Способ исследования нарушений в гистосовместимом почечном трансплантате Советский патент 1993 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к патофизиологическим проблемам трансплантологии и предназначено для исследования механизмов отторжения пересаженной почки.

Известен способ исследования функциональных нарушений в почках бесфистульным методом, при реализации которого оперативным путем ликвидируют резервуар, мочевого пузыря субтотальной его резекцией, лишают культю мочевого пузыря его запирательного механизма рассечением внутреннего уретрального сфинктера и герметично сшивают над последним и устьями обеих мочеточников оставшиеся лоскуты стенок мочевого пузыря в виде узкого канала.

В результате воспроизведения модели устанавливается беспрепятственное непрерывное выведение образующейся в почках мочи во внешнюю среду через естественный анатомический путь - мочеиспускательный канал, благодаря чему предоставляется возможность динамически оценивать количественный и качественный состав выделяющейся мочи в условиях моделируемой патологии почек.

VI

СО 00

ел

00

Известен также способ экспериментального исследования нарушений в почечном трансплантате, при осуществлении которого перед взятием проб мочи из реципиентного организма удаляют обе почки с мочеточниками и мочевым пузырем до его шейки, пересаживают донорскую почку с мочеточником на подвздошные сосуды реципиента, после чего мочеточник трансплантата герметично соединяют с мочеиспускательным каналом реципиента.

Недостатком способа является то, что он не позволяет исследовать экскреторные проявления и механизмы нефропатии отторжения, особенно терминальных ее ста- дий, поскольку нарушения азотистого и водно-электролитного баланса в условиях прогрессирующего криза отторжения развиваются раньше, чем наступает почечная смерть трансплантата. Закономерная в этих условиях гибель животного с единственной почкой-трансплантатом не позволяет оценить регистрируемые на выходе терминальные экскреторные симптомы на предмет обратимости криза отторжения, что имеет большую научно-практическую ценность. Таким образом, проведению точного и информативного исследования нефропатииотторжениягистонесовместимого почечного трансплан- тэта препятствуют системные нарушения и гибель животного-реципиента, ограничивающие исследовательскую глубину эксперимента.

Цель изобретения - повышение точно- сти и информативности исследования за счет сохранения жизни реципиента в условиях развившегося криза отторжения не- фротрансплантата.

Цель достигается тем, что после удале- ния из организма реципиента одной из ин- тактных почек преднамеренно сохраняют в ортопозиции вторую интактную почку на стороне пересадки донорской аллопочки и после ликвидации резервуарной функций мочевого пузыря формируют соустье между реципиёнтным и донорским мочеточниками, после чего определяют в непрерывно выделяющейся моче маркеры нефроальте рации, при исчезновении которых в очеред- ной мочевой пробе устанавливают первичное выключение отторгающегося трансплантата, а при повторном их.появле- нии - включение последнего.

Способ осуществляется следующим обг разом.

Удаляют из реципиентного организма одну интактную почку и пересаживают у реципиента резервуарную функцию мочевого пузыря субтотальной или тотальной его ре-

зекцией и формируют соустье между реципиёнтным и донорским мочеточниками. Гер- метизируютнижеобразуемое мочеточниково-мочеиспускательное соединение на месте ликвидированного резервуара мочевого пузыря и наблюдают непрерывное мочевыделение через уретру из трансплантата и интактной почки. Исследуют мочевые пробы в динамике развивающегося криза отторжения, определяя в них маркеры нефроальтерации до момента их исчезновения из очередной порции, по которому устанавливают первичное выключение нефротрансплантата. В случае повторного появления маркеров нефроальтерации в выделяющейся моче диагностируют обратимое течение криза и включение нефротрансплантата.

