Способ моделирования артрита Советский патент 1992 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к ревматологии.

Известен способ моделирования ревматоидного артрира путем введения живо тным полного адьюванта фрейнда (ПАФ) и бычьего сыворочного альбумина (Б С А). Этот способ основан на том. что БСА образует на фоне иммунного конфликта, вызванного введением ПАФ, положительно заряженные циркулирующие в крови иммунные комплексы (комплексы антиген-антитела), которые осаждаются на отрицательно заряженной суставной поверхности вследствие электростатического взаимодействия и вызывают в Суставе воспалительные изменения. Применение анионного БСА (т. е. при перемене его заряда на отрицательный), не вызывает развития артрита. При использовании катиониэированного БСА (т. е, при усилении его положительного заряда путем метилирования) артрит развивался в большем числе случаев, чем при использовании обычного БСА.

Недостатками известного способа являются невозможность моделирования артрита тяжелой степени, необходимость повторных введений БСА, а также технические трудности, возникающие при синтезе катионизированного БСА, что требует специальной лаборатории и оборудования

Цель изобретения - повышение воспроизводимости тяжелой формы артрита

Способ осуществляют следующим образом.

Животных (крыс) наркотизируют внут- рибрюшинным введением тиопентала (50 мг/кг) и фиксируют на операционном столике. Кожу хвоста у основания и в области голеностопного сустава обрабатывают спиртовым раствором йода трижды, после чего вводят 1%-ный раствор новокаина, по срединной линии рассекают кожу хвоста скальпелем и выделяют на лигатуры хвостоw

fe

М

4

00

S

ую вену, в которую вводят стерильный лектрод. Электрод фиксируют лигатурой, ожу ушивают и обрабатывают спиртовым аствором йода, скальпелем рассекают коу в области голеностопного сустава, иглой прокалывают суставную капсулу и вводят лектрод в полость сустава, который также иксируют. Электрод, введенный а полость устава, подключают к отрицательной клем е электростимулятора, а электрод, введен: ный в хвостовую вену - к положительной клемме. На электростимуляторе устанавливают следующие параметры раздражения: период импульса 8,1 мс (что соответствует частоте 10000 Гц), длительность 30 мкс, амплитуда 0 мА. В основание хвоста вводят 0,1 мг полного адъюванта Фрейнда в две точки и 100 мкс БСА в подушечку задней лапы, включают электростимулятор и, постепенно вращая ручку Сила тока, устанавливают амплитуду стимуляции, которая равна подпйро- говому значению, вызывающему подергивание лапы. По окончании электростимуляции электроды извлекают, рану в области голеностопного сустава ушивают и обрабатывают спиртовым раствором йода. По истечении 14-ти суток крыс декапйтиру- ют, суставы фиксируют в нейтральном формалине, декальцинируют и окрашивают гематоксилин-эозином, толуидиновым синим и по ван Гизону, проводят морфологическое исследование тканей сустава и по наличию воспалительно-деструктивных изменений судят о воспроизводимости способа. -., ,., ,

Пример. Беспородную белую крысу массой 220 г наркотизировали внутрибрю- шинным введением 1 мл 1 %-ного раствора тиопйнталя. Затем животное фиксировали на операционном столике в положении на спине. . - ; „

С помощью измерительной ленты определяли диаметр левого голеностопного сустава, который составил 16,8 см. Медицинским электротермометром ТПЭМ- 1 измеряли температуру кожи в области этого сустава, которая составила 31,8°С. Гиперемии (покраснений кожного покрова) не наблюдалось.

