Способ прогнозирования течения туберкулеза легких при проведении лекарственной терапии Советский патент 1991 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине и касается способов оценки эффективности лекарственной терапии туберкулеза легких.

Целью изобретения является повышение точности прогнозирования.

Способ осуществляется следующим образом.

Получение альвеолярных макрофагов осуществляют при проведении фиброброн- хоскопии, которую проводят под местной анестезией. Носовые ходы задней стенки глотки, надгортанник и голосовые складки смазывают 5%-ным раствором лидокаина, либо 10%-ным раствором новокаина, после чего вводят фибробронхоскоп до бифуркации трахеи. Через микроирригатор по мере продвижения аппарата и появления кашле- вого рефлекса вводят дополнительно анестезирующее вещество. После введения фибробронхоскопа проводят осмотр слизистой бронхов и устанавливают бронхоскоп в устье среднедолевого сегментарного бронха, затем продвигают микроирригатор до устья бронхов 5-6 порядка. С помощью

шприца через микроирригатор вводят дробно по 20 мл(всего 100-150 мл) стерильного физиологического раствора с рН 7 2-7,4, подогретого до 38-40°С После каждого введения жидкости с помощью вакуум-аспирата через введенный микроииригатор отсасывают ее в стерильную емкость Полученный бронхоальвеолярный смыв (БАС) фильтруют через 4 слоя стерильной марли в центрифужную силиконизированную пробирку В БАС определяют жизнеспособность альвеолярных макрофагов (AM) путем добавления семи капель отфильтрованного смыва с одной каплей 1%-ного раствора трипанового синего на часовом стекле Через 3-5 мин этой смесью заполняют счетную камеру Го- ряева. Жизнеспособные макрофаги не воспринимают окраску и остаются бесцветными, а нежизнеспособные клетки диффузно прокрашиваются трипановым синим. Подсчитывают 100 альвеолярных макрофагов. Макрофаги, не воспринявшие окраску, составляют процент жизнеспособности. Для подсчета общего количества кле(Л

С

о со о со

VI

ток в 1 мл ЬЛС берут 10 капель профильтро ванного смыоа смешивают его на часовом стекле г 1 каплей жидкости Симеона и за- попняют счетную камеру Подсчет клеток проводят по всей камере и определяют их число в 1 мл смыва Оставшийся профильтрованный БАС центрифугируют при комнатной температуре в течение не менее 10 мин со скоростью 1500 об/мин Из осадка приготавливают мазки, которые высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова и окрашивают краской Романовского в течение 4 мин Эндо- пульмональную цитограмму определяют при подсчете не менее чем 500 клеток с использованием иммерсионного объектива при этом учитывают AM, лимфоциты, нейт- рофилы эозинофилы и другие клетки Для выделения AM из общей смеси клеточных элементов используют метод центрифугирования в феколверографиновом градиенте плотности Клеточный осадок ресуспенди- руют в 6 мл среды Хенкса или ГФ 199 и наслаивают на 3 мл фекола с градиентом плотности 1075, после центрифугирования 20 мин при 3000 об/мин клетки проходя через градиент плотности, распределяются в различных слоях фекола фракция AM располагается в виде кольца несколько ниже границы, разделяющей среду Хенкса или Nfe 199 и фекол Пастеровской пипеткой отсасывают кольцо AM, переносят в пробирку, подсчитывают общее количестом AM и жизнеспособность AM указанным выше способом Затем клетки 2 раза промывают, приливая по 7-8 мл среды Хенкса или № 199, перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин Супернатат сливают, отмывают, AM pecyc- пендируют в дистиллированной воде в соотношении 0,5x10 клеток в 1 мл и замораживают при t - 20°С на 5 мин затем помещают в водяную баню (t - 45°C) на 5 мин (повторяют трижды с целью разрушения клеточных мембран) Для получения ли- пидного экстракта используют спиртоэфирную смесь Блюра Тонкослойную хромато рафию фосфолипидов осуществляют на стеклянных обезжиренных пластинках размером 90x120 мм, покрытых слоем сорбента состоящих из взвеси сили- кагеля (Л 5/40 мк, ЧССР) и медицинского гипса в воде Фосфолипидные Фракции разделяют с помощью одномерной хроматографии в системе растворителей хлороформ-метанол вода 65 25 4 (Wagner ctall, 1961) Пластинки высушивают при комнатной температуре до исчезновения запахов компонентов разделяющей смеси Проявляют п парах йода и осуществляют

количественный учет фракций по фосфору Общее количество липидного фосфора определяют следующим образом к сухому остатку добавляют 0,25 мл раствора хлорной

кислоты и помещают пробу на песчаной бане, где ее выдерживают до обесцвечивания смеси. В пробирку добавляют по 1,25 мл дистиллированной воды Готовят контрольную и три стандартные пробы Контрольная

0 проба состоит из 0,2 мл раствора хлорной кислоты и 1,3 мл воды, стандартные пробы- из 0,5 мл раствора фосфата калия, 0.2 мл хлорной кислоты и 0,8 мл воды В каждую пробирку прибавляют по 0,25 мл раствора

5 молибдата аммония Содержимое пробирок тщательно перемешивают и приливают 0.25 мл раствора аскорбиновой кислоты. В контрольную и стандартные пробы добавляют по 0,5 мл воды, а объем опытных проб дово0 дят водой до 2,5 мл Содержимое проб перемешивают и через 20 мин после доливания реактива аскорбиновой кислоты все пробы спектрофотометрируют. Полученные показатели перерассчитывают и выражают со5 держание фосфора в мкг /10 клеток

Прогнозирование характера течения туберкулеза легких при проведении лекарственной терапии определяют по содержанию фосфатидилэтаноламиновой

0 фракции фосфолипидов в AM При содержании фосфатидилэтаноламиновой фракции фосфолипидов в AM 0,6 мкг Р/106 клеток и более прогнозируют исход заболевания с формированием в легких больших остаточных

5 изменений, а при содержании фосфатидилэтаноламиновой фракции фосфлипидов в AM от 0-0 58 мкг Р/10 клеток- исход заболевания с малыми остаточными изменениями в легких

0Способ иллюстрируется следующими

примерами

Пример 1 Больной С , 48 лет, находился на лечении в клинике института фти- зиопульмонологии с декабря по июль с

5 диагнозом: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада, МВТ - Клинические признаки заболевания отсутствовали Гемограмма в норме Рентгенологически в верхней доле правого легкого на

0 фоне усиленного бронхососудистого рисунка с дорожкой к корню легкого определяли густо расположенные полиморфные очаги мелких и средних размеров в некоторых из них имелись участки просветления округлой

5 формы (деструкции) В альвеолярных макро фагах БАС определили содержание фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов 0,63 мкг Р/106 клеток Прогнозировали течение заболевания с боль шими остаточными изменениями в легких

Проводилось лечение изонилэид, этямбу тол, стрептомицин, который затем заменен на тизамид, ингаляции салютизона, фоно- форез гепарина N 20 на проекцию версией доли правого легкого. Через 8 мес лечения наступила стабилизация легочного процесса. Основной курс лечения закончен. В легких определялись большие остаточные изменения. Рентгенологически определяли в верхней доле правого легкого сохранение множественных разновеликих очагов на фоне фиброзных изменений, в некоторых очагах по-прежнему сохранились участки просветления. В нижней доле правого легкого определялся умеренно выраженный пневмофиброз. Диагноз: очагояый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МВТ -. Прогноз подтвердился, лечение закончилось с формированием в легких больших остаточных изменений.

