Индикатор для определения наличия микроорганизмов в воде Советский патент 1993 года по МПК C12Q1/00 C12Q1/04 

Изобретение относится к микробиологическому контролю и может быть использовано в микробиологии, микроэлектронике, биотехнологии для контроля, содержания бактерий в деминерализованнрй воде.

В настоящее время для определения микроорганизмов в воде используют способ выращивания колоний бактерий на мембранных фильтрах, через которые пропускают определенный объем контролируемой воды.

Мембранный фильтр помещают в питательную среду и после инкубации в течение не менее 24 ч проводят подсчет количества колоний бактерий,, выросших на фильтре. Это значение характеризует содержание бактерий в контролируемой воде.

Для выявления колоний микроорганизмов используют индикатор - вещество, окрашивающее колонии бактерий.

Известен состав индикатора, включающий бриллиантовый зеленый, бромтимоло- вый синий, генциан фиолетовый и другие.

Однако указанные индикаторы не выявляют микроорганизмы, живущие в демине- рализованной воде.

Для определения микроорганизмов в деминерализованной воде известны индикаторы фирм Milh pore США и Gelman ФРГ, окрашивающие микроорганизмы в красный цвет. Недостаток указанного индикатора в том, что время на определение колоний микроорганизмов (время инкубации) не менее 24 ч.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является индикатор, содержащий 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) 0,005-0,01%, этанол ректификат 20-40%, остальное - дистиллированная вода, окрашивающий микроорганизмы в красный цвет. Время инкубации не менее 24 ч. Указанный индикатор выбран в качестве прототипа.

Целью изобретения является уменьшение времени проведения анализа за счет сокращения времени инкубации.

Указанная цель достигается тем, что в качестве индикатора для определения наличия микроорганизмов в воде используется смесь, содержащая 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, этанол и воду дистиллированную.

Сущность изобретения заключается в том, что он дополнительно содержит нитро- тетразолий синий при следующем соотношении ингредиентов, %:

2,3,5-трифенилтетразолий хлористый. 0,0017-0,005 нитро-тетразолий

синий0,0012-0,0025 этанол ректификат 5-19 дистиллированная вода остальное П р и м е р. В приготовленный по прописи питательный агар РПА или ДПА добав- ляют 6 мл раствора предлагаемого индикатора при соотношении ингредиентов индикатора: ТТХ 0,0025%, нитро-СТ 0,0017%; этанол ректификат 12%; остальное - дистиллированная вода. Полученный питательный агар с введенным индикатором наливают в стерильные чашки Петри, помещают в них фильтр, через который предварительно профильтровали пробу воды, и инкубировали при температуре 37±0,5°С. Через 14 ч появилось четкое, хорошее окрашивание колоний бактерий без окрашивания подложки. Подсчет колоний микроорганизмов проводили с помощью бинокулярной лупы пятикратного увеличения, Результаты указаны в табл.1 (серия опытов 5.3). Аналогично описанному в примере провели серии испытаний индикаторг при различных соотношениях ингредиентов и их данные также указаны в табл.1.

Достижение поставленной цели иллюстрируется также многими данными табл.2, где показано, что для одной и той же анализируемой деминерализованной воды при использовании е качестве индикатора фирменного состава Millipore, ТТХ и смеси

ТТХ с нитро-СТ (предлагаемый индикатор) при практически совпадающем количестве обнаруженных колоний время инкубации уменьшается значительно (на 7-10 ч) в случае использования предлагаемого мндикатора.

Формула изобретения

Индикатор для определения наличия микроорганизмов в воде, содержащий 2,3,5- трифенилтетразолий хлористый, зтанол,дм- стиллированную воду, о тличающийся тем, что, с целью сокращения сроков определения, дополнительно он содержит нит- ро-тетразолий синий при следующем соотношении ингредиентов, об.%:

2,3,5-трифенилтетразолий

хлористый0,0017-0,005

нитро-тетразолий

синий0,0012-0,0025 этанол ректификат 5-19

дистиллированная вода остальное.

Использование: определение наличия микроорганизмов в воде. Сущность: индикатор содержит 2,3,5-трифенилтетрззолий хлористый, этанол, нитро-тетразолий синий и воду. 2 табл.

а б л и ц а 1

Сравнительные данные реяупьтлтов испытаний индикатора при различных соотношениях ингредиентов

ентов индикатора, при котором постигнута поставленная цель, т.е. время инкубации меньше 2 i ц и подсчет колоний микроорганизмов возможен.

Знаком - отмечено соотношение ингредиентов индикатора, при котором не достигнута поставленная цель, т.к. время инкубации 2 или более члсоо или подсчет колоний микроорганизмов невоз- можен из-зп очень слабого окрашивания колоний или из-за слабого или яркого окрашивания подложки, на фоне которого нельзя подсчитать колонии микроорганизмов.

Рост микроорганизмов при анализе деминерализованной воды на разных

питательных средах и с различными индикаторами Таблица 2