Пример 1. У беспородной собаки осуществляли забор донорской почки вслед за перфузией трансплантата ин ситу через почечную артерию. Отмытую почку консервировали бесперфузионным методом в охлажденном до 4СС растворе Еврокол- линз. У собаки-реципиента в период консервации донорской почки под наркозом через полную срединную лапаротомию произвели правостороннюю нефрэктомию, удалив почку с мочеточником во всю его длину. Затем субтотально резецировали мочевой пузырь вместе с устьем мочеточника удаленной почки, оставив вокруг второго устья и внутреннего отверстия уретры короткие лоскуты стенок пузыря. Затем произвелйти- пичную гетеротопическую трансплантацию консервированной донорской аллопочки на подвздошные сосуды на стороне оставшей- , ся интактной почки реципиента, т.е. слева. Через наружное отверстие мочеиспускательного канала ввели в восходящем направлении гибкий катетер, который далее через внутреннее отверстие провели в устье и далее в просвет левого реципиентного мочеточника. В нижней трети последнего непосредственно над концом введенного катетера продольно рассекли стенку мочеточника и вывели конец катетера наружу. Конец культи мочеточника трансплантата одели на конец катетера и продвинули его к предобразованному отверстию реципиентного мочеточника, сшив оба просвета на катетере в виде межмочеточникового соустья по типу бок в конец атравматичными несквозными швами. Не извлекая катетера, над последним сшили ранее выкроенные лоскуты мочевого пузыря в виде узкого герметичного канала между устьем оставшегося левого мочеточника и внутренним отверстием уретры. Убедившись в герметичности обоих мест соединения новообразованного мочевого тракта, катетер извлекали, тотчас получив из наружного отверстия мочеиспускательного канала .капельное непрерывное, мочевыделение. В выделяемой через единый канал интактной почкой и ал- лотрансплантатом моче ежедневно в посттрансплантационномпериодеисследовали содержание маркеров повреждения почечной паренхимы - специфических белковых фракций, активность нейтральной глюкозидазы и гексозамини- дазы, концентрации которых по мере про- грессироеания нефропатии отторжения существенно изменялись. Динамическая регистрация указанных параметров позво- лила установить, что почечная смерть трансплантата наступила на II-е сутки, когда после прогрессирующего нарастания концентрации маркеров нефроальтерации вплоть до последней пробы, в очередной отметили отсутствие этих веществ, что отражало отключение пересаженной почки как экскреторного органа. Выделяющаяся из интактной реципиентной почки моча практически не содержала патологических при- месей и по результатам анализов была близка к нормальной. Опытное животное при этом сохраняло относительно удовлетворительное состояние и имело признаки полного заживления операционной раны брюшной стенки. В течение последующих суток по повторным исследованиям порций мочи признаков включения экскреторной функции нефротрансплантата не отметили, в связи с чем для морфологической верифи- кации почечной смерти произвели транс- кутанную нефробиопсию трансплантата иглой ВНИИКиЭХ. При светооптическом исследовании биоптата обнаружили около 90% некротизированных и некробиотиче- ски измененных канальцевых клеток, в связи с чем под наркозом осуществили трансплантатэктомию через нижний левосторонний трансректальный доступ. Реципиент после удаления трансплантата остался живым. Комплексное морфологическое исследование удаленного трансплантата выявило в нем все признаки, характерные для клеточного (тубуло-интер- стициального)типа отторжения пересажен- ной аллопочки.

Пример 2. Забор донорской почки с мочеточником во всю его длину вместе с концевым внутрипузырным сфинктером осуществили у беспородной собаки с после- дующей консервацией трансплантата бес- перфузионным методом в растворе Евроколлинз. В ходе консервации у собаки-реципиента под наркозом удалили правую почку с мочеточником во всю длину и

мочевой пузырь вместе с юкстагвезикаль- ным отделом левого мочеточника, отрезав последний ниже уровня подвздошных сосудов реципиента. Консервированную алло- почку пересадили в таз реципиенту анастомозированием ее сосудов с подвздошными. Затем в просвет мочеточника пересаженной почки в восходящем направлении до ю кета лоха ночного его отдела ввели мочеточниковый катетер Nfc 6, где на кончике катетера произвели продольную уретеротомию около 5 мм. Через сформированное отверстие конец катетера провели в просвет культи реципиентного мочеточника и, адаптировав оба отверстия на используемом каркасе, сформировали донорско-реци- пиентное межмочеточниковое соустье конец в бок атравматичными адвентици- ально-мышечными швами. В завершение воспроизведения модели конец мочеточника трансплантата с помощью второго конца используемого каркасного катетера внедрили в реципиентную уретру до легкого натяжения, герметизировав место стыка мочеточника трансплантата с реципиент- ным мочеиспускательным каналом одним рядом поверхностных кетгутовых швов. Катетер извлекли через наружное отверстие уретры и тотчас зарегистрировали наружное непрерывное мочевыделение. В посттрансплантационном периоде ежедневно исследовали пробы мочи на предмет выявления в ней маркеров нефроальтерации - специфических белковых фракций и активность нейтральной глюкозидазы и гексоз.а- минидазы. Наблюдаемый в динамике криз отторжения завершился почечной смертью трансплантата на 6 сутки, когда в очередной порции мочи исчезли резко возросшие накануне параметры маркеров повреждения почечной ткани, что указало на первичное выключение трансплантата. Животное оставалось при этом в относительное удовлетворительном состоянии: отмечали лишь пиретическую реакцию и легкий озноб в течение двух суток. На 2 сутки под наркозом последовательно произвели нефробиопсию трансплантата, морфологическую экспресс-диагностику жизнеспособности трансплантата и некрот- рансплантатэктомию. В гистопрепаратах удаленного трансплантата выявили массивную инвазию почечной стромы лимфоцитами, распространенный тубулонекроз, отечные изменения стенок артериол, на основании которых диагностировали острую нефропатию отторжения смешанного (сосу- дистоклеточного)типа. Сразу после некрот- рансплантатэктомии рднопочечному реципиенту произвели рётрансплантацию

