Способ дифференциации риккетсий вида RIккетSIа акаRI от RIккетSIа SIвIRIса Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается идентификации риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ), а именно R. akari и R. slbirica,

Известен способ дифференцирования риккетсий группы КПЛ с применением цельных антигенов и мышиных сывороток. Цельные антигены, т.е. растворимые антигены, не освобожденные от риккетсиальных корпускул, получают из нативных суспензий яичных культур с добавлением фенола (0.5%) и последующей многократной обработкой эфиром и лиофилизацией препарата.

Однако использование овокультур риккетсий для иммунизации белых мышей с целью получения иммунных сывороток приводит к образованию антижелточных антител часто в титрах, превышающих титры специфических антител, что затрудняет серологический анализ. Известна возможность применения диагностикума иммуноглобулинового для выявления риккетсий группы КПЛ в реакции непрямой гемагглю- тинации (РИГА) для обнаружения риккетсий и их антигенов, однако для дифференциации антигенной структуры R. akari от R. stbirica он не применялся.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Для достижения поставленной цели способ предусматривает исследование цельных антигенов риккетсий в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) с диагностикумом иммуноглобулиновым эритроцитарным сухим для выявления риккетсий группы КПЛ, что позволяет дифференцировать антигенную структуру R. akar и R. slbirica.

Сущность способа сводится к тому, что цельные антигены риккетсий исследуют в РИГА в серийных разведениях, начиная с рабочего разведения для РСК. Цельные антигены R, akari в отличие от антигенов R. sibirica в РИГА практически не выявляются.

ч ел о

W

ел

00

Пример. Для постановки РИГА в два ряда лунок планшета для иммунологических реакций вносят серийные разведения антигенов в объеме 0,02Ь мл, физиологического раствора, во второй ряд (контроль специ- фичности в РТНГА) - по 0,025 мл иммунной сыворотки к R. slblrlca. Планшеты встряхивают и выдерживают 15 мин при комнатной температуре, затем в каждую лунку добавляют по 0,025 мл зритроцитарногоиммуног- лобулинового диа гностикума для выявления риккетсий группы КПЛ. Планшеты встряхивают и оставляют на 2-3 ч при комнатной температуре, после чего учитывают результаты. Титром антигена в иссле- дуемом препарате считают максимальное разведение последнего, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитарного диаг- ностикума не менее чем на +++.

Результаты представлены в таблице. Как видно из таблицы, антигенная активность препаратов R. akari в РСК не ниже (1:2-1:4), чем R. stbfrica (1:2), однако в отличие от антигенов R, slblrica (титры в РИГА 1:32-1:128) при постановке РИГА с антиге-

нами, полученными из штаммов R. akarl Каплан и Тогер, выявляли лишь следовые реакции (не более + или ++).

Использование предлагаемого способа позволит осуществлять мониторинг циркулирующих в природе риккетсий группы КПЛ.

Формула изобретения Способ дифференциации риккетсий вида Rickettsla akari от Rlckettsia slblrica, включающий приготовление из исследуемой культуры цельнорастаоримого антигена с последующей постановкой серологической реакции с антителосодержащим препаратом и учетом результатов, отличающий-с я тем, что, с целью повышения точности способа, ставят реакцию непрямой гемагг- лютинации, при этом в качестве антителосо- держащего препарата используют эритроцитарный иммуноглобулиновый ди- агностикум для выявления риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки и при отрицательных результатах реакции культуру идентифицируют как Rickettsia akarl, a при положительных - как Rickettsla slbirica.

Использование: серологические исследования, дефференциальная диагностика, осуществление мониторинга циркулирующих в природе риккетсий группы КПЛ. Сущность изобретения: из исследуемых штаммов выделяют цельнорэстворимые антигены. Активность антигенов титруют в реакции связывания комплемента. Проводят РИГА с иммуноглобулиновым эритро- цитарным диагностикумом для выявления риккетсий группы клещевой пятнистой ли- хорэдчи. При отрицательных результатах РИГА культуру идентифицируют как R. akarl, при положительных результатах- как R. slbirica. 1 табл.