Способ определения дезадаптации населения к условиям окружающей среды Советский патент 1992 года по МПК C12N9/02 G01N33/68 

Изобретение относится к биохимическим способам определения дезадаптации.

Известен способ определения дезадаптации путем выявления атрофических изменений клеточных структур. Однако данный способ является недостаточно чувствительным, так как выявляемые им изменения характерны для физиологических и патологических процессов.

Известен способ определения неспецифической резистентное™ организма к действию экстремальных факторов внешней среды путем измерения теолдисульфидного отношения в клетках крови. Однако наличие возрастных и суточных колебаний определяемого данным способом показателя, зависимость тиолдисульфидного отношения от гелиофизических и сезонных факторов в физиологических условиях, а также прямое влияние на его величину ряда химических веществ не позволяют использовать данный

тест для определения дезадаптации населения.

Известен способ определения дезадаптации путем измерения конечного продукта перекисного окисления легнидов - малонового диальдегида (МДА) в плазме крови. Однако в способе-прототипе отсутствует корреляция между содержанием МДА в крови и заболеваемостью, что снижает его чувствительность.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

Цель достигается тем, что определяют активность глутатиогредуктазы (ГР) и супер- оксидаисмутазы (СОД) крови и по увеличению ГР одновременно со снижением СОД по сравнению с исходным периодом определяют дезадаптацию.

Способ осуществляется следующим образом.

Забор крови производится у практически здоровых лиц в то же время суток для исключения суточных изменений показатесо С

vi ( со

J

00

VI

тЧлей. Кровь получают путем укола мякоти пальца копьем-скарификатором одноразового пользования. Отбирают 0,05 мл крови в пробирку, содержащую 0,95 мл 0,1 %-ного раствора трилона Б (рн 7,0) и выдерживают в течение 30 мин при +5 ± 7°С, после чего гемолизат используют для определения ГР и СОД.

1.Определение активности глутатион- редуктазы (4).

Реактивы: 1. Буферный раствор трис- HCI 1 М, трилон Б 5 мм, рН 8,0

2.Глутатион окисленный 0,033 М, рН 7,0 3. НАДФ.Н 2 мМ.

Ход определения.

В пробирку вносят 0,15 мл буферного раствора, 0,2 мл гемолизата, 2,2 мл Й20 и 0,3 мл окисленного глутатиона. Смесь инкубируют в течение 10 мин при 37°С, затем добавляют 0,15 мл НАД.Ф.Н и измеряют на спектрофотометре оптическую плотность проб при 340 нм. После этого пробы выдерживают точно 30 мин при 37°С и повторно измеряют оптическую плотность при той же длине волны.

Расчет- дСммоль)Д;3

насчет. А лсек 1800 6,22 0,2

где 3 - объем пробы в мл; 1800 - время в с; 6,22 - коэффициент молярного светопогло- щения; 0,2 - объем гемолизата в мл.

2. Определение активности супероксид- дисмутазы (5)

Реактивы: 1. Буферный раствор К-фос- фатный 5 мМ, 10 мкМ трилон Б, рН 7,8.

2.Буферный раствор глининовый 0,1 М, 0,3 мМ трилон Б, рН 10,4.

3.Раствор адреналина 0,041 %-ный, готовится за 1 ч до определения и подкисляется НС1(1:2)дорН2,5.

Смесь этанола и хлороформа (2,5:1,5).

Ход определения.

0,2 мл гемолизата и 0,2 мл охлажденной смеси этанол-хлороформ вносят в пробирку с предварительно замороженным К-фос- фатным буферным раствором (0,3 мл) и встряхивают в течение 15 мин. Осадок отделяют центрифугированием при 8000 об/мин в течение 15 мин,

В стеклянную пробирку вносят 1,5 мл глицинового буферного раствора 0,5 мл К- фосфатного буферного раствора, 0,4 мл адреналина и 0,1 мл надосадочной жидкости, после чего измеряют изменение оптической плотности при 480 нм на СФ-26 в течение 3 мин. Контрольная проба содержит все ингредиенты, кроме надосадочной жидкости, вместо нее добавляют 0,1 мл Н20.

Расчет: Т% Д у-нД°ПЫТ-- 100.где

)TOUTS ™ ™

где Т% - торможение окисления адреналина в %; А - активность СОД в условиях единицах; 700 - разведение крови.

3. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью

Т-критерия Стюдента (6).

Способ поясняется примером. Пример. Кровь брали у практически здоровых женщин в возрасте 18-48 лет от 9 до 10 часов утра согласно описанию (см.

выше) и рассчитывали средние величины и средние квадратичные отклонения (М ± т).

Приведенные в таблице данные показывают, что предлагаемым способом состояние дезадаптации определяется в примерах № 4 и 5. Подтверждением этому служит увеличение бронхолегочной заболеваемости у обследуемого населения более чем в 4 раза в периоды времени, соответствующие примерам 4 и 5 по сравнению с исходным уровнем.

В таблице приведены также результаты определения МДА в плазме крови у тех же обследуемых по способу-прототипу. Из них

следует, что содержание МДА в период, предшествующий подъему заболеваемости (пример 3), и во время повышенной заболеваемости населения (примеры 4 и 5) достоверно не отличалось от исходного уровня

Таким образом, по сравнению с прототипом предлагаемый способ является более чувствительным для определения дезадаптации к условиям окружающей среды.

Приведенные примеры подтверждают

полезность предлагаемого способа для определения дезадаптации населения.

Способ может применяться при проведении экологических исследований, например в условиях промышленного региона,

насыщенного предприятиями разного профиля, которые загрязняют окружающую среду. Способ не требует дорогостоящей аппаратуры и дефицитных реактивов и может быть освоен и внедрен в учреждениях

здравоохранения.

Использование предлагаемого способа определения дезадаптации дает возможность своевременно выявлять изменения в группах риска и проводить соответствующие профилактические мероприятия для предупреждения массовой заболеваемости.

Формула изобретения Способ определения дезадаптации населения к условиям окружающей среды путем биохимическго исследования крови, о т личающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, дополнительно определяют активность глута- тионредуктазы и супероксиддисмутазы и

при повышении активности глутатионредук- тазы с одновременным снижением супероксиддисмутазы относительно контроля определяют дезадаптацию.

Способ определения дезадаптации населения к условиям окружающей среды. Использование: биохимические способы оценки состояния адаптации. Целью является повышение чувствительности способа. Сущность изобретения: измеряют активность глутатионредуктазы (ГР) и суперокси- дисмутазы (СОД) крови в динамике и по снижению СОД с одновременным увеличением ГР относительно контроля определяют дезадаптацию. 1 табл.