Способ определения кожно-резорбтивного действия химических веществ Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к токсикологии, и может быть использовано для определения кожно-резор- бтивного действия химических веществ.

Кожно-резорбтивное действие можно оценить не только по гибели животных, но и по изменению суммационно-порогового показателя и весу животных.

При изучении всасывания через кожу различных амино- и натросоединений бензольного ряда можно регистрировать на кимографе дыхание и рефлекторное отдергивание конечности в ответ на раздражение индукционным током. Учет времени появления изменений дыхания и двигательных рбг

акций, а также степень их выраженности позволяют сделать выводы о силе токсического действия различных веществ при аппликации их на кожу.

Однако данный метод не является высокочувствительным, обнаруженные изменения проявляются При поступлении в организм большого количества вещества, что сказывается на точности определения пороговых и подпороговых доз.

При изучении всасывания через кожу ряда фосфорорганических веществ определяют угнетение активности холинэстеразы а крови и других тканях.

ч|

сл ел

ч5

ю

Определение активности холинэстера- эы не является интегральным тестом, он специфичен при воздействии фосфорорга- нических соединений, и это ограничивает его применение при изучении кожно-реэор- бтивного действия других веществ.

О кожно-резорбтивном действии вещества можно судить по нарастанию титра антител, реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в модификации Л.А.Ду- евой и Р.В.Беру, реакции Уанье с лизатом цельной крови (Л ЦК) в модификации Н.В.Русакова, методу Ерне в модификации Н.Н.Клемпа рской иНВ Русакова

Несмотря на то, что указанные тесты позволяют определять проникновение микроколичества веществ в организм, они имеют и существенные недостатки: длительность проведения эксперимента составляет не менее 3 недель (период наступления сенсибилизации и образование достаточного количества антител); трудоемкость и значительные материальные затраты. Метод можно использовать только в том случае, если вещества, проникая через кожу, способны вызывать сенсибилизацию организма, что исключает его универсальность и ограничивает использование.

Известен метод определения кожно-ре- зорбтивного эффекта химических соединений с помощью изучения газообмена через кожу,

Недостатком этого метода является то, что мелкие лабораторные животные не пригодны для этого эксперимента. Метод требует наличия камеры, которая предусматривает помещение в нее всего животного, кроме головы Определять кожно-резйрбтивное действие можно только тех веществ, которые обладают большой летучестью. Чувствительность данного метода зависит от степени резорбции веществ через кожу.

Известен также способ определения кожно-резорбтивного действия по клинической картине, вызываемой исследуемым веществом: смертельный исход, время появления и степень выраженности признаков интоксикации, изменение процента прироста массы тела, коэффициентов массы внутренних органов, физиологических, биохимических, морфологических тестов и др.

К недостаткам такого способа относятся трудоемкость, большие материальные затраты и длительность постановкй экспе- римента, токсический эффект часто проявляется только при поступлении больших количеств вещества через кожу, хотя известно, что микроколичества способны вызывать аллергизацию организма и отдаленные

последствия их влияния: отсутствует точность в определении порога кожно-резорбтивного действия.

О кожно-резорбтивном действии судят

и по обнаружению веществ или продуктов их распада в выдыхаемом воздухе

Существенные изменения или задержка веществ в организме делают этот метод мало пригодным для изучения кожно-резорбтивного действия,

Наиболее близок к предлагаемому метод определения кожно-резорбтивного действия по количеству веществ или продуктов их распада, обнаруживаемых в биологической жидкости. Метод дает возможность оп- ределить вещество или продукты его распада в крови и является достаточно точным и эффективным.

