Способ диагностики стадий развития системной склеродермии Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к иммунодиагностике активного патологического процесса при системной склеродермии (ССД).

Известен способ диагностики стадий развития ССД путем оценки клинической картины заболевания с учетом отдельных лабораторно-инструментальных данных (Н.Г. Гусева, Системная склеродермия. - М., Медицина, - 1975, 271 с). Стадии развития ССД выделены в соответствии с принятой в нашей стране рабочей классификацией ССД (Н.Г. Гусева, 1975). Стадия начальных проявлений (1) характеризуется наличием суставного синдрома, синдрома Рейно или поражения кожи; отличается от развернутой стадии (генерализации - It и терминальной - III) отсутствием висцеральной патологии, полисиндромности и полисистемности поражения. Относительное диагностическое значение имеют лабораторные

данные, важные в основном для установления степени активности заболевания определение СОЭ, СРВ, серомукоида, О.1 - , у-глобулинов, РФ в средних титрах, исследование мочи, оксипролина в плазме крови и моче, определение иммуноглобулинов классов G, A.M., морфологическое исследование биоптатов кожи. Установлено накопление АНА, увеличение ЦИК при диффузной, быстро прогрессирующей ССД. Для диагностики висцеральной патологии необходимо также проведение рчда инструментальных исследований (рентгенологическое исследование органов грудной клетки, желудочно-кишечного тракта, суставов, при необходимости эндоскопическое, ультразвуковое исследование, ЭКГ, изучение функции внешнего дыхания, почек) При далеко зашедших изменениях с развитием тяжелых фиброзно-склеротических или сосудисто-некротических поражений, приводящих

XI

х|

XJ

О 00

СО

к недостаточности тех или иных органов, диагностируют терминальную стадию.

Цель изобретения - повышение точности, обеспечение ранней диагностики, ускорение способа снижение трудоемкости.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Для исследования берут кровь из локтевой вены (2-3 мл крови в пробирки, содержащие гепарин, - 25 ЕД на 1 мл жидкости). Выделение лимфоцитов проводят по методу A. Boym (Baym A. - Separation blood lencocytes. granulocytes and lymphocytes. Tissue Antigens. - 1974. - № 4. - p. 269).

Регуляторные Т-субпопуляции (Tj, - супрессоры и Т -хелперы) определяют но L. Moretta e.a. (J. Jmmunol. 1976. - № 117, - р. 2171-74) в модификации Ф.Ю. Гариба, М.В. Залялиевой (Нормативные материалы по содержанию отдельных субпопуляций лимфоцитов в периферической крови человека в возрастном аспекте. Методические рекомендации. Ташкент, 1983. - с. 4-7). Принцип метода заключается в образовании розеток Т-лимфоцитами с эритроцитами, нагруженными энтиэритроцитарными антителами классов G или М- и основан на выявлении Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к Fc - фрагменту иммуноглобулина G (Tf -клетки- супрессоры) и М (T/V -клетки-хелперы).

Количественная оценка антигенсвязы- вающих лимфоцитов (АСЛ) проводилась на о.снове метода непрямого розеткообраэова- ния (Ф.Ю. Гариб и соавт. Клиническая ценность определения антигенсвязывающих клеток у больных брюшным тифом и другими заболеваниями. Методические рекомендации. Ташкент. 1983. - с. 3-8). Принцип метода заключается в образовании розеток, состоящих из центрально расположенного сенсибилизированного лимфоцита и прикрепленных к нему эритроцитов, предварительно нагруженных кожным антигеном.

Результаты определения Tj. -, Т/« -лимфоцитов, АСЛ выражали относительным показателемв процентах к числу циркулирующих в периферической крови лимфоцитов.

Рассчитывается коэффициент степени аутоиммунизации (КСАИ), вычисляемый по

формуле: КСАИ -ФЩ- х 100% (усл.ед.)

у х Анализ показал, что у здоровых лиц КСАИ

составляет в среднем (М±т) - 1,4-0,16 усл.ед., при М±2аот 0.74 до 2,5 усл.ед. Стадия начальных проявлений ССД (1) характеризуется КСЛИ равным в среднем 16,9±0,9 усл.ед., при М±2ст от 8,7 до 25,1 усл.ед Генерализованная стадия (II) характеризуется

КСАИ в среднем равным 61,0±3,1 усл.ед., при 31,5 до 90,5 уел ед, Показатели КСАИ у больных с терминальной стадией (III) существенно не отличаются от таковых при

генерализованной стадии (II),

Пример 1, Больная М., 35 лет. Диагноз - системная склеродермия (ССД) хронического течения, первой стадии, II стадии активности. Синдром Рейно, склеродермический полиартрит, сгибательные контрактуры суставов кистей, гиперпигментация кожи, кальциноз мягких тканей. Длительность заболевания 7 лет. Начало заболевания с болей и скованности в мелких суставах

кистей с последующим присоединением синдрома Рейно, поражение кожи. Объективно: синдром Рейно, дефигурация коленных, голеностопных суставов, сгибательные контрактуры мелких суставов кистей, гиперпигментация кожи лица и шеи, кальциноз мягких тканей по ходу позвоночника, в области коленных суставов, ягодиц, На рентгенограммах костей и стоп - остеопороз, местами сужение межсуставных щелей.

