Способ получения замещенных индол-(2,3-в)хиноксалина или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1992 года по МПК C07D487/04 

Изобретение относится к области получения новых замещенных индола /2,3- b/хиноксалина общей формулы: N

CQ@-HI

N N

i

VCH-tCH nR2

где Ri - одинаковые или различные моно- или дизаместители в положении 2-3 или 7-9, выбранные из галогена. Ci-G алкила или алкоксигруппы

R2 - означает группу -ЭД

/FU

5

N.

где R4 и RS - одинаковые и означают низший алкил,

R3 - водород.

п - целое число от 1 до 4 или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих противовирусной активностью.

Целью изобретения является разработка, на основе известных приемов, способа получения новых соединений, нетоксичных

VI VI О

N СЛ Ю

СО

и обладающих улучшенным фармакологическим действием.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1.

9 метил-6-/М,М/-диметиламиноэтил/-6- Ниндол/2,3-Ь/хиноксалин.

5,38 г гидрида натрия (0,22 моля) добавляли в раствор 15,9 г Ы,М-диметиламино-2- хлорэтан-НС (0,11 моля) в 400 мл диметил- формамида при температуре 30°С в атмосфере азота и тщательно перемешивали. Спустя примерно 5 минут порциями добавляли 9-метил-6Н-индол/2,3-Ь/хинокса-- лин/0,10 моля/, Смесь перемешивали при температуре 30°С до тех пор, пока не получали прозрачный раствор, Через 24 часа выдерживания при температуре 30°С растворитель отгоняли под вакуумом при комнатной температуре, а остаток подвергали очистке промывкой водой. Сырой продукт сушили и растворяли в метилацетате. При охлаждении до температуры -30°С получали оранжево-желтые кристаллы, Выход 21,1 г, 70% температура точки плавления 118- 120°С.

При помощи соответствующей процедуры получали перечисленные ниже соединения,

2,3-диметил-б-/М,М-диметиламиноэти- л/-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин, температура точки плавления 138-140°С, 7,9-дихлор-б-/М,М-диметиламиноэтил/

-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин, температура точки плавления 187-189°С, П р и м е р 2.

9-хл op-6-/ N, N-диметил а мин оэтил /-6 Н -индол/2,3-Ь/хиноксалин-НС1.

5.38 г гидрида натрия (0,22 моля) добавляли в 600 мл сухой диметилсульфоокиси, в которой предварительно растворяли 15,9 г М,Н-диметиламино-2-хлорэтан-НС1(0,11 моля) при температуре 30°С в атмосфере азота

и хорошем перемешивании. Спустя примерно 5 минут добавляли 5,4 г 9-дихлор-6Н-ин- дол/2,3-Ь/хиноксалина (0,10 моля). Смесь перемешивали при температуре 40°С до тех пор, пока не будет получен прозрачный раствор. Наконец, проводили нагревание смеси до температуры 40°С, которую поддерживали в течение 3 ч. Растворитель отгоняли под вакуумом при комнатной температуре и остаток растворяли в 2% кипящей хлористоводородной кислоте. При охлаждении хлоргидрат выпадал в осадок.

При помощи соответствующей процедуры получали хлоргидрат следующих соединений:

Изобретение касается замещенных ин- дол(2.3-Ь)хиноксалина, в частности получения соединений общей ф-лы I N R3-CH-tCH2)nR2 где R - (одинаковые или различные моно или дизаместители в положении 2-3 или С4-алкил, С -С -алкокси или галоген; -чтЛ при R4 Rs - алкил; , пН-4, Кб или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих противовирусной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных, малотоксичных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией соответствующего хиноксалина с гидрохлоридом амина ф-лы „: HalCHR3K в присутствии гидрида щелочного металла с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде нужной соли. Новые вещества в сравнении с известными более активны против вируса Герпеса при малой токсичности. 1 табл., 5 ил. ч w Ё

П р м м е р 3.

