Способ диагностики ишемических поражений миокарда у детей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии и может быть использовано для диагностики ишемических поражений миокарда.

Целью изобретения является повышение точности способа диагностики.

Поставленная цель достигается тем, что дополнительно определяют активность фермента пирофосфатазы, отражающего изменения энергетического обмена, путем измерения оптической плотности на спектрофотометре {при длине световой волны 660 манометра) в пересчете в единицах ферментативной активности на литр сыворотки крови по формуле и при наличии значений Е/л, превышающих аналогичные верхние показатели здоровых детей (11.92 мМ/л) диагностирую ранние ишемические поражения миокарда у детей с нарушением ритма и проводимости сердца.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробирку с 1,9 мл буфера (при приготовлении которого берется 5,26 мМ MgCfc (или ) в 50 мМ трис-(оксиметил)-ами- но-метан) HCI, рН 9,0) и 0,1 мл субстрата (при приготовлении которого берется раствор 20 мМ ШцРгОт 10H20) добавляют 0,1 мл отцентрифугированной сыворотки крови (опытная проба). В другую пробирку берется все тоже самое, кроме субстрата, вместо которого вносят 0,1 мл дистиллированной воды (контрольная проба).

Затем проводят инкубацию проб, т.е. опытную и контрольную пробы нагревают в водяной бане при температуре 37°С в течение 10 мин. Реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл. Затем отбирают 0,5 мл инкубационной смеси и к нему добавляют 2,7 мл реактива молибдата аммония, который гоVI

5

00

со со

тоеится следующим образом: 12 г сухого (МН ОбМо7024 растворяют в 800 мл дистиллированной воды, приливают 38 мл концентрированной H2S04, добавляют 22 мл 1 MN32P04 и доливают дистиллированной воды до 1000 мл, и 0,8 мл красителя метилового зеленого, который готовится следующим образом: 600 мг сухого красителя метилового зеленого растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и 1,7 г сухого тритона Х305 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, затем на следующий день оба раствора соединяют в доводят дистиллированной водой до 250 мл. Раствор используют в течение 2 мес. Через 30 с измеряют оптическую плотность (интенсивность развившейся окраски) на спектрофотометре (при длине световой волны 660 нм) против контрольной пробы. Калибровочную кривую строили по раствору К2НРСМ в концентрациях - М (см. график). Активность фермента пирофосфатазы на литр сыворотки крови (Е/л) рассчитывали по формуле:

с ( Аконтр ) 000 мм/

Е .

где Е - активность пирофосфатазы в мМ/л;

(Аоп - Акоитр) - экстинкция разницы опытной и контрольной проб, измеренная на спектрофотометре.

1 л содержит 1000 мл, поэтому умножаем на 1000. Реакция происходит в течение 10 мин и образуются 2 молекулы, поэтому делим на 20.

Нормы диагностических значений активности фермента пирофосфатазы разработаны на основании обследования 17 здоровых детей в возрасте с 3 до 15 лет. Для контрольной группы здоровых детей верхние пределы значений активности фермента пирофосфатазы в сыворотке крови были 11,92 мМ/л (X 7,58; m 1,08; а 4,38) (в пределах 0-12,5).

П р и м е р 1. Больной К.К., 9 лет. Поступил с диагнозом стойкой суправентрикуляр- ной экстрасистолии. Ребенок был обследован по поводу ишемических поражений миокарда. На электрокардиограмме были ишемические изменения зубца Т и сегмента ST. При анализе клинических данных не выявлено органической патологии сердца, кроме нарушения ритма (включая рентгенограмму и эхоскопию сердца). Общепринятое биохимическое исследование сыворотки крови также было в пределах нормы (включая определение лактата - его концентрация 1,98 мМ/л).

Наряду с указанным биохимическим излучением сыворотки крови определяли активность фермента пирофосфатазы следующим образом.

В пробирку с 1,9 мл буфера (при приготовлении которого берется 5,26 мМ MgCf2

или MgSO-i в 50 мМ трис-(окси-метил)-ами- но-метан (HCI, рН 9,0) и 0,1 мл субстрата (при приготовлении которого берется раствор 20 мМ N32.P207 -10 НаО) добавляют 0,1 мл отцентрифугированной сыворотки крови

(опытная проба). В другую пробирку берется все тоже, кроме субстрата, вместо которого вносят 0,1 мл дистиллированной воды (контрольная проба). Затем проводят инкубацию проб т.е. опытную и контрольную

пробы нагревают в водяной бане при температуре 37°С в течение 10 мин. Реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М.