Рентгенограмма коленных суставов: на фоне бедренной кости в мягких тканях множественные петрифицированные тени, В общ.аи. крови ускорение СОЭ до 30 мм/ч, альбумины - 38,1%, у-глобулины - 35,7%,

РФ в латекс-тесте 1/320, TJ - лимфоциты - 6,7%, Tyi - лимфоциты - 10,1%, АСЛ - 8%, КСАИ -11,8 усл.ед., что соответствует 1 стадии ССД.

Пример 2. Больная Ш., 48 лет. Диагноз: ССД хронического течения, первойста- дии, II степени активности. Индурацил и гиперпигменгация кожи, синдром Рейно, полиартралгии. Длительность заболевания - 8 лет. Начало заболевания с синдрома

Рейно с последующим поражением кожи, суставов. При объективном обследовании у больной выявлен плотный отек кистей, лица, индурация и гиперпигментация кожи конечностей, симптом кисета, трофические

нарушения пальцев кистей, отмечается выраженный синдром Рейно. На рентгенограмме кистей - околосуставной остеопороз. На ЭКГ - синусовая аритмия. В - общ.ан.крови: ускорение СОЭ до 30 мм/час,

ЦИК в сыворотке крови - 2,2 ед. ОП, АСЛ - 10%, 1J--лимфоциты -5,3%, Tjfi -лимфоциты - 7,8%, КСАИ - 24,2 усл.ед., что соответствует I стадии ССД.

ПримерЗ. Больная А., 33 года. Диагноз. ССД хронического течения, II стадии, I степени активности. Плотный отек, индурация и гиперпигментация кожи, синдром Рейно, полиартралгии, начальные проявления поражения желудочно-кишечного тракта. Длительность заболевания 4 года. Начало заболевания с синд-рома Рейно. Объективно: плотный отек кистей, индура- ция и гиперпигментация кожи конечностей, живота, лица, выраженный синдром Рейно. Рентгеноскопия желудочно-кишечного тракта - гастроптоз, явленуя гастрита, спастическая деформация толстого кишечника. На ЭКГ - дистрофические изменения мио- карда. В общ.ан.крови - ускорение СОЭ не наблюдается (14 мм/час), ЦИК в сыворотке крови - 1,3 ед. ОП, IJ - супрессоры-4,2%, ty-хелперы-7,7%, АСЛ-11%, КСАИ-34,0 усл.ед.. Данное значение КСАИ является от- ражением начала иммунологической генерализации заболевания, предшествующей клинической генерализации и соответствует I стадии ССД.

П р и м е р 4. Больная К., 54 годя Диаг- ноз: ССД хронического течения, вюрой стадии, I стадии активности. Диффузный пневмофиброз, кардиосклероз, эзофагит, гиперпигментация кожных покровов, синдром Рейно. Длительность заболевания 23 года. Объективно: состояние больной средней тяжести, цианоз губ, акроцианоз, одышка. Отмечается выраженный синдром Рейно, гиперпигментация кожи лица, симптом кисета. На рентгенограмме органов грудной клетки - диффузный пневмофиброз. На ЭКГ- синусовая брадикардия. Гипертрофия левого желудочка, перегрузка миокарда левого предсердия. В общем анализе крови: ускорение СОЭ до 25 мм/мае, ЦИК-2,2 ед, ОП, Tj-супрессоры - 4,2%, Ъ, - хелперы - 5,4%, АСЛ - 18%, КСАИ - 79,4 усл.ед., что соответствует II стадии ССД.

Пример 5. Больная X., 42 года. Диагноз: ССД хронического течения, терми- нальная стадия (III), активность III степени. Выраженные сосудистые и трофические нарушения (синдром Рейно, множественные стойкие изъязвления на кончиках пальцев рук, выпадение волос, падение массы тела на 15 кг), поражение кожи (индурация и атрофия), склеродермический полиартрит, диффузный пневмофиброз, легочная недостаточность III степени, декомпенсирован- ное легочное сердце - НК II Б - III ст. Больная погибла при явлениях нарастающей легочно-сердечной недостаточности.

