Способ концентрирования вируса Марбург из суспензии Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается концентрирования вируссодержащих суспензий в вирусологической практике.

Известен способ концентрирования вируса японского энцефалита путем обработки суспензии вируса сульфатом аммония. Осаждение вируса производится за счет его высаливания солью. Концентрация сульфата аммония в суспензии вируса составляет 20-40%. Эксперименты показывают, что использование вышеуказанных концентраций сульфата аммония для осаждения вируса Марбург приводит к концентрированию суспензии по объему от 10 до 40 раз при отсутствии эффекта концентрирования по биоактивности (биотитру) вследствие высокой инактивации вируса Марбург.

Недостатком этого способа является высокая инактивация вируса Марбург, японского энцефалита и других вирусов в процессе концентрирования сульфатом аммоний, а также высокое содержание осадителя (соли) в растворе, что требует последующего удаления соли из суспензии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ концентрирования вируса бешенства методом флокуляции, В качестве флокулянта используют водорастворимый неионогенный полимер полиэтиленгликоль (ПЭГ с мол.массой 60000) в концентрации 1-9%. Экспериментальные исследования полиэтиленгликоля, используемого в качестве реагента для осаждения вируса Марбург, показали, что применение вышеуказанных концентраций ПЭГ для осаждения вируса Марбург позволяет увеличить концентрацию вируса не более чем в 13 раз по биотитру по сравнению с исходной концентрацией вируса.

Недостатком прототипа является инактивация вирусов (Марбург, бешенства) в

2

2

00

ел

процессе их осаждения полиэтиленгли- колем, а также довольно высокое содержание ПЭГ в растворе (до 9%), что требует последующего его удаления из суспензии.

Целью изобретения является повышение степенм концентрирования вируса Мар- бург с сохранением его биологической активности.

Цель достигается тем, что согласно способу суспензию вируса обрабатывают водорастворимым полимером с последующим отделей йем 6садка, содержащего концентрат вируса, в .качестве водорастворимого полимера используют природный полимер хитозан, который добавляют в вируссодер- жащую суспензию в виде водного 1,5-2%- ного раствора до конечной концентрации 5 1 .

Способ реализован следующим образом.

Суспензию вируса Марбург, полученную стандартным способом культивирования на клетках ЛЭЧ (легкие эмбриона человека), разливают по 50 мл в 6 центрифужных пробирок. Водный раствор хитоза- на с начальной концентрацией 1,5-2,0% добавляют в вируссодержащую суспензию до получения конечной его концентрации 5 - 1 . Операцию введения аликвот раствора хитозана проводят при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Суспензию отстаивают при 4°С (температура бытового холодильника) в течение 48 ч. После отстаивания надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендиру- ют Определение биоактивности ресус- пендированного осадка проводят стандартным методом титрования на монослое клеток vero. Биоактивность выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 1 мл суспензии.

Примеры выполнения способа при различных концентрациях хитозана приведены в табл.1,

Анализ табл.1 показывает, что использование хитозана с конечной концентрацией в суспензии менее 5 10 (пример 2) обеспечивает незначительное концентрирование вируса Марбург (в 4 раза) при полноте осаждения около 6%. Увеличение (онцентрации хитозана в вируссодержа- щей суспензии более 1 10 % (пример 5) приводит к увеличению объема осадка при отстаивании, за счет чего значительно снижается степень концентрирования вируса по объему и по титру.

В примерах 2-6 наблюдается полное сохранение биоактивности вируса Марбург. Введение раствора хитозана в конечных концентрациях 5х10 3-1х10 2% в суспензию позволяетсконцентрировать BHDVC более чем в 10 раз по титру. Для концентрирования используют растворы хитозана, имеющие начальную концентрацию до 2 мас.%, Применние больших концентраций хитозана(свыше2%) нецелесообразно из-за повышения его вязкости, что технологически затрудняет работу с этим реагентом. Причем использование растворов хитозана с начальной концентрацией до 2% позволяет

вводить его в малых объемах в суспензию вируса. Так, что проведения концентрирования объем вводимого раствора хитозана не превышает 0,5% от объема концентрируемой суспензии вируса.

Экспериментальные данные по хранению концентрата вируса Марбург, полученного предлагаемым способом, при 4°С (температура бытового холодильника) приведены в табл.2, что свидетельствует о сохранении его биологической активности в течение двух недель.

Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоит в следующем. Экспериментальные исследования водного раствора полиэтиленгликоля (прототип) с конечной концентрацией в суспензии 1-9% для осаждения вируса Марбург показали, что концентрацию вируса можно увеличить не

более чем в 13 раз по биотитру по сравнению с исходной его концентрацией.

В табл.3 приведены данные по концентрированию суспензии вируса Марбург с использованием полиэтиленгликоля.

Преимуществом предлагаемого способа концентрирования вируса Марбург (табл.1) по сравнению со способом-прототипом (табл.3) является повышение степени концентрирования вируса в 3 и более раз с

сохранением его биологической активности. При этом концентрация осадителя в предлагаемом способе ниже, чем в прототипе на два порядка, вследствие чего не требуется дополнительная очистка вируса от

осадителя.

Формула изобретения

Способ концентрирования вируса Мар- бург из суспензии, включающий ее обработку водорастворимым полимером с последующим отделением вирусного осадка, отличающийся тем, что, с целью повышения степени концентрирования вируса с сохранением его биологической ак

тивности, к вируссодержащей суспензии природного полимера хитозана до конечной добавляют водный 1,5-2,0%-ный раствор концентрации 5 10 - 1 .

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается концентрирования вирусосодержащих суспензий в вирусологической практике. Цель изобретения - повышение степени концентрирования вируса Марбург из суспензии с сохранением его биологической активности. Способ включает обработку суспензии вируса Марбург водорастворимым полимером с последующим отделением осадка, содержащего концентрат вируса. В качестве водорастворимого полимера используют природный полимер хитозан, который добавляют в ви- руссодержащую суспензию до конечной концентрации5 10 - 1 10 2%. Хитозан применяют в виде водного раствора с исходной концентрацией до 2%. З.табл.

Контроль-нативная суспензия вируса Марбург.

Таблица I

Таблица 2

Таблица 3