2,3-диметил-9-бром-6-/М,М-диметила миноэтил/-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин,

В суспензию 5,38 г гидрида натрия (0,22 моля) в 600 мл в сухой диметилсульфоокиси, поддерживаемую при температуре 35°С, в атмосфере азота при хорошем перемешивании добавляли 32,6 г 2,3-диметил-9-бром- 6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалина (0,10 моля). Через 30 мин после завершения добавления при температуре 35°С добавляли 15,9 г N.N- диметиламино-2-хлорэтан-НС1 (0.11 моля).

Смесь перемешивали при температуре 35°С в течение четырех часов, а затем растворитель отгоняли под вакуумом при комнатной температуре. Остаток растворяли после отсасывания с водой в метил ацетате и медленно охлаждали до -30°С, при этом основание кристаллизовалось. Выход 22 г, 55%, температура точки плавления 146- 147°С.

При помощи соответствующей процедуры получали следующие соединения:

2,3-диметил-9-бром-6-/,М-диизопро пиламиноэтил/-6Н-индол-/2,3-Ь/хинокса лин, температура точки плавления 121- 123°С.

9-фтор-6-/М,1М-диметиламиноэтил/-бН -индол/2,3-Ь/хиноксалин, температура точки плавления 101-102°С.

2,3-диметил-9-бром-6-/морфолиноэти- л/-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин, температура точки плавления 208-210°С.

П р и м е р 4.

7,9-дихлор-6-/М,М-диметиламиноэтил/- 6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин-НС1.

2,64 г гидрида натрия (0,11 моля) добавляли в 300 мл сухой диметилсульфоокиси, в которой предварительно растворяли 7,95 г М,М-диметиламиио-2-хлорэтан HCI (0,055 моля) при температуре 30°С в атмосфере азота и тщательном перемешивании. Через

примерно 5 мин добавляли 14,4 г 7,9-дих- лор-6Н-индол-/2,3-Ь/хиноксалина (0,05 моля). Смесь перемешивали при температуре 50°С до тех пор, пока не будет получен прозрачный раствор. Наконец, осуществляли нагревание до температуры 60°С, которую поддерживали в течение 3 ч. Растворитель отгоняли под вакуумом при комнатной температуре, а остаток растворяли в метаноле после отсасывания с водой. Смесь сырого основания затем подвергали хромотогра- фической обработке на силикагеле и использованием метанола в качестве элюента, перечисленные ниже материалы получали в указанном порядке, небольшое количество непрореагировавшего 7,9-дих- лор-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалина, 7,9-дих- лор-б-/М,М-диметиламиноэтил/-6Н-индол /2,3-Ь/хиноксалин, и наконец 7,9-дихлор-5- /М,М-диметиламиноэтил/-6Н-индол/2,3-Ь /хиноксалин (22%). Высушенное 6-заме- щенное основание растворяли в ацетоне и хлоргидрат осаждали при помощи подачи хлористого водорода. Выход 7, 39%, температура точки плавления 254-257°С.

П р и м е р 5.

9-метил-6-/Ы,М-диметиламиноэтил/- 6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин-НС1.

5,06 г натрия (0,22 моля) растворяли в 550 мл сухого этанола, добавляли 15.9 г N.N- диметиламино-2-хлорэтан-НС (0,11 моля), а затем 23,3 г9-метил-6Н-индол/2,3-Ь/хинок- салина (0,10 моля). Смесь кипятили в течение 4 ч, охлаждали и фильтровали. Наконец, фильтрат концентрировали в теплой 2% хлористоводородной кислоте. Хлоргидрат получали в виде желтых кристаллов при медленном охлаждении. Выход 21 г, 62%, температура точки плавления 240-242°С.

П р и м е р 6.

9-хлор-6//М,М-диметиламиноэтил/-6Н -индол /2,3-Ь/хиноксалин-НС1.

5,06 г натрия (0,22 моля) растворяли в 300 мл 2-метоксиэтанола. добавляли 15.9 г Г,1М-диметиламино-2-хлорэтан-НС1 (0,11 моля), а затем 25.4 г 9-хлор-бН-индол/2,3- b/хиноксалина (0,10 моля). Смесь нагревали в течение 3 ч при температуре 100°С, затем охлаждали и фильтровали. Фильтрат кон . центрировали и сливали в воду. Полученное сырое основание отделяли фильтрацией и промывали водой, а затем подвергали хро- матографической обработке на силикагеле с использованием метанола в качестве элю- ента. Очищенное основание растворяли после сушки в ацетоне. Хлоргидрат осаждали при помощи медленного добавления по каплям концентрированной хлористоводородной кислоты при перемешивании.

