Способ определения массовой доли лактозы Советский патент 1993 года по МПК G01N33/04 

воды, растворяют и доводят водой до метки. Раствор хранению не подлежит.

Приготовление раствора ОНФГ. Навеску 0.020 + 0,001 гОНФГ(ортонитрофенил- /3 -D-галактопиранозида) помещают в пробирку, добавляют 5 см3 дистиллированной воды и растворяют. Хранят раствор при температуре не выше 0° С не более 10 дней.

Приготовление растворов сравнения. Растворы сравнения готовят, растворяя в воде сахарозы и лактозы.

Для случая продукта Низколактозная молочная смесь с солодовым экстрактом, содержащим лактозы - не более 0,4%, а других углеводов -48,9%, состав растворов сравнения следующий:

Раствор 1, г:

Лактоза0,021

Сахароза16,300

ВодаДо 100,000

Раствор 2, г:

Лактоза0,021

Сахароза16,300

.ВодаДо 100,000

Раствор 3, г:

Лактоза0,021

Сахароза16,300

ВодаДо 100,000

Проведение измерения. Навеску ,1 г анализируемого продукта растворяют в 100 см3 воды с температурой 65 + 5° С.

В полученный теплый раствор вносят по каплям при непрерывном перемешивании концентрированную соляную кислоту до начала осаждения белка. Выждав 5-7 мин, осадок отделят центрифугированием.

В осветленную сыворотку вносят по каплям 20%-ный раствор гидроксида натрия и концентрированную соляную кислоту до достижения рН 4,8 + 0,05.

Полученный раствор в количестве 1 см3 помещают в пробирку. В эту пробирку микрошприцом вводят по стенке 10 мкл раствора фермента и 5 мкл раствора ОНФГ, содержимое пробирки осторожно перемешивают. Пробирку помещают на 5 мин на водяную баню с температурой 85 ± 0,5° С.

Затем пробирку помещают в ледяную воду на 3 мин, а потом в нее вносят 0.1 см 20%-ного раствора гидроксида натрия, выдерживают в ледяной воде еще 1 мин и переносят в водяную баню с температурой 85 + 0,5° С на 5 мин, затем охлаждают на воздухе в течение 1 мин.

Содержимое пробирки переливают в кювету фотокалориметра с рабочей длиной 5 мм и измеряют оптическую плотность раствора на длине волны 315 + 10 нм против раствора, полученного в результате холостого опыта.

Холостой опыт проводят аналогично вышеописанному, заменяя анализируемый продукт равным количеством воды. Также проводят опыты и с калибровочными растворами. Полученные значения оптических плотностей сопоставляют.

Так, при исследовании продукта было получено значение оптической плотности, равное 0,570, а при исследовании калибровочных растворов - соответственно 0,405; 0,732:0,990.

Массовые доли лактозы в калибровочных растворах соответствуют следующим массовым .долям лактозы в исследуемом

продукте: 0,065; 0,130 и 0,200%. По результатам исследования калибровочных растворов строят калибровочную прямую пользуясь которой определяют массовую долю.лактозы в продукте. ВС данном случае

она равна 0,10%.

Формула изобретения Способ определения массовой доли лактозы, предусматривающий растворение пробы исследуемого продукта, осаждение

жира и белков, внесение /3 -галатозидазы, нагревание полученной смеси с последующим ее охлаждением, измерением значения оптической плотности и установлением массовой доли лактозы в зависимости от измеренного значения, б т л и ч a .to щ и и с я тем, что, с целью сокращения времени и снижения себестоимости, дополнительно перед нагреванием в полученную смесь вносят ор- тонитрофенил- {3 -D-галактопиранозид, а в

охлажденную - гидроксид натрия с последующим повторным нагревом и охлаждением до 20° С, причем измерение значения оптической плотности осуществляют в диапазоне длин волн 305-325 нм.