Способ получения антигена вируса болезни Гамборо Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано при получении высокоактивного специфического антигена для постановки реакции диффузионной пре- ципитзции /РДП/ и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо.

За рубежом известны способы получения антигена для постановки серологических реакций при диагностике болезни Гамборо путем заражения свободных от патогенной микрофлоры цыплят /СПФ-цып- лят/ 21-дневного возраста, взятия от них фабрициевых сумок, выделения и очистки антигена /1,2,3/.

Недостатком указанных способов является использование СПФ-цыплят, стоимость которых не менее чем в 10 раз дороже, чем обычных, промышленных.

Целью изобретения является упрощение и удешевление способа получения антигена вируса болезни Гамборо, пригодного для постановки серологических реакций при диагностике этого заболевания.

Поставленная цель достигается тем, что антиген готовят с использованием цыплят

из промышленных стад 35-40-дневного возраста.

Перед заражением, с целью определения пригодности данной группы цыплят для получения антигена, определяют среднее соотношение массы фабрициевой сумки и общей массы птицы /бурсальный индекс/. Для этого из общей группы птиц методом случайной выборки отлавливают 5-10 цыплят, убивают и индивидуально взвешивают цыплят и их фабрициевы сумки, а затем определяют индекс по формуле:

Имс/Мт

Мс

Мт

1000,

О 00

о

СА СЬ

где Мс - масса фабрициевой сумки, г; Мт - масса тела, г.

На основании индивидуальных индексов Мс/Мт высчитывают среднеарифметическое значение индекса. Цыплята считаются пригодными для получения антигена при значении среднеарифметических показателей Имс/Мт не ниже 5,00,,

Цыплят убивают через 90-96 часов после заражения, отбирают фабрициевы сумки, гомогенизируют их в 0,601М фосфатно-буферном растворе /рН 7,2-7,4/ в соотношении 1:1 /вес объем/, трижды замораживают и оттаивают, обрабатывают ультразвуком с част стой 18000 Гц в течение 1 мин, центрифугируют при 4000 об./мин в течение 30 мин. Собирают надосадочную жидкость и инактивируют ее.

Инактивацию антигена проводят при температуре 37,0±0,5°С в течение б ч при непрерывном помешивании вирусного материала в присутствии димерэтиленимина в конечной концентрации 0.2%.

Полноту инактивации проверяют путем заражения чувствительных цыплят или куриных эмбионов.

Полученный антиген является универсальным и может быть использован в реакции диффузионной преципитации, встречном мммуноэлектрофорезе, иммуно- ферментном анализе.

Сравнение литературных данных по получению активного антигена вируса болезни Гзмборо на СПФ-птице и по предлагаемому способу, с использованием цыплят из промышленных стад, свидетельствует о том, что активность получаемого антигена и в том, и в другом случае одинакова. Так, в исследованиях K.HIra et al. /1/, прсведе- ных на СПФ-цыплятах, максимальная активность антигена вируса болезни Гамборо в реакции диффузионной преципитации составила 1:16-1:32 и активность полученного предлагаемым способом антигена была на том же уровне.

Пример 1. В таблице приведены данные, характеризующие зависимость активности преципитирующего антигена в фабрициевой сумке больных цыплят от формы и тяжести течения заболевания. Как следует из приведенных данных, максимальное накопление антигена происходит при остром течении заболевания в возрасте 35-40 дней на 4 день после заражения.

П р и м е р 2. Как следует из данных таблицы, острое течение болезни с высокой степенью накопления антигена в фабрициевой сумке имеет место, если для заражения использовали цыплят с бурсэльным индексом не ниже 5,0. Тогда как заражение

цыплят с бурсальным индексом в пределах 0,91-4,57 не сопровождается клиническими проявлениями заболевания и не позволяет получить активный антиген.

ПримерЗ. При заражении цыплят

35-40-дневного возраста с бурсальным индексом не ниже 5,0 наибольшая активность антигена (1:16-1:32) имеет место лишь на 4-й день после заражения, т.е. через 90-96 часов

/см. таблицу/. Тогда как на 3-й день активность антигена составляет 1:8, а на 5-й - 1:2-1:4, Эти данные указывают на необходимость взятия фабрициевых сумок от больных цыплят через 90-96 ч после заражения.

Использование предложенного в качестве изобретения способа получения антигена вируса болезни Гамборо позволяет по сравнению с существующими способами снизить затраты на цыплят, из фабрициевых

сумок которых получают антиген, не менее чем в 10 раз, так как выведение и выращивание свободных от патогенной микрофлоры животных требует применения сложного дорогостоящего оборудования, необходимого для поддержания строгой изоляции от внешней среды.

При этом активность антигена, полученного заявляемым способом, не ниже, чем у известных,

Антиген, изготовленный по предлагаемому способу, чувствителен, специфичен, прост в получении.

Формула изобретения Способ получения антигена вируса болезни Гамборо, включающий отбор популяции цыплят, заражение их вирулентным вирусом болезни Гзмборо, взятие фабрициевых сумок, приготовление гомогената, обработку его ультразвуком с последующей

инактивацией вируса, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, производят отбор популяции цыплят 35...40-дневного возраста с бурсальным индексом, определяемым по формуле:

БИ -gs. 1000,

где Мс - масса фабрициевой сумки, г;

Мт масса тела цыпленка, г, не ниже 5.0, а взятие фабрициевых сумок осуществляют спустя 90...96 ч после заражения вирулентным вирусом болезни Гамборо.

Активность антигена вируса болезни Гамборо в реак

Использование: биотехнология, вирусология, способ получения высокоактивного специфического антигена для постановки реакции диффузионной преципитации и других серологических реакций при диагностике болезни Гамборо. Сущность изобретения: используют 35-40-дневных цыплят, бурсальный индекс которых составляет не менее 5,0. При этом взятие фабрициевых сумок для выделения вируса болезни Гамборо осущеставляют спустя 90-96 ч после заражения вирусом. 1 табл.

диффузионной преципитеции в зависимости от возраста зараженных цыплят и сроков взятия патматериала