Способ получения иммуностимулятора Советский патент 1992 года по МПК A61K35/00 

Изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, в частности к способам получения иммуномодулирукщих препаратов.

Цель изобретения - повышение эффективности иммуностимулятора.

Способ иллюстрируется следующим образом.

П р и м е р 1. Приготовление препарата.

Готовят водную фазу, при этом 2,5 мл антисептика АСД (фракция 2) разводят в 10 мл физиологического раствора, добавляют аскорбиновую кислоту до рН 6,0-7,5, стерилизуют фильтрованием. Затем готовят масляную фазу- к 30 мл вазелинового масла добавляют 8 г ланолина,смесь автоклавиру- ют при 0,5 атм в течение 30 мин. В масляную фазу вводят водную фазу, смесь эмульгируют энергичным встряхиванием. Готовый препарат представляет собой стойкую светло-желтую эмульсию.

П р и м е р 2. Определение иммуностимулирующей активности препарата с рН G.5 водной фазы.

Определяли уровень Т-лимфоцитов в крови 2-3-месячных телят до и после обработки их иммуностимупятором, полученным по примеру 1. Лимфоциты выделяли в градиенте плотности фиколлверографи- на, отмывали, доводили до концентрации (2-3) х 106 на 1 мл затем к 0,2 мл взвеси лимфоцитов добавляли 0,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, инкубировали, центрифугировали, для фиксации образовавшихся розеток добавляли 0,1 мл 3%-ного раствора глютарового альдегида. Через 20 мин фиксацию прекращали добавлением 5 мл холодной и дистиллированной воды. Нздосздочную жидкость удаляли, осадок ресуспендировали в 0,2 мл воды, наносили на предметное стекло, высушивали, фиксировали и окрашивали азур-П-зози- ном. В полученном препарате подсчитыва Ч

СП

ю

hO

Јь

ли количество розеткообразующих лимфоцитов в процентах.

/ Результаты исследований приведены D таблице.

Для определения количества лизоцима о крови телят применяли турбидиметриче- ский метод. В качестве субстрата использовали ацетоновый порошок. К 1,5 мл взвеси субстрата (10 мг в 20 мл) добавляли 1,5 мл сыворотки крови, разведенной в 10 раз. Смесь инкубировали 30 мин при 37°С. Затем проводили спектрофотометрию суспензии при длине волны 540 им. В качестве контроля использовали такую же суспензию, но не инкубированную. Для определе- ния содержания лизоцима находили разницу экстинций опытной и контрольной проб, по которой на калибровочной кривой устанавливали количество лизоцима.

Оценку функциональной активности нейтрофилов давали по реакции восстановления нитросинеготетрззолия(НСТ-тест). В две лунки планшета вносили по 0,05 мл стабилизированной крови Затем в первую контрольную лунку добавляли 0.0025 мл

изотонического буфера, а во вторую, с исследуемой кровью, добавляли по 0,025 мл 0,1%-ной взвеси зимозана. Затем в обе лунки добавляли по 0,025 мл раствора ИСТ, перемешивали и инкубировали, готовили и окрашивали мазки. Учет реакции проводили на основании анализа нейтрофилов, содержащих темно-синие отложения формазана. Подсчитывали 100 нейтрофилоз, результаты выражали в процентах.

Формула изобретения Способ получения иммуностимулятора, включающий смешивание ингредиентов с различной гидрофобностью, отличающийся тем. что, с целью повышения эффективности иммуностимулятора, в качестве ингредиентов используют антисептик АСД, аскорбиновую кислоту, минеральное масло и эмульгатор, причем предварительно готовят водную фазу антисептика АСД и аскорбиновой кислоты при рН 0,0-7,5. а затем масляную фазу путем разогревания минерального масла и эмульгатора с последующим эмульгированием обеих фаз.

Используют изобретение в области ветеринарной иммунологии, для получения иммуностимулирующего средства. Цель изобретения состоит в повышении эффективности иммуностимулятора. При этом используют а качестве ингредиентов антисептик АСД. аскорбиновую кислоту, минеральное масло и эмульгатор, причем предварительно готовят водную фазу антисептика АСД и аскорбиновой кислоты при рН 6,0-7,5, а затем масляную фазу путем разогревания минерального масла и эмульгатора с последующим эмульгированием обеих фаз. 1 табл.