Выход 23,2 г, 66%, температура точки плавления 243-246°С.

Пример.

9-метил-6/М,М-диметиламиноэтил/-6Н -индол/2,3-Ь/хиноксалин-НС1.

3,04 г 9-метил-б-/М,М-диметиламиноэ- тил/-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалина (0,01 моля) растворяли в 50 мл метанола. Добавляли 1,62 г хлористого иода (0,01 моля) и смесь кипятили в 1вчение 15 мин. После охлаждения, образовавшиеся кристаллы отсасывали, 4,1 г, 87%, температура точки плавления 101-103°С.

Аналогично получали следующее соединение:

2,3-диметил-6-М,М-диметиламиноэтил /6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин-НС1, температура точки плавления 183-185°С.

Примере.

6-/М.М-диметиламиноэтил/-2,3-диме- тил-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин-фосфон- зцетат.

6-/М.Ы-Диметиламиноэтил/-2,3-диме- тил-6Н-индол/2,3-Ь/хиноксалин (318 мг, 0,001 моля) растворяли в смеси диоксан простой эфир (10 мл) и добавляли раствор фосфонуксусной кислоты (140 мг, 0,001 моля) и смеси диоксан-простой эфир (10 мл). Спустя 2 ч при температуре 25°С образовавшийся аддукт отсасывали. Выход 412 мг (90%).

Соединения, полученные согласно изобретения, представлены в сводной табл.1.

П р и ме р9.

6-/М,М-диметиламиноэтил/-2,3-диме- тил-бН-индол /2,3-Ь /хиноксалин-фосфонф ормиат.

6-/М,М-диметиламинозтил/-6Н-индол- /2.3-Ь/хиноксалин-НС (354.5 мг, 0,001 моля) растворяли в воде (50 мл), в которой предварительно растворяли уксусную кислоту (2,0 г) и ацетат натрия (2,3 г). В этот раствор добавляли тринатрийфосфонфор- миат гексагидрат (300,1 мг. 0,001 моля) в воде (15 мол). Полученный таким образом раствор затем непосредственно использовали в противовирусных экспериментах.

В описанных ниже испытаниях использовали два замещенных индолхиноксалина, а именно, 8196-9-бром-6/М,М-дим етилами- ноэтил/-6Н-индол/2.3-Ь/хиноксалин HCI, и В129-2,3-диметилпроизводное указанного выше соединения.

Система испытаний с раковыми клетками.

Клетки лимфомы Беркитга получали от профессора Георга Клейна Каролинский институт. Клетки HeHrl содержат антиген вируса Энштейна-Барра на поверхности клеток в то время, как клетки Раджи содержат тот же антиген в ядре, Клетки выращивали в среде RPM 1640 в присутствии 15% сыворотки зародыша теленка 2 мМ глюта- мина, 200 мг/л пенициллина и 200 мг/л стрептомицина. Клетки L1210 (лейкемии мыши) получали от доктора Миклоша Дегре, Ришкоспиталет, Осло. Эти клетки выращивали в среде RPMI 1640 с 10% сыворотки лошади.

Результаты.

Результаты осуществленных испытаний приведены в форме графиков на приложенных чертежах 1,2 и 3, среди которых черт.1 представляет собой рост 2 штаммов клеток лимфомы Беркмтта в присутствии иододеок- сиуридина (ИДУ), черт. 2 представляет действие В196 против клеток HeHrl, а черт.З представляет действие В196 против клеток Раджи.

Черт.1 показывает, что клетки HeHrl являются чувствительными относительно иододеоксиуридина (хорошо известное средство против лишая) в то время, как клетки Раджи оказываются нечувствительными, Чертежи 2 и 3 показывают, что оба типа этих клеток быстро гибнут в присутствии производного индолхиноксалина (В 196). Кроме того, остеогенные клетки саркомы и гигантские клетки опухоли (штамм Т4) подавлялись до 90% относительно их роста через б дней испытаний с концентрацией 1 мг/л.