Кожу у оснований хвоста и в области левого голеностопного сустава обрабатывали 5%-ным спиртовым раствором йода трижды. По средней линии хвбста рассекали кожу скальпелем, выделяли вену, под которую подводили две лигатуры. Вену растягивали на лигатурах и пунктировали заранее изготовленным электродом. Последний представлял собой отрезок нихро- мовой проволоки длиной 1,5 см, покрытый бокеритовой изоляцией на всем протяжении за исключением кончика. Противоположный конец электода соединен со шнуром для подключения к электростимулятору. Электрод закрепляли шелковой лигатурой. Кожу в

области левого голеностопного сустава рассекали скальпелем, визуально определяли место входа в суставную капсулу, которую пунктировали иглой. Через иглу внутрь суставной капсулы проводили электрод, аналогичный описанному, который подшивали к коже. Электрод, введенный в полость сустава, подключали к анодной клемме электростимулятора ЭС-50-01. Электрод, ..введенный в хвостовую вену, подключали к

катодной клемме стимулятора. В две точки основания хвоста вводили 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда. В подушечку левой задней лапы вводили 100 мкг бычьего сывороточного альбумина, растворенного в 1 мл

дистиллированной воды.

На ручках управленияэле ктростимулято- ром устанавливали следующие параметры: период импульса 0,1 мс (что соответствует частоте 10000 Гц), длительность 50 мкс, амплитуда стимуляции 0 мкА, Электростимулятор включали и постепенно увеличивали амплитуду до появления подергивания хвоста, после чего амплитуду снижали до под- порогового значения и стимулировали в

течение 2-х ч. По истечении этого времени электростимулятор выключали и извлекали электроды. Раны ушивали и обрабатывали спиртовым раствором йода;

По окончании электростимуляции наблюдали отечность сустава, о чем говорило увеличение его в диаметре до 26,3 см, выраженную гиперемию (+++), местное повышение температуры (до 36°С). Все эти симптомы являются классическими признаками синовиита. , , Крысу помещали в клетку и содержали на стандартной диете в условиях свободного доступа к пище и воде. Через 14.сут животное декапитировали, левый голеностопный сустав извлекали, фиксировали в формалине и декальценировали. Материал заливали в парафин и изготавливали среды, которые окрашивали гематоксилин-эозином, толуидиновым синим и по ван Гизону. Срезы просматривали в микроскопе МБИ-15 и определяли морфологическую степень воспалительных проявлений по критериям ревматоидного артрита у людей.

Морфологически у этой крысы отмечали

утолщение капсулы сустава, явления липоматоза, пролиферацию синовиоцитов с образованием папиллярных ворсин, разрастанием грануляционной ткани с гра- нулемаподобными включениями, наличие большого количества гигантских клеток. Выявлены участки мукоидного и фибрмноидног го набухания, полиферативный эндоваску- лит. В ткани хряща отмечали врастание соединительной и грануляционной ткани в гиалиновый хрящ в виде синовиального паннуса. В костной ткани имело место образование костного паннуса, глубокая деструкция костно-суставного сочленения. Резко выражены остеопороэ, истончение, разрыв костных балок и появление в местах образовавшихся полостей грубоволокни- стой соединительной ткани, разрастания эндоста и периоста. Все эти признаки выражены в значительной степени (++++), что указывало на формирование у животного артрита 111 степени тяжести, т. е. его наиболее тйжелой формы.

Воспроизводимость тяжелой формы артрита достигает согласно предлагаемому способу 100%.

Формула изобретения

Способ моделирования артрира путем парентерального введения полного адъ- юванта Фрейнда и бычьего сывороточного альбумина, о т л и ч а ющ и и с я тем, что, с целью повышения воспроизводимости тяжелой формы артрита, в полость сустава вводят отрицательный, а в периферическую вену - положительный электрод и проводят электростимуляцию серией прямоугольных импульсов постоянного тока частотой 10000

Гц в течение 2-х часов после введения полного адъюванта Фрейндз в основание хвоста и бычьего сывороточного альбумина в подушечку задней лапы.

Изобретение относится к медицине и может быть применено при моделировании артрита. Целью изобретения является повышение воспроизводимости тяжелой формы артрита. Вводят животному бычий сывороточный альбумин и полный адьювант Фрей- нда; имплантируют электроды в полость сустава и хвостовую вену; проводят электростимуляцию; на 14-е сутки животное забивают, ткани сустава исследуют морфологически. Способ позволяет добиться яркой картины альтеративно-пролифера- тивных изменений с выраженной деструкцией тканей сустава в 100% случаев.