Штамм вируса болезни Гамборо для получения биологических препаратов и их оценки Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве антигена и иммунной сыворотки для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) и встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) с целью лабораторной диагностики болезни Гамборо.

Болезнь Гамборо протекает остро, с характерной клиникой заболевания и субкли- нически. Широкое распространение имеет субклиническая форма. При острой форме болезни на первый план выступают клинические и паталопо-анатомические признаки, сйойственные вторичным инфекциям, что создает затруднения при постановке диагноза. Поэтому проведение лабораторных исследований имеет решающее значение при постановке диагноза и требует наличия специфических высокоактивных стандартных антигенов и сыворотки.

Штаммы вируса болезни Гамборо, предназначенные для производства антигена и

иммунной сыворотки, должны быть достаточно вирулентными, свободными от контаминации и обладать высокой биологической и антигенной активностью. Технология производства антигена при болезни Гамборо предусматривает инактивацию вируса, поэтому штаммы должны быть чувствительными к воздействию общепризнанных инактивирующих препаратов и контролироваться на полноту инактивации.

Выпуск диагностикумов при болезни Гамборо до настоящего времени не налажен.

Существующие диагностикумы готовят на СПФ-цыплятах, СПФ-эмбрионах и в культуре клеток.

В зарубежной практике известен ряд штаммов вируса болезни Гамборо, используемых для изготовления антигенов и сывороток при данной инфекции - штамм SR-1 (4), штамм 1/PY.

Указанные штаммы культивируются на СПФ-цыплятах (свободных от патогенных

С/1

С

VI

О 00

о

КЗ

факторов) или в культуре клеток различного происхождения. Однако получение и содержание СПФ-цыплят требует больших материальных и трудозатрат , размножение вируса в культуре клеток вызывает снижение его ан- тигенной активности. Полученные образцы антигена и сыворотки с использованием указанных штаммов обладают низкой активностью и не поддаются стандартизации.

Широко используют высокоактивные виру- лентные штаммы вируса болезни Гамборо. Известен LUTaMM cheville, используемый для производства антигенов и сывороток для лабораторной диагностики болезни Гамборо - прототип изобретения.

Однако для культивирования этого штамма требуются СПФ-цыплята. Максимальной величины биологическая активность его достигает через 96 часов после заражения цыплят, показатели биологической активности при этом низкие (104 5-105 ° ЭЙД so/мл).

Целью настоящего изобретения является получение нового штамма вируса болез- ни Гамборо, отвечающего всем требованиям производства диагностику- мов, т.е. представляющего свободный от контаминации вирусный материал, обладающего высокой вирулентностью, биологической и антигенной активностью (титр вируса 105 5-106 ° ЭИДбо/мл), способного адаптироваться и титроваться на цыплятах и куриных эмбрионах.

Цель изобретения достигается получением вирулентного штамма 27/94 вируса болезни Гамборо - сем. Birnavidae

Вирус имеет кубическую симметрию, без оболочки, с диаметром 60-80 нм и относится к РНК-содержащим вирусам семейства Birnavidae. Вирус устойчив к воздействию температуры 56° С в течение 30 мин, эфира и хлораформа. Инактивирует- ся при воздействии 0,1%-ного раствора формальдегида в течение 24 ч. В лиофили- зированном состоянии штамм вируса сохраняет свои биологические и антигенные свойства при хранении в условиях холодильника в течение не менее двух лет. Заражение куриных эмбрионов вызывает гибель и поражение их в виде подкожных кровоизлияний и задержки роста и развития на 5-6 сутки после введения вируса.

Для культивирования ититрации штамма 27/94 вируса болезни Гамборо использовали коммерческих цыплят 35-40-дневного возраста и куриные эмбрионь,,

Для заражения использовали 0,2 мл ви- руссодержащего материала.

При заражении цыплят вирусный материл вводили интраназально. Через 72-96 ч отбирали фабрициевую сумку и готовили го- могенат на физиологическом растворе в соотношении 1:1.

При заражении эмбрионов вируссодер- жащий материал вводили в хориоалантоис- ную оболочку. Зараженные эмбрионы инкубировали при температуре 37,5-38° С. Затем отбирали аллантоисную жидкость и хориоаллантоисную оболочку и аналогично готовили гомогенат.

Активность вируса определяли по титру и наличию патолого-анатомических изменений у зараженных цыплят и эмбрионов.

Устойчивость штамма к воздействию температуры, эфира и хлороформа определяли путем титрации вируса до и после воздействия на него указанных факторов.

Инактивацию вируса при получении антигена проводили с помощью раствора формальдегида в конечной концентрации 0,1% в течение 24 ч. Полноту инактивации проверяли заражением эмбрионов.

Для получения иммунной сыворотки к вирусу болезни Гамборо,заражали цыплят вирулентным штаммов 27/94 в возрасте 35-40 сут и через 15 сут повторно вводили вирус в объеме 0,5 см в грудную мышцу. Сыворотку от цыплят получали через 14 сут после повторного введения и исследовали на активность и специфичность в реакции диффузной преципитации и реакции нейтрализации.

Вирулентный штамм 27/94 вируса болезни Гамборо адаптирован, поддерживается и титруется на коммерческих цыплятах и куриных эмбрионах. Штамм вызывает характерную клиническую и паталогоанатоми- ческую картину заболевания через 48-72 часа после заражения цыплят и образования вируснейтрализующих антител на 14 сутки. Титр вируса в фабрициевой сумке цыплят на 96 час после заражения достигает 10 -10 ЭИДбо/мл, а активность сывороток крови цыплят, зараженных этим штаммом, через 14 суток достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузной преципитации 1:64. Вирус свободен от контоминации, специфичен и активен.

Формула изобретения

Штамм вируса болезни Гамборо ГКВ № 2105 для получения диагностических препаратов и их оценки.

Использование: иммунология, вирусология, ветеринария. Сущность изобретения: штамм 27/94 вируса болезни Гамборо ГКВ 2105 культивируется и титруется на коммерческих цыплятах 35-40-дневного возраста и куриных эмбрионах. Штамм вызывает характерную клиническую и патоло- го-анатомическую картину заболевания через 48-72 ч с титром вируса 105 5-106 ° ЭЙД so/мл, а активность сыворотки крови достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузионной преципитации 1:64. Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен.