Способ ингибирования активности фермента аскорбатоксидазы в проростках ячменя Советский патент 1993 года по МПК C12Q1/26 

Изобретение относится к области физиологии растения, в частности к регуляции обмена веществ.

Существует способ регуляции активности ферментов с использованием ингибиторов. В частности, для регуляции активности аскорбатоксидазы широко применяется ди- этилдитиокарбамат. .

Однако данный способ имеет следующие недостатки:

а) для введения ингибитора в ткань листа используется метод вакууминфильтра- ции, требующий специального оборудования для создания вакуума;

б) ингибитор готовится на буферном растворе, что требует дополнительных реактивов для приготовления буфера и усложняет процедуру приготовления ингибитора.

Целью предложенного способа является регуляция активности аскорбатоксидазы путем введения в растения ингибитора фермента, салицилальдоксима, при этом упрощена процедура введения ингибитора в ткань листа и сокращено время приготовления ингибитора.

Поставленная цель достигается тем, что срезанные листья проростков ячменя помещаются срезом в раствор салицилальдоксима () в концентрации 5-1074 М. Is Данная концентрация обладает ма ксималь- Н ным ингибирующим эффектом по сравнению другими исследованными - и 5-10 М. При всасывании листьями раствора вместе с водой в лист поступает салици- лальдоксим, который вызывает ингиёирование активности аскорбатоксидазы.

Заявляемый способ соответствует критерию изобретения новизна, так как впервые для ингибирования активности фермента достигается не за счет введения ингибитора в ткань листа методом вакуу- минфильтрации, а путем помещения сре- занных листьев в раствор салицилальдоксима срезанной частью. Это позволяет заключить, что заявляемый способ соответствует критерию существенные отличия.

Ингибирование активности аскорбатоксидазы в 7-дневных проростках ячменя 5 10 М раствором салицилальдоксима в

Ё

VI

Со Оч

о

VI О

темноте и на свету демонстрируют данные опытов (табл..1 и 2).

Опыт 1. Срезанные листья проростков ячменя помещались на 1 ч или на 24 ч в раствор салицилальдоксима в темноту (табл.1). В присутствии ингибитора через 1 ч произошло снижение активности аскорба- токсйд азы. и этот эффект сохранялся и при суточной экспозиции.

Опыт 2. Срезанные листья проростков ячменя помещались на 1 ч или на 24 ч в раствор салицилальдоксима на свет (табл.2). В присутствии ингибитора активность аскорбатоксидазы снизилась на 52% и при часовой и при суточной экспозиции. Следует отметить, что величина ингибирования активности аскорбатоксидазы салицилальдоксима была выше на свету, чем в темноте. . .:O:4.:v : .. . : : ;-:Л ;/.,.

В табл.3 приведены данные сравнительной эффективности ингибиторного дей- ствиясалицилальдоксима и диэтилкарбрмата натрия, в концентрации 0,005 М, которая обычно употребляется.

Указанная концентрация диэтилдитио- карбомата натрия оказала меньшее ингиби- рующее действие на активность аскорбатоксидазы, чем салицилальдоксим (5 ), . .; : :;: . ; ; . ...

Следует отметить, что салицилальдоксим ( М) в отдельных опытах проявлял большое инициирующее действие, доходящее до полного блокирования фермента (табл.4). Из представленных данных видно, что салицилальдоксим в концентрации5-10 М на 100% ингибировал аскорбатоксидазу зеленых и этиолированных проростков и только у альбиносов, отличающихся высокой активностью фермента, ингибирование бы

ло не полным, но максимальным из исследованных концентраций.

Таким образом, диэтилдитиокарбомат натрия для ингибирования аскорбатоксида5 зы рекомендуется вводить в ткань листа методом вакууминфильтрации, требующим создания вакуума, в то время как ингибирующее действие салицилальдоксима проявляется и при погружении срезанных листьев

0 в раствор, т.е. используется более простая и менее длительная процедура.

, Диэтилдитиокарбамат натрия готовится на буферном растворе, салицилальдоксим- на воде. Предварительное приготовление

5 буферного раствора также требует дополнительной затраты времени. Следовательно, на приготовление и использование ингибитора по способу-прототипу затрачивается значительно большее количество времени,

0 чем по предложенному способу.

Сравнительные данные об эффективности ингибиторного действия салицилальдоксима и диэтилдитиокарбамата натрия, говорящие о большей активности салици5 лальдоксима в ингибировании фермента ас-, корбатоксидазы. .

Формула и з о.б р е т е н и я I. Способ ингибирования активности фер- 0 мента аскорбатоксидазы в проростках яч м е- ня путем введения водного раствора ингибитора в ткань проростка, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения эффективности способа, в каче- 5 стве ингибитора используют водный раствор еалицилальдоксима в концентрации 5« А ОМ, а введение ингибитора осуществляют путем погружения среза листа в раствор ингибитора.. . .. :

0

Использование: физиология растений, биохимия растений. Сущность изобретения: в качестве ингибитора аскорбатоксидазы используют водный раствор салицилальдок- сима в концентрации М, а введение ингибитора осуществляют путем погружения среза листа в раствор ингибитора. 4 табл.

:«ч.

Влияние салицилальдоксима на ков ячменя, находящихся в темноте

Таблица 1

активность аскорбатоксидазы проростВлияние салицилальдоксима на активность аскорбатоксидазы проростков ячменя, находящихся на свету.Интенсивность света 30 тыс.эрг. .

Т а б лиц а 3

Влияние салицилальдоксима и диэтилдитокарбомата натрия на актив- / ность аскоррбатоксидазы проростков ячменя, находящихся на свету. Экспозиция 1 час. Интенсивность света 30 тыс. эрг. .

Влияние салицилальдоксима на активность листьев ячменя, различающихся по содержанию пигментов

Таблица 2

Таблица 4