Длительность заболевания 15 лет. Начало заболевания с синдрома Рейно. Объективно: состояние больной крайне тяжелое. Диффузный цианоз, нарастающая одышка, набухшие шейные вены, отеки на ногах, печень выступает на 4 см из-под края реберной дуги. Отмечается выраженный синдром Рейно, синюшность пальцев кистей с изъязвлениями и дистрофическими изменениями, цианоз пальцев стоп, индурацип и гиперпигментация кожи лица и конечностей, симптом кисета. На рентгенограмме органов грудной клетки-диффузный пиевмофиб- роз. На ЭКГ-синусовая тахикардия, желудочковые экстрасистолы, блокада правой ножки пучка Гиса. Гипертрофия обоих желудочков п левого предсердия с дистрофическими изменениями и перегрузкой в миокарде. В общ. ан. крови - ускорение СОЭ до 42„мм/час, ЦИК - 2,8 ед. ОП, РФ в латекс-тесте 1/120, Т -супрессоры - 4,7%. Ту,- хелперы - 4,4%. АСЛ - 16%. КСАИ - 77,4 усл.ед., что соответствует развернутой стадии заболевания (II и III),

Данный пример не вошел в предстзв- пенную таблицу. Однако иммунологическое обследование данного случая показано, что выраженность иммунологических сдвигов, а также цифровое значение КСАИ не выходят за пределы показателей генерализованной стадии, что является подтверждением приоритета физического износа пораженных органов в патогенезе развития терминальной стадии заболевания.

Положительный эффект от использования предлыаемого способа, в сравнении с прототипом, состоит в повышении точности, что подтверждается показателями всех групп больных, которые не перекрещиваются, позволяя проследить за развитием стадий, показывая его достоверность. Кроме того, способ обеспечивает раннюю диагностику и прогноз перехода начальной стадии и развернутую стадию ССД,

Ранняя диагностика возможна при условии специфичности способа. Т ак, при рас- дг п «100 (усл.ед.), где

чете соотношения

Т; х T}v

АСЛ, реагирующие с тем же кожным антигеном, в группе больных хронической экземой его цифровое значение составляет: 5,55±0,5 усл.ед. при М±2ст от 2.6 до 8,4 усл.ед. против 16,9±0,9 усл.ед. при М±2(7 от 8,7 до 25,1 усл.ед. у больных с I стадией ССД (,01). Ускорение способа и снижение трудоемкости, по сравнению с прототипом, обеспечивается за счет одномоментного исследования 10 человек, время исследования 24 ч (в прототипе 5-7 дней). Способ неинвазивен и осуществить его можно в амбулаторных условиях, тогда как прототип предусматривает эндоскопические, рентгенологические и другое комплексное обследование, требующее стационарного наблюдения.

Формула изобретения Способ диагностики стадий развития системной склеродермии, включающий исследование крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, обеспечения ранней диагностики, ускорения способа и снижения трудоемкости, в периферической крови больного определяют количественное содержание антигенсвя- зывающих лимфоцитов, реагирующих с

кожным антигеном, 7 -супрессоры и Т -хел- перы. вычисляют в условных единицах отношение антигенсвязывающих лимфоцитов к произведению TJ и Т и при.значении от 11,8 до 24,2 диагностируют I стадию заболевания, от 34,0 до 79,5 диагностируют II стадию системной склеродермии.

Изобретение относится к иммунодиагностике активного патологического процесса при системной склеродермии (ССД). Цель изобретения - повышение точности, обеспечение ранней диагностики, ускорение способа и снижение трудоемкости. Для исследования берут кровь из локтевой вены в объеме 2-3 мл. Для выделения лимфоцитов используют градиент плотности фиколл-верографин (1,077 г/мл). Количественную оценку антигенсвязывающих лимфоцитов (АСЛ), реагирующих с кожным антигеном, проводят на основе метода непрямого ро- зеткообразования. Количественную оценку Ту- супрессоров и Т)м- хелперов проводят в тесте ЕА-розеткообразования. Результаты определения . Ту - лимфоцитов и АСЛ выражают относительным показателем в процентах к числу циркулирующих в периферической крови лимфоцитов Рассчитывают отношение АСЛ к произведению Т и лимфоцитов, выражая его в условных АР Л АСЛ х 100% (уел ед.) Ана т/ единицах. ъ лиз показал, что у больных ССД в 1 стадии: 11,8 уел ед. при 24,2 усл.ед у больных ССД II стадии. 34..0-79.5 усл.ед., 1 табл. сл С

Показатели КСАИ у здоровых лиц и больных ССД в зависимости от стадии заболевания