Пример 2. Больной Б.. 32 лет, находился на лечении с января по апрель, затем антибактериальное лечение (изониазид, этамбутол, рифампицин) продолжал в санаторных и амбулаторных условиях до декабря по поводу клинического диагноза: инфильтративный туберкулез нижней доли левого легкого, МБТ -. Клинические признаки туберкулезной интоксикации определялись только на первом месяце лечения. Рентгенологически в шестом сегмонте нижней доли левого легкого определяли, ин- фильтративное затемнение неоднородной структуры с нечеткими контурами, вредней интенсивности. В корне легкого и во втором сегменте справа - единичные мелкие каль- цинаты. В альвеолярных макрофагах БАС определяли содержание фосфатидилэтано- ламиновой (кефалин) фракции фосфолипи- дов.- 0,72 мкг фосфора /106 клеток. Прогнозировали течение заболевания с большими остаточными изменениями в легких. В процессе лечения рентгенологическим методом выявлено значительное рассасывание инфильтративных изменений в нижней доле левого легкого. Через 6 мес лечения наступила стабилизация процесса. В декабре 1988 г. в легких сохраняется фокус размером до 1,5 см на фоне выраженного пневмофиброза и кальцинатов во втором сегменте и корне правого легкого. Диагноз: туберкулез на нижней доле левого легкого. Прогноз течения заболевания с большими остаточными изменениями в легких подтвердился.

Пример 3. Больная 3. находилась на лечении с декабря по ноябрь следующего года с диагнозом: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе

распада. МБ - Рентгенологически определяли в верхней доле правого легкого ин- фильтративную тень размером см без четких контуров с полостью распада в цент 5 ре, вокруг единичные мелких размеров оча- говые тени с бронхососудистой дорожкой к корню легкого. Клинические признаки туберкулезной интоксикации сохранялись в течение первых двух месяцев лечения, за0 тем общее состояние больной было удовлетворительное. В альвеолярных макрофагах БАС определяли содержание фосфатидилэ- танопаминовой (кефалина) Фракции фосфо- липидов 1,54 мкг фосфора/10 кпеток.

15 Прогнозировали исход заболевания в конце лечения с большими остаточными изменениями в легких. В течение 12 мес проводилось лечение антибактериальными препаратами: изониазид, рифампицин.

0 стрептомицин в течение 3 мес, затем последний заменен ня этамбутол. В ингаляциях использовали изониазид и салютизон Проводилось и патогенетическое лечение: пирогенал и ультразвук. В течение первых 6

5 мес наблюдалась положительная динамика туберкулезного процесса в легких частичное рассасывание воспалительных изменений, уменьшение пззмпрой инфильтрата в первом сегменте правого легкого, полость

0 распада сохранилась От показанного хирургического лечения больная отказалась. В последующие С МРС продолжалось консервативное лечение знтибакпрепарзтами до тол ной стабилизации легочного процесса.

l Через 12 мое течения в легкч-/, сформировались большие остаточные изменения (в ерехней доле правого легкою определяли туберкулему с краевым участком просветления, фиброзные изменения и единичные

0 очаги вокруг с четкими очертаниями). Диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ -. Прогноз течения забо левания с большими остаточными измене5 ниями подтвердился.

Пример 4. Больная С, 28 лет. находилась на лечении с марта по июль, затем лечение антибактериальными препаратами (стрептомицин, изониазид, рифадин, этам0 бутол) продолжала в санаторных и амбулаторных условиях до ноября с диагнозом: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого вфазе инфильтрации, МБТ+. Клинические признаки интокискации отсутствова5 ли. В начале лечения рентгенологически в верхней доле правого легкого на фоне усиленного бронхососудистого рисунка определял полиморфные очаговые тени с умеренно выраженной дорожкой к корню. В альвеолярных макрофагах БАС определяли содержание фосфзтидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов в виде следов (количественному учету не подлежало 0). Прогнозировали исход заболевания с малыми остаточными изменениями После окончания (ноябрь 1988 г) основного курса лечения в первом и втором сегментах правого легкого сохранялись деформация легочного рисунка и единичные мелкие очаги. Диагноз, очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ-. Прогноз течения заболевания с малыми остаточными изменениями в легких подтвердился.

