Способ прогнозирования течения пневмофиброза Советский патент 1992 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии и фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пневмофиброза у больных с воспалительными и грануломатозными заболеваниями органов дыхания.

Известен способ прогнозирования развития фиброзных изменений в легких, основанный на определении в крови больных содержания гистамина и гистаминопектического индекса при увеличении содержания первого показателя и снижении гистаминопектического индекса, где прогнозируют развитие пнезмофиброза в исходе заболевания легких.

Однако способ является мало информативным, поскольку содержание гистамина в кровотоке изменяется при целом ряде физиологических и патологических состояний, не связанных с легочной патологией, и кроме того, имеет диагностическое значение только в детском возрасте.

Наиболее близким к заявленному способу по технической сущности и достигаемому результату является способ прогнозирования развития пневмофиброза путем подсчета количества оэзинофилов в бронхоальвеолярном смыве (БАС). На основании длительных динамических наблюдений авторами установлено, что увеличение числа зозинофилов в БАС свыше 70000 в миллилитре или 3% от общего количества выделенных клеток является критерием, указывающим на последующее прогрессирование склеротических и фиброзных изменений в легких и, наоборот, содержание данных клеточных элементов в БАС ниже указанного уровня свидетельствуют о стабильном течении пневмофиброза.

Однако данный способ имеет ряд недостатков.

Во-первых, способ обладает недостаточной чувствительностью 75.0%, а в группе больных со стабильными фиброзными проявлениями 58,3%. что прежде всего связано с относительно малым содержанием эозинофиловув БАСпо отношению ко всем клеточным элементам и, следовательно.

возможной вариабельностью результата при подсчете клеток под микроскопом.

Во-вторых, на полученные результаты часто -10жет влийть примесь эозинофилов енеальвеолярного происхождения, которые попэдают в БАС из крови в результате кровоточивости или случайного повреждения слизистой бронха при бронхоскопии, либо из бронхиального секрета у больных с острыми и хроническими воспалительными заболеваниями бронхиального дерева.

В-третьих, способ недостаточно специф11мен для прогнозирования фиброза легких, поскольку количество эозинофйлов в БАС увеличено у длительно курящих лиц, при различных аллергических состояниях, в частности бронхиальной астме до 20%,

Все вышеуказанные факторы не позволяют широко использовать данный способ прогнозирования развития пневмофибрс38 в клинической практике, как не обладающий необходимыми точностью и специфичностью,

Цель изобретения -- повышение точности и специфичности способа.

Поставленная цель достигается тем, что из бронхоальвеолярного смыва больных выделяют суфрактант, исследуют в нем содержание фосфолипидных компонентов и при содержании фосфатидилхолика (ФХ) от 1,20 до 16,49 мкМоль фосфора (Р)/л лаважной жидкости прогнозируют уменьшение или стабилизацию фиброзных изменений в легких, а при значениях ФХ сурфактанта от 16,53 до 22,65 мкМоль (Р)/л прогнозируют прогрессирование пневмофиброза у больных.

Способ осуществляется следующим образом.

Бронхоальвеолярный смыв получают во время проведения планового фибротрахаобронхологического исследования при поступлении больных в стационар. Забор БАС производят по методике, разработанной Центральным НИ1/1 туберкулеза МЗ СССР. В соответствии с данной методикой после введения фибробронхоскопа производят осмотр слизистой бронхов и бронхоскоп устанавливают в устье среднедолевого бронха, затем подвигают микроирригатор до устья бронхов 5-6 порядка. С помощью шпр11ца через микроирригатор дробно вводят до 20 мл (всего 100- 150 мл) стерильного физиологического раствора с рН 7,2 - 7,4, прогретого до температуры 38 - 40°С. После каждого введения жидкости с помощью вакуум-аспирата через введенный микроирригатор отсасывают ее в стерильную охлажденную емкость. Полученный БАС фильгруют через 4 слоя стерильной марли в

центрифумчные пробипк.и ii 11,енр11ф/гиру|;:л в течение 10-15 мин со скоростью 1500 оборотов8 1 мин.