Затем отбирают 0,5 мл инкубационной смеси и к нему добавляют 2,7 мл реактива молибдата аммония (который готовится следующим образом: 12 г сухого (NH4)eMo7O24- 4Н20 растворяют в 800 мл дистиллированной воды, приливают 38 мл концентрированной добавляют 22 мл 1 М

МазР04 и доливают дистиллированной воды до 1000 мл, и 0,8 Мл реактива красителя метилового зеленого, который готовится следующим образом: 600 мг сухого красителя метилового зеленого растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и 1,7 г сухого тритона Х305 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, затем на следующий день оба раствора соединяют и доводят дистиллированной

водой до 250 мл. Раствор используют в течение 2 мес Через 30 с измеряют оптическую плотность (интенсивность развившейся окраски) на спектрофотометре (при длине световой волны 660 нм) против контрольной

пробы. Калибровочную кривую строили по раствору К2НР04 а концентрациях - .

Активность фермента пирофосфатазы на литр сыворотки крови (Е /л) рассчитывали

по формуле:

с „(Aon -Аконтр) 1000 ш

t10

где Е - активность пирофосфатазы в мМ/л; Аоп - Аконтр - экстинкция разницы опыт- ной и контрольной проб, измеренная на спектрометре, равняется 0,28 при длине световой волны 660 нм.

По калибровочной кривой это равняется 1650.

Активность фермента пирофосфатаэы в сыворотке крови согласно форме равняется:

1650 1000 10 -2

82.5 мМ/л.

что превышает показатели группы здоровых детей (11,92 мМ/л).

На основании результатов электрокардиографии, биохимического исследования сыворотки крови (с определением концентрации лактата) и определения активности фермента пирофосфатаэы в сыворотке крови установлены сопутствующие нарушению ритма сердца ишемические поражения миокарда.

П р и м е р 2. Больной. В.В.. 6 лет. Поступил в клинику с диагнозом стойкой суправентрикулярной экстрасистолии. С помощью общепринятых способов исследования (электрокардиография, определение лактата в сыворотке крови) исключены ишемические поражения миокарда. Наряду с общепринятым биохимическим изучением сыворотки крови, определяют активность фермента пирофосфатаэы и производят расчет в единицах ферментативной активности на л сыворотки по формуле. Активность фермента пирофосфатаэы составляла согласно формуле в сыворотке крови:

Е-13ОТу)2-1(Ш в5мМ/л,

что превышает показатели группы здоровых детей (11,92 мМ/л).

На основании результатов определения активности фермента пирофоефатазы установлены сопутствующие нарушению ритма сердца ишемические поражения миокарда.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с известным приведены в таблице.

В таблице приняты обозначения: X - среднее значение; т - ошибка; а- среднее квадратическое отклонение; Р - достоверность; I - изучаемая группа детей с наруше0

5

0

5

0

5

0

нием ритма и проводимости сердца, сопут- ствуемыми ишемическими поражениями миокарда; la - часть больных изучаемой группы, у которых ишемические поражения миокарда установлены при определении активности фермента пирофоефатазы в сыворотке крови; II - больные с нарушением ритма и проводимости сердца при отсутствии ишемических поражений миокарда; II - практически здоровые дети; Р - при сравнении показателей с аналогичными средними значениями практически здоровых лиц.

Из таблицы видно, что в 52.5% случаев (у 31 больного из 59 детей изучаемой группы) ишемические поражения миокарда установлены только с помощью предлагаемого способа диагностики, т.е. когда показатели активности фермента пирофоефатазы превышали верхние границы здоровых детей (11,92мМ).

Предлагаемый способ диагностики представляет возможность выявить ранние ишемические изменения миокарда у детей с нарушением ритма и проводимости сердца. Способ обладает более высокой точностью и простотой определения, что позволяет повторять его в динамике лечения и определить начальную стадию ишемии миокарда.

Формула изобретния Способ диагностики ишемических поражений миокарда у детей, включающий определение лактата в сыворотке крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, дополнительно определяют уровень пирофоефатазы и при значении показателя более 11,92 ммоль/л диагностируют ишемические поражения.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской кардиологии, и может быть использовано для диагностики ранних ишемических поражений миокарда. Цель изобретения - повышение точности способа диагностики. Исследуют биохимически сыворотку крови, определяя активность фермента пирофосфатазы, отражающего изменения энергетического обмена, спектро- фотометрическим методом и при значениях показателей активности, превышающих 11,92 ммоль/л относительно нормы, диагностируют ранние ишемические поражения миокарда у детей с нарушением ритма и проводимости сердца. Способ обладает более высокой точностью по сравнению с прототипом, является простым и позволяет определять начальную стадию ишемии миокарда. 1 табл.