя в

предлагаемом способе ниже, чем в прототипе на два порядка, вследствие чего не требуется дополнительная очистка от осадителя.

Формула изобретения

Способ концентрирования суспензии вируса Марбург, включающий ее обработку водорастворимым полимером с последующим отделением вирусного осадка, отличающийся тем, что, с целью повышения

степени концентрирования вируса с сохранением его биологической активности, к ви- руссодержащей суспензии добавляют 10-20%-ный водный раствор полиэтиленимина до конечной концентрации - .

Тэблица1

Похожие патенты SU1747486A1

название год авторы номер документа
Способ концентрирования вируса Марбург из суспензии 1990
  • Зеленков Валерий Николаевич
  • Солодкий Владислав Валерьевич
  • Василенко Станислав Константинович
SU1747485A1
Способ получения препарата вируса Марбург 1991
  • Фролов Владимир Григорьевич
  • Гусев Юрий Михайлович
SU1808012A3
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЯЩУРНОГО АНТИГЕНА ТИПА О ДЛЯ ИММУНОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ 2002
  • Захаров В.М.
  • Фомина Т.А.
  • Спирин В.К.
  • Гусев А.А.
  • Караулов А.К.
  • Камалова Н.Е.
RU2218398C1
ШТАММ № 1737/ГРУЗИЯ/2000 ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА АЗИЯ-1 ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 2002
  • Захаров В.М.
  • Фомина Т.А.
  • Спирин В.К.
  • Гусев А.А.
  • Камалова Н.Е.
  • Караулов А.К.
  • Михалишин Д.В.
  • Андреев В.Г.
  • Щербаков А.В.
  • Кругликов Б.А.
RU2218397C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ И ДРУГИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫЕ ПРОДУКТЫ 1999
  • Лаурсен Инга
  • Тейснер Берге
RU2197500C2
СПОСОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ВИРУСОВ 1989
  • Дудников А.И.
  • Гусев А.А.
  • Бахуташвили Т.О.
  • Шипилов В.И.
  • Михалишин В.В.
SU1834289A1
ШТАММ № 1734 "ПРИМОРСКИЙ-2000" ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА О ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 2001
  • Захаров В.М.
  • Фомина Т.А.
  • Спирин В.К.
  • Гусев А.А.
  • Кругликов Б.А.
  • Камалова Н.Е.
  • Михалишин Д.В.
  • Караулов А.К.
  • Андреев В.Г.
  • Щербаков А.В.
RU2204599C1
ВАКЦИНА ПРОТИВ ЯЩУРА ТИПА О И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ 2001
  • Михалишин В.В.
  • Улупов Н.А.
  • Лезова Т.Н.
  • Михалишин Д.В.
  • Гусев А.А.
  • Захаров В.М.
RU2212895C2
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ВАКЦИН 1980
  • Гусева Е.В.
  • Гусев А.А.
  • Дудников С.А.
  • Онуфриев В.П.
  • Дудников А.И.
  • Шоршнев В.И.
  • Бондаренко А.Ф.
  • Пронин И.А.
SU991634A1
ВАКЦИНА ПРОТИВ ЯЩУРА ТИПА АЗИЯ-1 И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ 2002
  • Лезова Т.Н.
  • Михалишин В.В.
  • Мамков Н.С.
  • Гусев А.А.
  • Михалишин Д.В.
  • Фомина Т.А.
RU2220744C1

Реферат патента 1992 года Способ концентрирования суспензии вируса Марбург

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается концентрирования вируссодержащих суспензий в вирусологической практике. Цель изобретения - повышение степени концентрирования вируса Марбург из суспензии с сохранением его биологической активности. Способ включает обработку суспензии химическим реагентом с последующим отделением осадка, содержащего концентрат вируса. В качестве химического реагента используют водный раствор полиэтиленимина, который добавляют в вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 1-10 - 2,0-КГ %.3табл.

Формула изобретения SU 1 747 486 A1

Таблица2

Таблица 3

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1992 года SU1747486A1

Кузнецова С.В., Передеряев Н.И., Кузнецов П.П., Игнатьева В.С Очистка и концентрирование вируса бешенства полиэтиленгликолем
- Ветеринария, 1974, NS 9, с.42.

SU 1 747 486 A1

Авторы

Зеленков Валерий Николаевич

Солодкий Владислав Валерьевич

Даты

1992-07-15Публикация

1990-05-29Подача