Способ определения иммуноглобулина J @ Е при аллергических заболеваниях Советский патент 1992 года по МПК G01N33/535 

Изобретение относится к медицине, а именно диаг юстике аллергических заболеваний методом иммуноферментного анализа.

Известен способ диагностики аллергических заболеваний иммуноферментным анализом, включающий в себя сенсибилизацию полистмрольного планшета аллергеном с последующим нанесением сыворотки крови больного и антител, меченных перокси- дазой хрена против иммуноглобулина Е.

Недостатком этого способа является продолжительность анализа (4 ч боз учета времени сенсибилизации планшета аллергеном),

Цель изобретения - ускорение анализа.

Цель достигается тем, что в известном способе диагностики аллергических заболеваний иммуноферментным анализом, включающем в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, с последующим нанесением на него сыворотки крови больного, бычьего сывороточного альбумина анти Е антител, меченных пероксидазой хрена. Согласно изобретению перед сенсибилизацией ал- планшет обрабатывают 1%-ным раствором глютарового альдегида.

Влияние концентрации альдегида глю- таровой кислоты на снижение времени анализа представлено в табл. 1

Обработка планшета глютаральдегпдом позволяет сократить время анализа с 4 ч до 40 мин (без учета сенсибилизации планшета аллергеном)

Способ осуществляется следующим образом

Планшеты обрабатываются 1%-ным раствором глютарового альдегида в течение 18 ч при 4°С. Затем в ячейки обработагных планшетов заливают 200 мкл раствора аллергена в концентрации 10-50 мкг/мл в 0,1 М карбонатном буфере,рН 9,6 Сенсибилизация планшета аллергеном проводится в течении 1 ч при 37°С После впгряхиванир

XS

Е«ПЯВ%

растпорз аллергена в пляншет ряскапыпякл 200 мкл 1%-ным раствора бычьего сывороточного альбумина на 10 мин при 37°С После однократного отмывания планшета 0,002 М ФСБ рН 7,4 с 0,05%-ным J а 20 (ФСБ Т в) в каждую лунку планшета вносят Р разведение 1:100 или I, и инкубируют при 37°С в течен fQ мин, а затем отмывают 5 раз (ФСБ Т в) и добавляют соответственно ангп илианти fe AT, меченные нероксидазои хрена (по 200 мкл), инкубируют 10 пин при 37°С и отмывают 7 раз (ФСБ Тв) и вносят 700 мкл субстратной смоги, состоящей из 20 мкг ортофснилендизмин, растворенных в 20 мл 0,02 М цитратно-фосфэгном буфз ре, рН 4,6 Реакцию останавливают через 5-10 мин Vner реакции проводи ся на спектрофотометре при длине волны 492 им.

Представпснчые резулыаты в табл 2 свидетельствуют о гом что предлагаемый метод снижает время анализа о4 ч до 40 мин и повышает чувствительность метода по сравнению и известным способом в два и более раз

Формула изобретения Способ определения иммуноглобулина igC при аллершческпх заболепаниях, включающей сенсибилизацию полистиролыюго ллажмега аллергеном с последующим нанесен нем с и поротки 1фови сольного и антител меренных пероксидазои хрена против igE, о т л и ч а ю щ и и с л тем, HI о, с целью ускорения способа, перед сенсибилизацией аплсп епом планшет обрабатывают 1%- пим раствором глю 3рового альдегида

Т а б л и ц а 1

Использование: изобретение относится к области медицины и может использоваться во всех учреждениях Здравоохранения Цель - ускорение способа Сущность имму- ноферментный анализ, используемый при диагностике аллергических заболеваний, включает в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, нанесение на него сыворотки крови больного и антител, меченных перок: сидэзой хрена против иммуноглобулина Е. Новизна анапиза заключается в обработке планшета перед сенсибилизацией аллергеном 1%-ным раствором глютарового альдегида. Это ускоряет анализ с 4 ч до 40 мин. 2 табл.

ллерген, выделенный из ма- терияла

Домаииная пыль

Молоко

Шерсть кошек

Шерсп собаки

Перхоть

Перо подушки

Х-к

11зпосд пьм 1 мето,д

Результаты 14ФЛ, показатели ОНТК ЮГКОИ sinOIHOCn/l,

чр е 1ЈЈН2лиза 4 ч

О,/ 0,65

0,5

0,45

0,Ь

05Ь

0,32

1 а б л и ц а

Предлагаемый метод

Результаты 14ФА, показагс ли о 1тпческоп плотности, вj емя анализа 10 мин

,0

1,95

1,8

1,9

1,9

,8

2,0