Способ моделирования сахарного диабета Советский патент 1993 года по МПК G01N33/50 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования сахар- ного диабета, что может быть использовано изучения патогенеза возникновения и

зави стой

/ггия заболевания, а также разработки

для

разв

спосэбов его профилактики и лечения.

Цель изобретения - ускорение воспроизведения доклинической стадии инсулин- :имого сахарного диабета и получение

сой формы заболевания.

Јпособ осуществляется следующим об- разо|л.

С целью ускорения воспроизведения до- клинфческой стадии инсулинзависимого са- харнфго диабета и получения стойкой формы заболевания, в качестве производного суль- фони мочевины используют букарбан (N- /парЈ-аминобензолсульфонил/-И-н-бутил- мочевина) в дозе 6-7 мг/кг, препарат вводят крысам подкожно, ежедневно в течение 14- 17 дней, причем, первую, пятую и десятую инъекции проводят одновременно с равным объемом полного адьюва.нта Фрейнда.

Пример. Использовали 10 крыс-самцов линии Вистар массой 230-250 г. До начала эксперимента определяли исходный уровень глюкозы (до этого животные 24 ч не получали пищи). На протяжении 15-ти дней животным производили подкожные инъекции суспензии букарбана в дозе 6 мг/кг, причем, первая, пятая и десятая иньекции - в равном объеме с полным адъювантом Фрейнда. Через 15 дней уровень глюкозы у животных, определяемый натощак, достоверно возрастал (табл.1), изменялся тест толерантности к глюкозе по диабетическому типу (через 2 ч после внутрибрюшинного введения глюкозы в дозе 4 г/кг уровень глюкозы оставался достоверно выше исходного, а у контрольных становился ниже (табл.1).

После определения глюко.зы животных под легким эфирным наркозом забивали, брали кровь для радиоиммунного определения гормонов, а также извлекали поджелудочные железы, которые для дальнейшей морфологических исследований фиксироваел

с

00

о

ГчЭ

ел

CJ

о

ли в жидкости Буэна. Выделяли плазму и сыворотку, в которых при помощи стандартных наборов определяли инсулин (РИО-ИНС-ПГ-125 1, СССР), С-пептид (Byk- Sangtec-Dlagnostlca, ФРГ), глюкагон (BIODATA, Италия) и соматостатин (Incstar, США). Контролем служила группа животных, получавших на протяжении 15-ти дней подкожные инъекции чистого физиологического раствора в таком же объеме. Определение уровня гормонов проводилось одновременно у опытных и контрольных животных. Через 15 дней эксперимента, по сравнению с контролем, уровень инсулина и С-пептида в сыворотке крови достоверно снижался (табл.2), а глюкагона и соматоста- тина в плазме возрастал.

Поджелудочную железу после фиксации и стандартной обработки в спиртах возрастающей концентрации заливали в парафиновые блоки, из которых готовили гистологические срезы толщиной 4 мкм, Срезы окрашивали гематоксилин-зозином, а также хромовым гематоксилин-флоксином для дифференцировки А-, В- и Д-клеток. Морфометрия ядер В-клеток выявила уменьшение их площади по сравнению с контролем, а также отмечены дегенеративные изменения в клетках, что является признаком морфофункциональных нарушений инсулярного аппарата поджелудочной железы. Кроме того, с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции проводилось количественное выявление содержания инсулина в В-клетках. Срезы поджелудочной железы толщиной 4 мкм после депарафи- нирования подвергали трипсинизации в течение 60 мин, а затем инкубировали с моноклональными антителами к инсулину (AMERSHAM, Англия) в течение 6 ч, а затем со вторичными антителами, конъюгирован- ными с FITC (AMERSHAM, Англия) 60 мин. После этого препараты изучались под люминесцентным микроскопом ЛЮМАМ-И2. Интенсивность свечения, прямо связанная с

количеством инсулина в В-клетках, определялась фотометрической насадкой ФМЭЛ- 1А, с последующей обработкой данных на ЭВМ. Установлено, что при введении букарбана количество инсулина в В-клетках резко снижается (табл.2), что соответствует обнаруженному уменьшению концентрации инсулина в сыворотке крови, а также наблюдается деструкция части островков.

Кроме того, к концу 15-дневного срока у животных наблюдались повышенная жажда и аппетит, полиурия и агрессивное поведение, что является субъективными признаками сахарного диабета. Эти же изменения

(гормональные и морфофункциональные) сохранялись и через 30 дней после прекращения инъекций букарбана.

Аналогичные результаты получены как у самцов, так и самок, как половозрелых, так

и неполовозрелых.

Преимуществом данного способа моделирования инсулинзависимого сахарного диабета является быстрота получения до- клинической стадии заболевания, по сравнению с прототипом в 6-18 раз, простота воспроизведения, стабильность результатов, экономичность благодаря использованию крыс, высокая степень приближения к клиническому течению заболевания.

Формула изобретения

Способ моделирования сахарного диабета, включающий ежедневное введение животным производного сульфонилмочеви- ны, отличающийся тем, что, с целью

ускорения воспроизведения доклинической стадии инсулинзависимого диабета и получения стойкой формы заболевания, в качестве производного сульфонилмочевины используют букарбан М-(парааминобензолсульфонил)-Ы-н-бутилм очевина в дозе 6-7 мг/кг, препарат вводят крысам подкожно ежедневно в течение 14-17 дней, причем первую, пятую и десятую инъекции проводят одновременно с инъекциями равного

объема полного адиовата Фрейнда.

(Использование: экспериментальная медицина, способы моделирования сахарного диабета, изучение патогенеза возникновения и развития заболевания, разработка способов его профилактики и лечения. Цель изобретения - сокращение сроков получения начальных стадий сахарного диабета, упрощение способа, получение стойкой формы заболевания. Сущность изобретения: белым лабораторным крысам линии Вистар обоего пола вводят сахароснижаю- щий препарат из группы производных суль- фонилмочевины - букарбином в дозе 6-7. мг/кг на протяжении 14-17 дней совместно с полным адъювантом Фрейнда. 2 табл.

Таблица 1

Таблица 2