Всю надосадочную жидкость используют для получения сурфактанта. Сурфактант получают методом Абраме. Для этого надосадочную жидкость центрифугируют при 1000 g в течение 1 ч. Белки крови и другие растворимые примеси удаляют. Осадок, содержащий фракцию сурфактанта, суспендируют в 20%-ном растворе NaCl, имеющем плотность 1,15 г/мл, и центрифугируют третий раз при 1500 g 25 - 30 мин. Фракция сурфактанта флотирует на поверхность раствора в виде пленки белого или бледно-желтого цвета. Пленку снимают, диспергируют в 5 мл 0,9%-ного раствора NaCI, диализуют против 0,9%-ного раствора NaC при 4°С в течение 12 ч.

0К сурфактанту, полученному из БАС,

приливают смесь хлороформметанола (2 ; 1) из расчета 20 мл на 1 мл суспензии сурфЗктанта. Экстракцию ведут при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем экстракт фильтруют через обезжиренный бумажный фильтр. Смесь оставляют на несколько часов в холодильнике для расслоения фаз. Затем верхнюю водно-метаноловую фазу отсасывают, а нижнюю,

0 содержащую ли-пиды, упаривают с помощью водоструйного насоса. Полученный осадок, растворенный в хлороформе, наносят на стеклянные пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля, в виде пятна. Разделение фосфолипидов проводят методом восходящей хроматографии в cиcтeгv1e растворителей хлороформ - метанол - уксусная кислота - вода (50 ; 30 : 8 ; 4). Пластинки высушивают при комнатной температуре до

0 исчезновения запаха компонентов разделяющей смеси. Фосфолипидные фракции проявляют в парах йода. 8 сурфактанте БАС регистрируют на основании индентификации 4 фракции; лизофосфатидилхолмн, сфингоми5 елин, фосфатидилхолин (самая большая фракция) и фосфатидилзтаноламин. Количественный учет содержания фракции фосфатидилхолина осуществляют по фосфору общепринятым методом.

0 Для этого данную фракцию вместе с силикагелем соскребают в пробирку м минерализуют в концентрированной серной кислоте при 225°С в течение 60 мин. Сжигание фосфора происходит при добавлении

5 30%-ного раствора перекиси водорода. Избыток перекиси удаляют добавлением нескольких капель 33%-ного раствора сульфита натрия. В кзждую пробу добавляют 1,0 мл 2.5%-ного молибдата аммония и 0,5 мл 2%-ного раствора аскорбиновой кислоты. Пробирки помещают в кипящую баню на 10 мин. Пробы колориметрируют на спектрофотометре СФ-4А при длине волны 822 нм. Для построения калибровочного графика использовали растворы однозамещенного фосфорнокислого калия,

Полученные результаты пересчитывают и выражают содержание фосфора в мкМоль Р/л лаважной жидкости,

П р и м е р 1. Больной К. 41 года (ист, болезни № 2845) поступил в стационар с жалобами на кашель с мокротой, слабость. Считает себя больным около ме.сяца, к врачам не обращался. При рентгенологическом исследовании у больного в верхней доле правого легкого обнаружен участок инфильтрации легочной ткани без четких контуров, неоднородной структуры, единичные очаговоподобные тени средней интенсивности. Легочный рисунок в этой зоне избыточен, деформирован. Корни структурны. На остальных участках легочные поля без видимой патологии. Больному бы установлен клинический диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада.

В дальнейшем диагноз был подвержден обнаружением при посеве мокроты микобактерий губеркулеза.

При поступлении в стационар больному проведена поднаркозная трахеобронхоскопия с взятием для исследования БАС, Эндоскопическое исследование ке выявило у больного патологии со сп-роны бронхиального дерева. Из БАС по вышеописанной методике выделен сурфактант. Содержание в нем фракции фосфатидилхолина составило 1,20мкМоль Р/л, Больному проводилось лечение 3 противотуберкулезными препаратами: изониазидом, стрептомицином и рифампицином. С 3-го месяца вместо стрептомицина больному назначен этамбутол. Помимо противотуберкулезных преператов больной получал ингаляцию с солютизоном, витаминотерапию, курс ультразвуковой терапии на правую половину грудной клетки.