Проводили эксперименты также с мышами, ЛДво при внутрибрюшинном применении составляет порядка 1000 мг/кг и примерно 100 мг/кг при внутривенном введении, 20 мышам прививали внутрибрю- шинным способом 5 миллионов клеток опухоли матки мыши. 80 мг/кг соединения В219 вводили ежедневно в течение десяти дней. 2 мыши погибли через 22 дня после обработки, 8 мышей оставались живыми в течение всего периода испытаний (3 месяца). Все контрольные мыши при этом погибали.

В двух экспериментах с клетками лимфомы матки над мышами получали время жизни в 50,9 дней в первом эксперименте и 45.6 дней во втором эксперименте. Время жизни для контрольных мышей составило 16,2 и 16,1 дней, соответственно.

Во времая испытаний в национальном институте Рака (США) статистическими методами был подтвержден эффект с мышами L1210.

Замещенные индолхиноксалины, являющиеся предметом настоящего изобретения, обладают также высоким противовирусным действием, Во время проведенных испытаний в национальном институте рака был подтвержден сильный

эффект против HTLY-3-вируса в культурной ткани при низкой концентрации, а именно,

1мг/л. Как можно видеть из описанных ниже испытаний, индолхиноксалины также обладают высокими противовирусным действием против симплексвируса лишая обоих типов 1 и 2.

Методы испытаний против вируса. Штаммы вирусов получали из Нацио- 0 нальной бактериологической лаборатории. Стокгольм, Симплекс-вирус лишая типа 1 и

2вводили внутрь головного мозга мыши. Для таких экспериментов использовали самцов мыши в возрасте 2-3 недели, Внут5 римозговое инфицирование осуществляли при помощи введения шприца на 3 мм выше глзза на глубину приблизительно 3 мм, 0,03 мл суспензии вируса вводили инъекцией выше одного глаза, а вещество выше другого

0 глаза.

Контрольные группы получали, с одной стороны, введением физиологического соляного раствора, а, с другой стороны, суспензии вируса.

5 Эксперименты с культурой ткани прово- . дили с АУЗ-клетками амниона человека. Клетки выращивали в стеклянных пробирках (12x100 мм)вереде Иглеса, содержащей соляной раствор Эрлеса и 10% сыворотки

0 теленка. Пробирки с однородным слоем выращенных клеток инфицировали вирусом (0,15 мл) и вирусу давали возможность адсорбироваться на клетках в течение 1 часа при температуре 37°С. Пробирки обрабаты5 вали веществом, растворенным в среде за 24 часа и 0 часов до инфицирования. Среду, содержащую испытываемое вещество, заменяли на каждый второй день в течение всего эксперимента. В каждом испытании

0 анализировали целую серию концентрацией испытываемого вещества одновременно с тем, чтобы можно было, установить примерно 50% уменьшение цитопатогенно- го эффекта (ЕДво).

5 Результаты вирусных экспериментов.

Для всех исследованных синтезированных соединений ЕДбо изменялась в области 0,5-2 мг/л в экспериментах с культурной тканью,

0 Результаты проведенных вирусных экспериментов показаны также при помощи графиков на приложенных чертежах 5 и 4, среди которых на черт.4 показано влияние диализа на противовирусные свойства сое5 динения В196, а на черт.5 показана дезактивация HLYI-вирусэ после инкубирования с двумя различными концентрациями соединения В196 относительно времени.

В экспериментах, приведенных на черт.4, различные концентрации соединения В-196 смешивали с симплекс-вирусами лишая типа 1 и инъектировали внутрь головного мозга мыши сразу же во время диализа или сразу же после нето при температуре 4°С в течение ночи. Ни одной живой мыши не было зафиксировано в контрольных группах.

Чертеж 4 показывает значительное увеличение степени выживания, если вирус смешивали с В196 перед инъекцией. Степень выживания увеличивалась от 0 до 100%. Даже если смесь вирус-вещество подвергали диализу перед инъекцией, эффект был почти равным по действию. Это видимо указывает на непосредственное взаимодействие между веществом и вирусными частицами (см. черт.4).

