Устройство для проведения реакции агглютинации Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

N «О

00

о ю

00

со

Использование: в вирусологии для идентификации и индикации вирусов в реакции агглютинации. Сущность изобретения: устройство содержит полистирольную панель 8. с расположенными параллельными рядами лунками, платформу 1 из полимерного материала, установленную на четырех вертикальных стойках и источник магнитного поля, выполненный в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок 5 на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные лункам панели, и в каждом из отверстий установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем 4, верхним концом 7 прилегающим к дну панели. 2 табл., 3 ил.

Фиг. Т

Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано в вирусологии для идентификации и индикации вирусов в реакции агглютинации в материале от клинически здоровых лиц, больных, а также в образцах окружающей среды и т.п.

Целью изобретения является создание оригинального устройства для проведения реакции агглютинации (выполненной в различных вариантах - на твердой фазе, в планшетах микротитратора Такачи и т.п.), где в качестве твердотельного носителя используют магниточувствительные.носители, позволяющие сократить сроки учета до 1 ч, вместо 3-5 ч или на следующий день, после внесения диагностикума.

Это достигается тем, что после внесения диагностикума в лунки, полистироль- ную панель устанавливают по периметру на специальное устройство, индуцирующее магнитное поле силой 30,0 ± 2,0 Т (тесла)в центре для каждой лунки. Под воздействием магнитного поля несвязавшиеся магнитные сорбенты оседают на дно. В случае связывания носителя специфическим антигеном (последний зафиксирован антителами на твердой фазе) осеДание магниточувстви-. тельных частиц на дно лунки не наблюдается.

На фиг. 1-3 изображено предлагаемое устройство.

Устройство для проведения реакции агглютинации состоит из следующих частей: 1

- платформа из полимерного материала, установленная с помощью крепления 6 на четырех, вертикальных стойках 2, сделанных из материала, не обладающего1 магнитными свойствами; За- источник магнитного поля, выполненный в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок 5 на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные с лунками панели, в каждом из которых установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем 4, верхним ко нцом 7 прилегающим к дну панели.

Магнитное поле усиливают или уменьшают путем перемещения магнитной пластины 3 вверх или вниз по длине стоек. Для проведения реакций в полистирольной панели 8, ее устанавливают на платформу устройства таким образом, чтобы металлические штыри 4 были соосными с лунками панели. Предварительно, с помощью аппарата Ш 1-8 определяют силу магнитной индукции на конце верхней части штырей, которая должна составлять 30,0 ± 2,0 Т (тесла). Время нахождения полистирольной панели под воздействием магнитного поля составляет до 20 сек. Результаты реакции учитывают только при прохождении контролен по 4-х крестовой шкале.

Пример. Выявление ротавирусного антигена в копрофильтратах больных острым гастроэнтеритом, а также в образцах сточных вод и воды открытых водоемов в реакции коагглютинации на твердой фазе.

В полистирольную панель с U-образны- ми лунками (производство ПО Ленмедпо- лимер, ТУ 04-2-278-79) вносят по 75 мкл асцитной жидкости против ротавируса, разведенной 0,01 М OC5J:ZOO. Титр асцитной

жидкости (иммуноглобулинов) крысы, иммунизированной ротавирусом в реакции торможения гемагглютинации равен 1:480. В контрольные лунки вносят по 75 мкл нормальной сыворотки, не содержащей антитела к ротавирусам в jex же разведениях.. Панель инкубируют при 37°С в течение 2-.3 ч. Затем постукиванием панели по фильтровальной бумаге удаляют из лунок несорбированные антитела, с последующим 3-х

кратным промыванием 0,01 М ФСБ (рН 7,2- 7,4) с 0,05% твин-20. После этого в лунки вносят по 75 мкл раствора 20% копрофильтратов на 0,01 М ФСБ больных гастроэнтеритом. Для.контроля используют копрофильтраты,

суспензии фекалий больныхтакой же концентрации, содержащие и не содержащие рота- вирусные антигены. Используют также в качестве контроля лизаты незараженной культуры, клеток и культуральные антигены

ротавируса обезьян. Панель с исследуемым

материалом и вышеуказанными контролями- инкубируют 1-2 часа при 37°С. Несвязавшиеся антигены и посторонние примеси удаляют 3-х кратным (2-3 мин) промыванием Ф,СБ. с 0,05% твин-20. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл диагностикума, представляющего собой магнитные частицы, заключенные в целлюлозную оболочку и сенсибилизированные иммуноглобулинами к ротавирусу. Панели выдерживают 1,5 ч при 37°С с последующим помещением полистирольной панели на устройство для оценки реакции коагглютинации (на 15-20 сек) и окончательный учет реакции. Предварительно, перед установлением планшеты на устройство с помощью измерителя магнитной индукции (Ш 1-8) измеряют равномерность и силу магнитного поля на верхних концах металлических штырей. Интенсив- ность магнитной индукции должна быть равномерна и составлять 30,0 ± 2,0 Т (тесла). Результаты анализа определяют визуально, обязательно с учетом контролен по 4-х крестовой шкале.

Всего было исследовано в реакции ко- агглютинации с использованием предложенного устройства и устройства-прототипа пробы, в т.ч. 49 проб фекалий, 284 образца проб водных объектов (144 - сточные вс;ды, 120 - вода открытых водоемов, 20 - образцы проб питьевой воды). В табл.1 показано сравнение чувствительности и специфичности определения ротавирусного антигена в реакциях коагглютинации, реа- льЦованных с помощью известного и пред- лг женного устройств,.

В табл.2 показано сравнение чувстви- т льности и специфичности определения ротавирусного антигена в реакциях коагг- лфтинации, реализованйых с помощью из- в стного и предложенного устройства методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Предлагаемое устройство для прове- реакции агглютинации отличается оригинальной конструкцией и позволяет значительно сократить сроки учета реакП р и м е ч а н и е: Чувствительность (прототип и оригинал положительные/ /прототип положительные) х 100.

Специфичность (оригинал и прототип отрицательные/ /прототип отрицательные) х 100.

Совпадение (оригинал и прототип положительные) + + (оригинал и прототип отрицательные)/(прототип положительные + + прототип отрицательные) х 100.

0

5

0

ции агглютинации на твердой фазе до 2-х вместо 24 ч.

Формула изобретения Устройство для проведения реакции агглютинации, содержащее полистирольную панель с расположенными параллельными рядами лунками, отличающееся тем, что, с целью повышения производительности за счет сокращения времени оценки результатов реакции, оно дополнительно снабжено платформой из полимерного материала, установленной на четырех вертикальных стойках, и источником магнитного поля, выполненным в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные с лунками панели, в каждом из отверстий установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем, верхним концом прилегающим к дну панели.

Таблица 1

Примечание: Чувствительность (РКА и ИФА положительные/ /ИФА положительные) х 100.

Специфичность (РКА и ИФА отрицательные/ИФА отрицательные) х 100.

Совпадение (РКА и ИФА положительные) + (РКА и ИФА отрицательные)/(ИФА положительные + ИФА отрицательные)х х 100.

Таблица2

в

1

Ч 2

Фи г. 2

HD

- © 000ОО00000С

OOGOOOOOGOG

000QO000OOO0C 1Э©0©000©-0©©©

oqpepaoOnOqpo

е П И II II II в

ф&г. 3

126 мм

1

ПЭ07Э0ЧЭ.0

е

8.