аллопочки по вышеописанной методике. Сверхострое отторжение ретрансплантиро- ванной почки спровоцировали ежедневным введением препарата У и по экскреторным знакам выделяющейся мочи к 3 суткам зарегистрировали смерть трансплантата, которую подтвердили морфологическими иследованиями. Животное-реципиент осталось при этом живым, благодаря наличию в организме собственной интактной почки, которая к этому сроку в момент ревизии и санации брюшной полости перед ушивани- ем операционной раны уже имела явные признаки компенсаторной гипертрофии.

Способ апробирован и использован при исследовании патогенетических механизмов финальных стадий нефропатии отторжения на 9 беспородных собаках самцах в Донецком мединституте.

Изобретение целесообразно использо- вать для изучения патогенеза, а также оцен- ки эффективности корригирующих воздействий на течение и обратимость отторжения гистонесовместйм почечного трансплантата.;

Ф ормул а и зоб ре тен и я

1, Способ исследования нарушений в гистосовместимом почечном трансплантате, включающий удаление из реципиентно- го организма одной интактной почки, пересадку аллогённой донорской почки в таз реципиента, ликвидацию у него резер- еуарной функции мочевого пузыря, восстановление непрерывности мочевыводящего тракта трансплантата формированием гёр- метичного мочеточниково-мочеиспуска- тельного соединения с последующим

изучением в динамике проб выделяющейся из уретры мочи, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и информативности исследования за счет сохранения интактной почки реципиента и его жизни в условиях развившегося кризиса отторжения нефротрансплантата удаляют ин- тактную почку на стороне, противоположном аллотрансплантации до- но рской, формируют соустье между реципи- ентным и донорским мочеточниками, а затем определяют в моче маркеры нефро- альтерации и при их исчезновении в очередной мочевой .пробе устанавливают первичное выключение трансплантата, а при их повторном появлении выключение последнего. . .

2. Способ по п. 1,отличающийся тем, что, с целью снижения травматичности операции при субтотальном удалении резервуара мочевого пузыря, формируют со- устье между нижним отделом реципиентного мочеточника .и культей мочеточника трансплантата по типу бок в конец, а затем герметизируют соустье мочеточника реципиента с внутренним отверстием уретры лоскутами стенки мочевого пузыря.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью снижения травматичности операции при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря, формируют соустье между культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу конец в бок, а затем герметично соединяют мочеточник трансплантата с реципиентной уретрой..

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине. Сущность изобретения: удаляют из реципи- ентного организма одну интактную почку на стороне, противоположной аллотрансплан- тации донорской, перемещают донорскую аллогенную почку в таз реципиента, формируют соустье между реципиентным и донорским мочеточниками, определяют в моче маркеры нефроальтерации, при исчезновении которых в очередной мочевой пробе устанавливают первичное выключение трансплантата, а при повторном их появлении - включение последнего. При этом анастомозируют нижний отдел реципиент- ного мочеточника с культей мочеточника трансплантата по типу бок в конец, а затем при субтотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют герметичный канал между устьем мочеточника реципиента и внутренним отверстием уретры из оставшихся лоскутов стенки мочевого пузыря, при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют соустье между культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу конец в бок, а затем герметично соединяют мочеточник трансплантата с реципиентной уретрой. 2 з.п. ф- лы. fe