ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ (БОЛЕЗНИ ГАМБОРО) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ДИАГНОСТИКУМОВ Российский патент 1997 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве антигена и иммунной сыворотки для постановки нейтрализации с целью лабораторной диагностики болезни Гамборо.

Куры являются единственным видом птиц, восприимчивых к заражению вирусом инфекционной бурсальной болезни (ИББ). В настоящее время известно два серотипа вируса ИББ. Большинство изолятов от кур относится к 1-му серотипу, а изоляты от индеек ко 2-му серотипу. У индеек заболевание протекает субклинически, что затрудняет проведение лабораторной диагностики заболевания. Однако у больных или переболевших индеек наступает иммунодефицитное состояние, на фоне которого обостряются вторичные инфекции, сопровождающиеся значительным отходом. Антигенное родство между 1-м и 2-м серотипами данного вируса минимальное, что не позволяет дать объективную оценку распространения вируса 2-го серотипа.

В зарубежной практике известен ряд штаммов вируса ИББ второго серотипа, используемых для приготовления антигенов и сывороток при данной инфекции [1] [2]
В настоящее время в отечественной ветеринарной практике нет штамма, пригодного для производства антигена и иммунной сыворотки для постановки pН с целью лабораторной диагностики ИББ.

Целью изобретения является получение нового штамма вируса ИББ 2-го серотипа, отвечающего всем требованиям производства диагностикумов и представляющего собой свободный от контаминации вирусный материал, обладающий высокой биологической и антигенной активностью (титр вируса 10^6,3 ТЦД50/мл) способного титроваться на куриных эмбрионах и культуре клеток.

С указаниями для получения штамма вируса ИББ свойствами выделены в птицеводствах страны и СНГ и исследованы полевые штаммы вируса. Штамм выделен от индюшат с признаками поражения фабрициевых сумок: гиперемия, очаговые кровоизлияния, отек и атрофия сумок.

Вирус имеет кубическую симметрию, без оболочки, с диаметром 60-70 нм. и относится к РНК-содержащим вирусам сем. Birnoviridae. Вирус устойчив к воздействию температуры 56^oC в течение 1 ч, эфира и хлороформа. В лиофилизированном состоянии штамм вируса сохраняет свои биологические и антигенные свойства при хранении в условиях холода в течение двух лет (заражение куриных эмбрионов вызывает гибель 30% эмбрионов и поражение их в виде подкожных кровоизлияний и задержки роста и развития на 5-6 сут после введения вируса). Для культивирования и титрования штамма "М-92" вируса ИББ использовали куриные эмбрионы и культуры клеток различного происхождения. Для задержания коммерческих цыплят использовали 0,2 мл вируссодержащего материала, который вводили интразально. Штамм не вызывает в организме зараженных цыплят клиническую и паталогоанатомическую картину заболевания, что свидетельствует о низкой патогенности его в отношении цыплят.

Однако при гистологическом исследовании фабрициевых сумок от зараженных цыплят выявлены характерные для ИББ изменения: гиперемия, очаговые кровоизлияния, отеки и утолщения межфолликулярных соединительно-тканевых перегородок, сочетающиеся с некрозом клеточных элементов лимфоидного ряда и образованием в мозговом слое фолликулов некротических очагов, атрофия лимфоидных фолликулов и образование на их месте кистозных полостей.

Заражение эмбрионов проводили на хориоаллантоизную оболочку. Зараженные эмбрионы инкубировали при 37,5^oC. Затем отбирали аллантоисную жидкость и хориоаллантоисную оболочку и аналогично готовили гомогенат. Активность вируса определяли по гибели и наличию паталогоанатомических изменений у зараженных эмбрионов. Устойчивость штамма к воздействию температуры, эфира и хлороформа определяли путем титрации до и после обработки его указанными жирорастворителями. Для получения иммунной сыворотки заражали цыплят штаммом "М-92" в возрасте 35 40 сут и через 15 сут повторно вводили вирус в объеме 0,5 см³ в грудную мышцу. Сыворотку от цыплят получали через 14 сут после повторного введения и исследовали активность и специфичность в реакции нейтрализации.

Штамм "М-92" вируса болезни Гамборо адаптирован, поддерживается в культуре клеток. Через 48 72 ч после заражения штамм вызывает характерное гранулирование (округление клеток) и образование очагов дегенерации клеток, состоящих из отдельных округлых клеток. Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен. В перекрестной нейтрализации вируса с иммунными сыворотками к 1 и 2-му серотипами штамм "М-92" давал перекрестную реакцию со штаммом 1-го серотипа в пределах 30% Стабильность штамма "М-92" была испытана на протяжении 12-ти последовательных пассажей в культуре клеток ФЭК и 9-ти пассажей в куриных эмбрионах 9 10-дневного возраста. При этом штамм сохранил свою биологическую и антигенную активность, что является свидетельством его стабильности.

Источники информации:
1. Кибенге Ф.С. Диллон А.С. Рассел Р.Г. Идентификация белков вируса инфекционного бурсита серотипа 11. Avian Pathology, 1988, с. 679-687, v. 17.

Pao, V.S.R Болезнь Гамборо: передача инфекции, инкубационный период, симптомы, патологические изменения, диагностика, лечение. Poultry Advizer, 1988, 21-12:49:-52.

Использование: иммунология, вирусология, ветеринария. Сущность изобретения: штамм "М-92" вируса инфекционной бурсальной болезни птиц (болезнь Гамборо) ГКВ 2321 2-го серотипа культивируется и титруется на куриных эмбрионах и культурах клеток различного происхождения. Вирус свободен от контаминации, специфичен и обладает высокой биологической и антигенной активностью (титр вируса 10^6,3 ТЦД 50/мл).

Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни птиц (болезни Гамборо) ГКВ N 2321 для производства диагностикумов.