Пример 5. Больная Я.. 28 лет, находилась на лечении с апреля по октябрь с диагнозом, инфильтративный туберкулез верхней доли левого легкого в фазе распада, МБТ К В начале лечения рентгенологически в верхней доле левого легкого определяли усиление бронхососудистого рисунка с широкой дорожкой к корню и множественные густо расположенные разновеликие очаги воспаления, местами сливающиеся в инфильтраты с участками деструкции. При поступлении в клинику определялись умеренно выраженные клинические признаки интоксикации, которые исчезли через месяц лечения Получала антибактериальные срг-дства стрептомицин изониазид, рифа- дин, этамбутол. В альвеолярных макрофагах БАС определяли содержание фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов 0,22 мкг фосфора/10 клеток Прогнозировали течение заболевания с малыми остаточными изменениями В конце основного курса лечения (через 7 мес) в легких полости распада рентгенологически не определялись, сохранялись единичные мелкие, интенсивные очаги в первом и втором сегментах левого легкого Диагноз очаговый туберкулез верхней доли левого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ -. Прогноз течения заболевания подтвердился в легких определялись мелкие остаточные изменения.

Пример 6. Больной Л , 55 лет., находился на лечении (получая стрептомицин, изониазид, тизамид) с января по май, затем антибактериальное лечение (изониазид этамбутол) продолжал в санаторных и амбулаторных условиях до декабря по поводу установленного клинического диагноза: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе инфильтрации, МБТ -. Клинические симптомы туберкулезной интоксикации отсутствовали Рентгенологически в верхней доле правого легкого определяли множественные полиморфные очаги, некоторые очаги осумкованные и неструктурные в центре на фоне деформации легочно- ю рисунка и пневмосклероза. 0902.88 в альвеолярных макрофагах БАС определяли

содержание фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов 0,58 мкг фосфора/106 клеток. Прогнозировали течение заболевания с малыми остаточными изменениями в легких. В процессе лечения

отмечалось значительное рассасывание пе- рифокальной инфильтрации вокруг очагов и полное рассасывание большинства очагов в верхней доле правого легкого. После окончания лечения в верхней доле правого легкого сохранились только деформация неточного рисунка и единичные мелкие фиброзные очаги. Диагноз: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ - Прогноз

течения заболевания подтвердился, после окончания лечения в легких сохранялись малые остаточные изменения.

Таким образом, определение у больных активным туберкулезом легких в начале лечения в альвеолярных макрофагах БАС фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов дает возможность в ранние сроки правильно определять прогноз течения заболевания, в частности формирование характера (величины) остаточных изменений в легких в 88.2% случаев. Своевременное прогнозирование развития больших остаточных изменений в легких у больных туберкулезом позволяет обосновать выбор адекватного этиотропного и патогенетического лечения, направленного на более совершенное рассасывание туберкулезного процесса в легких и формирование малых остаточных изменений, что в последующем может значительно сократить частоту обострений и рецидивов заболевания.

Формула изобретения Способ прогнозирования течения туберкулеза легких при проведении лекарственной терапии путем клинико-лабораторного обследования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, определяют содержание фосфатидилэтаноламиновой

0 фракции в альвеолярных макрофагах и при содержании этой фракции менее 0,58 мкг Р/106 клеток прогнозируют течение заболевания с малыми остаточными изменениями в легких, а при содержании этой фракции 0,6

5 мкг Р/106 клеток и более прогнозируют течение заболевания с большими остаточными изменениями в легких

Изобретение относится к медицине и касается способов оценки эффективности лекарственной терапии туберкулеза легких. Целью изобретения является повышение точности прогнозирования Для этого определяют содержание фосфатидилэтанолэми- на в альвеолярных макрофагах и при содержании этой фракции 0 0,58 мкг Р/10 клеток прогнозируют течение заболевания с малыми остаточными изменениями в легких, а при содержании 0,6 мкг Р/106 клеток и более - течение заболевания с большими остаточными изменениями в легких