Способ определения биогенности породы отвалов угольных шахт Советский патент 1982 года по МПК C12Q1/06 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОГЕННОСТИ ПОРОДЫ ОТВАЛОВ УГОЛЬНЫХ ШАХТ

Изобретение относится к сельскому и лесному хозяйству, а именно к опре делению биогенности породы промышлен ных отвалов при их биологической рекультивации . Известен способ индикации микроор ганизмов группы кишечной палочки в воде на питательных подкладках,изготовленных из листовой фильтровальной бумаги, пропитанных мясо-пептонным бульоном Хотингера с индикатором тетразолий хлористым. Выращивание микроорганизмов производится при 3037 в течение 10-1 ч 1. Недостатком этого способа является то, что он позволяет определять только бактерии группы кишечной палочки и используется как ориентирово ный, так как имеет большую определения. Известен способ индикации бактери на агаризованных средах в чашках Петри (метод Коха), который заключается в том, что готовится ряд разведений мясо-пептонного агара в стерильных пробирках метод; предельных разведений), после чего высевается определенный объем (1 мл) исследуемой суспензии в чашки Петри, заполненные (10 кп) мясо-пептонным агаром. Выращивание бактерий производится в термостате при 30°С в течение 2-3 сут, затем подсчитывается количество выросших колоний 2}. Недостатками данного способа являются большой расход питательной среды, большое количество специальной посуды и длительность определения, что создает определенные неудобства в экспедиционных условиях.. Цель изобретения - ускорение определения биогенности пород отвалов угольных шахт при биологической рекультивации. Поставленная цель достигается тем, что посев суспензии пород производят на полоски (фильтровальной бумаги

пропитанной мясо пептонным агаром, содержащим индикатор 2,3,5 -трифенилтетразолий хлорид.

Сапрофитные микроорганизмы., развивающиеся на мясо-пептонном агаре,дают s представление об общей биогенности почвы, так как микроорганизмы , раст.у щие на мясо-пептонном агаре, входят в состав различных сообществ (микроорганизмы, разлагающие органомине- tO ральный комплекс породы) и являются диагностическим показателем биогениости отвальных пород, подвергаемых рекультивации„

Длл индикации биогенности исполь- 15 зуют обеззоленные фильтры с белой ентой (среднефильтрующие), при пропитке которых мясо-пептониый агар распределяется paвt oмepнo по фильтру. При применении обеззоленных фильтров с го синей лентой (медленнофильтрующие) . и фильтров с красной лентой (быстрофильтрующие) , как показывают исследования, мясо-пептонный агар распределяется не равномерно, что влияет на 25 рост микроорганизмов и сказывается на точности анализов.

На основании экспериментальных данных установлено, что на индикаторных питательных бумажках, пропитан- зо ных мясо-пептонным агаром в кЪнцентрации меньше 34, рост сапрофитных микроорганизмов не обнаруживается, так как для их развития недостаточно питательного субстрата. Мясо-пептон- j, ный агар в концентрации больше 5 не впитывается фильтровальной бумажкой..

Выращивание сапрофитных микроорганизмов на индикаторных питательных умажках обеспечивает быстрое опре- 4о деление биогенности породы в течение 5-9 ч.

Методика проведения испытаний заключается в следующем.

Полоски фильтровальной бумаги (2x8,5 см)(обеззоленные фильтры с елой лентой) выдерживают в боксе од бактерицидными лампами в течение 10 мин (по 5 мин на каждой стороне). Мясо-пептонный. агар стерилизуют

втоклаве в течение 20 миНс при 120 С. Водный раствор индикатора 2,3 5-три- , енилтетразолий хлорида в концентации стерилизуют в пробирках отельно. Затем приливают к г/ ясо-пеп- 55 онному агару до концентрации индикатора 0,2. Полоски фильтровальной умаги, прикрепленные держателем к

штативу, опускают в стерильный мясопептонный агар с индикс-зтором. При этом полоски фильтровальной бумаги впитывают мяс0 пепгонный агар в течение 5 - -wO,6-0,, Пропитывание полосок фильтровальной бумаги производят при включенных облучателях. Полоски пропиуанной фильтровальной бумаги перекладывают на стерильную бумагу и подсушивают при бО°С в течение ц в сушильном шкафу. Готовят суспензию породы (1 г) в стерильной воде (100 мл) и пропитывают ею полоски полученных индикаторных бумажек S течение с, запаивают их в стерильные полиэтиленовые пакетики и помещают в термостат при 28-30°С. Через 5 ч подсчитывают рост бактериальных колоний с помощью микроскопа.