Эта уверенность поддерживается экспериментами, в которых вирус и вещество инкубирования вместе, и инъектировали мышам в различные моменты времени,

В экспериментах, изображенных на чертеже 5, две концентрации соединения В-196 (75 и 150 (л г/мл) инкубировали в течение различного времени при температуре 4°С с симплекс-вирусом лишая типа 1 и ин- фицируемость смесей определяли при помощи внутримозговой инъекции мышам. Контрольный вирус инкубировали при температуре 4°С в течение такого же промежутка времени. Ни одной живой мыши не было зарегистрировано в этих группах.

Чертеж 5 очевидно показывает, что вирус медленно дезактивируется в присутствии вещества.

Некоторые результаты для других соединений, являющихся предметом настоящего изобретения, приведены в табл.2,

В колонке 2 указана концентрация вещества (мкг/мл), которая необходима для выживания 50% (OLso) мышей, в организм которых вводили путем внутримозговой инъекции дозу LDso вируса Герпес Симплекс типа I (Вирус и вещество, смешанные друг с другом). N - отсутствие эффекта при концентрации 500 мкг/мл.

В колонке 3 указана концентрация вещества, которая необходима для выживания 50% (Olso) клеток Amnion AV3, которые были заражены дозой LDso вируса Гернес Симплекс типа I. N - отсутствие эффекта при концентрации 3 мкг/мл.

В колонках 4 и 5 указана концентрация вещества, которая необходима для 50-процентного ингибирования групп клеток Raji и клеток НеНг (мкг/мл). N- отсутствие эффекта при концентрации 1 мкг/мл.

0

5

0

Из результатов приведенных в таблице, ясно, что испытываемое для сравнения замещенное нитрогруппой соединение, то есть соединение А наряду с его токсичностью имеет очень низкую активность при испытывании, как показано в колонке 2, составляющую более 600 мкг/мл, в то время как другое испытываемое соединение, то есть замещенное карбоксигруппой соединение В, неактивно во всех испытаниях.

В противоположность этому новые ин- долохиноксалины, отвечающие данному изобретению, имеют высокое противовирусное действие и некоторые из этих соеди- нений показывают также высокий противораковый эффект.

Ф о рмула изобретения

Способ получения замещенных индол- (2,3-Ь)хиноксалина общей формулы N

25

(СН2-)

0

5

где R - одинаковые или различные моно- или дизаместители в положении 2-3 или 7-9, выбранные из галогена, СгСгалкила или ал- коксигруппы:

-xi- R R2 означает группу NX. , где R4

К5

и RS - одинаковые и означают низший алкил;

R3 - водород,

п - целое число от 1 до 4, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что замещенный хиноксалин общей формулы

40

45 где RI имеет указанные значения,

подвергают взаимодействию с гидрохлоридом соединения общей формулы

50

на сьтък:

где Hal - галоид;

R3.R4 и RS имеют указанные значения, в присутствии гидрида щелочного металла с последующим выделением целевого .продукта в свободной виде или в виде фармацевтически приемлемой соли.

Общие соединения, полученные

Таблица 1 согласно нестоящего изобретения

Сравнительный Соединение для нения

CUtCMlCKikHCJ

QTS®

4и,сн,н(сно,

.соон

НеНЯ I

контроль

ю клеток/ 1

i j « «

Физ1

10 клеток/

Примерно 600 0,А

0,8

0,5

N

Радея

контроль

pgAvi( IDU

яНей HEHR 1

1 5 V$ OT9B юи

1рдАгЫ в Н6

Фиг.1

о кле Юх

клаткп- Радая

хмпролъ

Фи&3

, Ј .выживших мшей

00

ОIOO ЭОО 300 400 SOOpfl.-ml В 196

Фаз. 4

% акиаиих мьаеН

т11г

10IS202

Фиг.5

ф ЮШЛ

Alpo/ntf Л 116

tM/ml

-ВИЦУС4 В 196

впйус в 196 после дйвлеза

« ISO pg/mt

i.,.-о 75 pg ml Ґ Ь