Способ определения пиразинамида в сыворотке крови Советский патент 1992 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине и аналитической химии и может быть использовано в клинической фармакологии для изучения фармакокинетики пиразинамида при различных схемах лечения.

Цель изобретения - упрощение способа.

На чертеже представлена хроматограм- ма сыворотки крови, содержащей пиразина- мид 50 мкг/мл

Способ осуществляют следующим образом.

Для анализа отбирают пробы крови у больного из пальца в объеме 0,3 - 0,5 мл. Центрифугирование в пластиковой микропробирке объемом 500 мкл проводят в течение 20 мин со скоростью 2000 об/мин, для разделения сыворотки и форменных элементов крови.

100 мкл сыворотки помещают в патрон с фильтром, вставленный в микропробирку типа Эппендорф. Патрон с фильтром представляет собой пластиковый цилиндр высотой 20 мм и диаметром 13 мм, который вставляют в микропробирку типа Эппендорф. Патрон снабжен с одной стороны решеткой, на которую помещают мембрану (фильтр) с диаметром пор 0,2 мкм фирмы Синпор. Мембрану уплотняют с помощью силиконового кольца и втулки, куда помещается проба с сывороткой. Втулка закрывается крышечкой, и центрифугируют при скорости 4000 об/мин в течение 10 мин для очистки пробы от микрочастиц, которые могут привести к повреждению колонки.

Пробу в объеме 4 мкл с помощью иглы- инжектора хроматографа Милихром наносят на колонку, заполненную сорбентом Диабонд С-8, и злюируют 0,4 м раствором N32S04. Хроматографические условия анализа: скорость потока элюента - 50 мкл/мин, длина волны детектирования 260 нм.

Обсчет хроматограмм проводят с использованием микро-ЭВМ ДВК-2М, сопряженной с хроматографом Милихром при помощи программы CHROM Орловского

(Л

С

2 2

ГО

XI

НПО Научприбор. Программа позволяет в автоматическом режиме вычислять высоты и площади хроматографических пиков и производить вычитание фона.

Концентрацию препаратов сыворотки определяют путем сравнения с калибровочной кривой.

Высоту пиков на хроматограмме определяют с помощью компьютерных средств.

Формула изобретения Способ определения пиразинамида в сыворотке крови, включающий обработку

сыворотки с последующим разделением образца на фракции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографией и расчетом содержания пиразинамида по хроматограмме, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, обработку сыворотки проводят центрифугированием в пробирке с мембранным фильтром Син- пор, полученный образец супернатанта подвергают разделению на колонке с сорбентом Диабонд С-8, при этом элюирование проводят 0,4 - 0,7 М раствором сернокислого натрия.

Использование: аналитическая химия, медицина, анализ лекарственных веществ в биологических жидкостях. Целью изобретения является упрощение способа. Сущность изобретения; сыворотку, предварительно отцентрифугированную и профильтрованную через мембранный фильтр с диаметром пор 0,12 мкм, вводят непосредственно в колонку, заполненную сорбентом Диабонд С- 8, а в качестве элюента используют 0,4 - 0,7 м раствор сернокислого натрия Использование предложенного способа позволяет сделать более доступным проведение ВЭЖХ-анализа пиразинамида в сыворотке крови, дает возможность обеспечить индивидуальный подход к лечению пиразина- мидом на основе лекарственного мониторинга.

I

а

h

/

п