Пример 1. Определяется биогенность токсичной породы с отвала шихты, состоящей из аргиллитов, алевролитов и кварцевых песчанников с включениями пирита и содержащей следующие элементы, /;: общий углерод 9, общее железо 7,7; общий алюминий 8,7; общий азот 0,21; общая сера 1,1 фосфаты ,92; калий О , (J i ; медь 0,002; бор 0,17; марганец 0,27. Образцы породы отбирают перед рекультивационными работами и после окультуривания породы с глубины,в см: 0-5, 5-10, 10-20. Затем готовят водные супензии, из расчета 1 г породы на 100 мл стерильной дистиллированной воды.

Выращивание и индикацию сапрофитных микроорганизмов проводят на индикаторных- бумажках, пропитанных 5%-ным мясо-пептонным агаром с индикатором 2,3) 5трифенилтетразолием хлоридом, по методике , описанной выше. Время выращивания микроорганизмов на индикаторных бумажках 5 ч.

Пример 2, Определяют биогенность пород с помощью индикаторных бумажек, пропитанных 2;-ным мясо-пепт(Онным агаром, с инди(сатором 2,3)5-трифенилтетразолием хлоридом. Время выращивания микроорганизмов 7ч..

Пример 3. ..Определяют биогенность пород путем выращивания микроорганизмов на индикаторных бумажках, пропитанных 3°о-ным мясо-пептоннын агаром с индикатором 2,3,5-трифеиилтетразолием хлоридом. Время выращивания микроорганизмов 9 ч.

В табл, 1 представлены данные примерам 1 - 3) по определению биогенности в исходной отвальной породе до рекультивации, предложенным мето- зо дом и методом с выра1чиванием микроорганизмов в чашках Петри.

Из данных табл, 1 видно, что исходная порода отвала характеризуется .jj.

Таблица 1

низкой йиогенностью, т.е. в породе содержится незначительное количество сапрофитных ликроорганизмов, что подтверждается невысоким содержанием гумуса, азота и фосфора в породе. В табл. 2 представлены данные (по примерам 1-3) по определению биогенности отвальной породы, подвергнутой биологической рекультивации.

Таблица 2

Из табле 2 видно, что в породе отвала, подвергнутой биологической рекультивации, биогенность значительно повышается, увеличивается количество микроорганизмов, повышается содержание гумуса, азота и подвижного фосфора.

Совпадение результатов при подсчете количества сапрофитных микроорганизмов, выросших на индикаторных бумажках и в чашках Петри 95-97°о.Оптимальные результаты получены при выращивании микроорганизмов на индикаторных бумажках, пропитанных мясо-пептонныА1 агаром, при инкубировании в термостате в теМение 5 ч.

Таким образом, определение микроорганизмов в породах с помощью индикаторных бумажек может заменить их определение в чашках Петри на мясопептонном агаре, что исключает необходимость приготовления большого количества питательной среды и стерильной посуды. Кроме того, сокращается время выращивания микроорганизмов и отпадает необходимость в таких трудоемких определениях, как определение гумуса, азота, фосфора.

Предложенный способ определения биогенности пород может применяться в экспедиционных условиях , ко1ида неооходимо решить воспрос о пригодности отвапов угольных шахт к рекультивации и дать оценку интенсивности почвообразовательного процесса на поверхности отвала при биологической

рекультивации.

формула изобретения

Способ определения биогенности породы отвалов угольных шахт путем приготовления суспензии, посева на питательную среду, инкубации и подсчета колоний микроорганизмов, о т личающийся тем, что, с

целью ускорения процесса определения, посев производят на полоски фильтровальной бумаги, пропитанной мясо-пептонным агаром, содержащим

индикатор 2,3 5-трифенилтетразолий хлоридо

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1- Корш Л,Е,, Лртемова Г.З Ускоренные методы санитарного бактериологического исследования воды, М„, Медицина, 1978, с. 158-165,

2, Практикум по микробиологии, Под ред„ Н,СсЕгорова, Изд-во МГУ, 1976, с, 61-63,