Через 6,5 месяцев лечения больного выписывают из стационара с диагнозом; очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, БК - , На рентгенограмме при выписке в верхней доле правого легкого определяются плотные очаги на фоне избыточности и деформации легочного рисунка. При динамическом исследовании больного через год после поступления в стационар на рентгенограммах картина в легких остается прежней. При сопоставлении с предыдущей рентгенодокументацией не отмечено прогрессирования фиброзньх изменений в пег ких.

Таким образом в данном случае в соответствии с формулой предполагаемого изобретения низкое содержание ФХ с сурфактанте больного позволило правильно прогнозировать стабилизацию фиброзных изменений в легких,

П р и м е р 2. Больная С.А., 40 пет поступила в стационар с диагнозом: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада. Заболела остро за 2 недели до поступления. На рентгенограммах и томограммах в Si, 82 правого легкого на фоне избыточности легочного рисунка определяется крупный очаг средней интенсивности с просветлением, группа мелких очагов 0,2 - 0,3 см. На остальном протяжении легкие без видимых изменений. При бронхологическом исследовании у больной патологии со стороны слизистой бронхов не обнаружено. По вышеуказанной методике определено содержание фосфатдилхолина в сурфактанте, которое составило 16,53 мкМоль Р/л,

Больная получала стандартное противотуберкулезное лечение 3 противотуберкулезными препаратами: изониазидом, стрептомицином рифа.мпицином на фоне патогенетической терапии. Диагноз у больной был подтвержден обнаружением микобактерий туберкулеза в промывных водах бронхов бактериологическим методом.

Через 4 месяца при выписке больной из стационара рентгенологически в верхней доле правого легкого определялась густая тяжистость, мелкие интенсивные очаговые тени. Усилен легочный рисунок в прикорневых отделах обоих легких. Больная выписана из стационара с диагнозом: очаговый туберкулез в доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, БК -. При рентгенологическом исследовании спустя 8 месяцев: в верхней доле правого легкого выраженные фиброзные изменения, интенсивные очаги. Легочный рисунок в обоих легких усилен, в прикорневых отделах деформирован. При сопоставлении с предыдущими рентгенограммами отмечается прогрессирование пневмосклероза.

Таким образом у данной больной содержание ФХ в сурфактанте составило 16,53 мкМоль Р/л, что в соответствии с формулой изобретения указывает на прогрессирование пневмофиброза. Такое прогрессирование и имело место у данной больной на фоне благоприятной динамики туберкулезного процесса в верхней доле правого легкого.

В таблице приведены данные содержания фосфатидилхолина в сурфактанте, выделенного из БАС у больных с различной динамикой фиброзных изменений в легких.

Благодаря высокой точности, специфичности. воспро зводимости данный способ может быть использован в любом крупном пульмонологическом стационаре. Следовательно, новая совокупность признаков позволила получить новый и значительный положительный эффект.

Способ апробирован в ЦНИИ туберкулеза МЗ СССР.

Формула изобретения Способ прогнозирования течения пневмофиброза. включающий взятие пробы бронхоальвеолярного смыва и ее лабораторный анализ, отличающийся тем. что. с целью повышения точности и специфичности способа, из смыва получают сурфактант, в нем определяют уровень фосфатидилхолина и при значении этого показателя 1.20- 16.49 мкМоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а при значениях 16.53-22,65 мкМоль Р/л - неблагоприятное.

Использование: медицина, а именно пульмонология и фтизиатрия, для прогнозирования развития пневмофиброза у больных с воспалительными и гранулематозны- ми заболеваниями органов дыхания. Цель: повышение точности и специфичности способа. Сущность изобретения: из пробы бронхоальвеолярного смыва получают сур- фактат, в котором определяют уровень фос- фатидилхолина и при значении этого показателя 1,20 - 16-49 мкмоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а при значении 16 - 53 - 22,65 мкмоль Р/л неблагоприятное. Положительный эффект: точность прогноза составляет 93,2%. 1 табл.