Основным недостатком известного метода является его низкая чувствительность. Метод не учитывает скорость выведения химических веществ из организма, их кумуляцию в отдельных органах и тканях, а также превращение этих веществ,

Цель изобретения - повышение чувствительности определения эффекта проникания токсических веществ через кожу. В этих условиях определяется степень и характер токсического действия, состояние свободнорадиального перекисного окисления ли- пидов, биомембран, антиоксидантной системы, процессов биоэнергетики, адаптации и дезадаптации, пороговые и подпоро- говые дозы,

Поставленная цель достигается тем, что согласно известному способу определения эффекта проникания химических соединений через кожу, степень и характер токсического действия устанавливают путем

определения максимума интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови и мочи, обработанных перекисью водорода (0,5%-ный раствор), опытных и контрольных животных. По изменению интенсивности

свечения крови опытных животных судят об эффекте проникания веществ через кожу

П р и м е р 1. Изучен эффект проникания через кожу группы веществ органического

синтеза (простые полиэфиры марок Л-402, 503, 1502, 2502, 703); полиэтиленоксида Мм 400, полиоксипропилентриола М м 500;по- лиоксиэтиленоксипропилендиола М м 1500 и 2500; триглицидилового эфира полиоксипропилентриола М.м. 700 на 150 морских свинках методом регистрации сверхслабого свечения сыворотки крови после нанесения накожных аппликаций. Использовали 20%- ные растворы веществ На протяжении эксперимента регистрировали как развитие

местного, так и признаки общерезорбтив- ного эффектов.

Опытные животные по внешнему виду и поведению не отличались от контрольной группы. На 10-е и 20-е сутки исследовали содержание гемоглобина, эритроцитов, Н- групп, активность каталазы, пероксидазы, церулоплазмина, холинэстеразы, щелочной фосфатазы, аланиновой и аспарагиновой трансаминаз в крови (наиболее чувствительные тесты при воздействии простых полиэфиров). Изменения по этим тестам были обнаружены только на 30-е сутки опыта в сравнении с контролем.

В ходе опыта исследовали интенсивность сверхслабого свечения сыворотки крови опытных животных, которая была повышена по сравнению с контролем уже на 10-е, 20-е. 30-е сутки опыта (555 ±10 опыт, 490± 20 контроль - 10-е сутки; 989±1б контроль - 20-е сутки; 1720 ±55 опыт, 485 ±23 контроль - 30-е сутки). Отмечено увеличение интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови в зависимости of дозы и времени эффекта. Кожно-резорбтивное действие простых полиэфиров с помощью способа регистрации интенсивности сверхслабого свечения было обнаружено на 10-е

0

сутки опыта, тогда как с помощью других тестов эффект проникания удалось установить только на 30-е сутки.

Опыт подтверждает высокую чувствительность предлагаемого способа при изучении кожно-резорбтивного действия химических веществ. По интенсивности свечения можно судить о степени проникания и характере токсического действия вещества.

Формула изобретения

Способ определения кожно-резорбтив- него действия химических веществ на организм животного путем нанесения исследуемых веществ на кожу с последующим исследованием биологической жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, сыворотку крови и мочу животного обрабатывают 0,5%-ным раствором перекиси водорода, измеряют интенсивность сверхслабого свечения сыворотки крови и мочи до и после обработки и по изменению интенсивности сверхслабого свечения определяют кожно-резорбтивное действие химических веществ.

Изобретение относится к токсикологии и может быть использовано для определения резорбтивного действия химических веществ. Цель - повышение чувствительности способа. Сущность включается в том, что 0,2 мл сыворотки крови или мочи лабораторных животных, которым предварительно наносились на кожу растворы изучаемых веществ, вносят в кювету и помещают торцом над ФЭУ-4130 в светонепроницаемую камеру медицинского хемйлюминометра, термо- статируют при 37° С. Затем включают установку, измеряют спонтанное свечение в течение 1-2 мин и добавляют к сыворотке крови 0,5%-ный раствор перекиси водорода. Вспышку сверхслабого свечения регистрируют автоматическим потенциометром в течение 3-5 мин. По интенсивности вспышки и изменению формы кривой свечения сыворотки крови и мочи опытных и контрольных животных определяют эффективность проникания, степень и характер токсического действия химического вещества. Предлагаемый способ является высокочувствительным и по интенсивности свечения дает возможность определить степень проникания и характер токсического действия химических веществ. о Ё