Способ микроразмножения шафрана посевного (CRocUS SатIVUS L.) Советский патент 1993 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу микроразмножения шафрана посевного с помощью культуры ткани in virto, который может быть использован для нужд фармацевтической, пищевой,парфомерной, и медицинской отраслей промышленности.

Цель изобретения -увеличение процента образования клубнелуковиц и, следовательно, увеличение коэффициента размножения,

Поставленная цель достигается новым способом микроразмножения шафрана посевного (Crocus sativus) с использованием клубнелуковиц, причем клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту, помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скуга, витамины, мг/л: никотиновая кислота 1; тиамин 10; пиридоксин 1; аминокислоть мг/л; глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозит 100; фо- лиевая кислота 5; гидролизат казеина 5; агар 70, которая дополнительно содержит регуляторы роста мг/л; гибберелловая кислота 0,1-5,0; 6-бензиаминопурин 0,1-10,0 и глюкоза 20 г, затем культивируют в течение 0,5-2,0 мес, потом переносят на питательную среду 2, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скугу, витамины, аминокислоты, глюкозу и агар по среде 1, которая дополнительно содержит стимуляторы роста мг/л: зеатин 0,1-5,0; нафтилук- сусная кислота 0,1-1,0, культивируют до образования побегов в основании и появлением клубнелуковичек, покрытых сухими че- шуями, отделяют эти клубнелуковички и помещают в среду 3, состоящую из половинной нормы солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкозы и агара по средам 1 или 2, индолилуксусную кислоту 0,5-5,5 мг/л, культивируют до появления корней и побегов, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование , выдерживают во влажном субстрате во влажной камере.

Пример 1, Клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7 см в ширину и 1 см в высоту, помещают в стерильные условия на питательную среду 1, состоящую из минеел

с

со

о

XI 00

.N

со

ральных солей по Мурасиге и Скугу, макросоли г/л: NhUNOa33; КМОз38; CaCl2 2Н20 8-8; MgS04 7Н20 7-4; микросоли мг/л: НзВ03 620, MnS04 H20 2230; ZnSCM х4Н20 х 680.KJ 83; Na2MD4 2Н20 25; CuS04 5H20 2-5; CoCl2 6H20 2-5; витамины, мг/л: никотиновая кислота 1тиамин 10; пиридоксин 1; аминокислоты;мг/л: глицин 10 ; аденин 10; тирозин 10; инозит 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 500 мг/л : глюкоза 20 г/л, агар 70 г/л, стимуляторы роста: гибберелловая кислота 0,1 мг/л; 6-бензиламинопурин 0,1 мг/л, культивируют 0,5 мес до почернения эксплантов и среды при освещенности 4 тыс. лкс. и влажности 80%. Затем экспланты пересаживают на новую питательную среду 2, содержащую минеральные соли, витамины, аминокислоты, глюкозу и агар, как в среде 1, и дополнительно зеатин 0,1 мг/л, нафти- луксусную кислоту 0,1 мг/л. Через 2-3 неде- ли из спящих боковых почек, расположенных на сегментах, появляются побеги (фиг. 1) и через месяц в основании их происходит утолщение (фиг. 2), 2-3 месяца формируется в клубнелуковичку (фиг, 3), которая в свою очередь покрывается сухими чешуями (фиг, 4). На этих клубнелуковичках вновь образуются побеги, которые снова утолщаются и дают новые клубнелуковички (фиг. 5). Затем отделяют клубнелуковички одну от другой и пересаживают на среду 3, состоящую из половинной нормы минеральных солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкоз.ы, агара по среде 1 или 2, индолилуксусную кислоту 3,0 мг/л, культивируют 2 мес до образования корней и побегов (фиг. 6), отмывают от агара, выдерживают в воде при комнатной температуре, затем в растворе 0,4 % гетероауксина и высаживают во влажный песок при 25°С и освещенности 4-5 тыс.лкс, накрыв стеклянным колпаком на сутки. Растение готово для посадки в открытый грунт.

Пример 2. Клубнелуковицу разреза- ют на сегменты размером 1,5 см в ширину и 1,5 см в высоту, далее проводят аналогично, однако среда 1 дополнительно содержит гиб- берелловую кислоту 3,0 мг/л, 6-бензиламинопурин 5,0 мг/л, глюкозу 25 мг/л, культивируют 1,0 мес, среда 2 дополнительно содержит зеатин 3,0 мг/л. нафтилуксусную кислоту 0,8 мг/л, а среда 3-индолилуксусную кислоту 3,0 мг/л.

Пример 3. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 2 мс в ширину и 2 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит гибберелловую кислоту 5,0 мг/л, 6-бензиламинопурин 10 мг/л, глюкозу 30 мг/л, культивируют 2,0 мес, среда 2 дополнительно содержит зеатин 5,0 мг/л, нафтилуксусную кислоту 1,0 мг/л, а среда 3-индолилуксусную кислоту 5,5 мг/л.

Результаты представлены на фиг. 1-7.

Фиг. 1 - через 2-3 недели из спящих почек, расположенных на эксплантах, появились побеги, которые зеленеют.

Фиг. 2 -утолщения основания побега.

Фиг. 3 - образовавшаяся клубнелуко- вичка в основании побега.

Фиг. 4 - образовавшиеся клубнелуковички одеваются сухими чешуями.

Фиг. 5 - на образовавшейся клубнелу- ковичке появляется побег, который утолщается и формирует новую клубнелуковичку.

Фиг. 6 - клубнелуковички с корнями и побегами после обработки в растворе гетероауксина и выдерживания во влажной камере.

Фиг. 7 - график зависимости количества образовывающихся клубнелуковичек от времени года проведения способа.

В табл. 1 приведены данные влияния различных Сахаров на образование клубнелуковичек; в табл. 2 - влияние различных фитогормонов на образование клубнелуковичек в среде 1.

Как следует из примеров, в результате заявленного способа из одной клубнелуковицы можно получить до 1000 растений в год, т.е. коэффициент размножения равен 1;1000. В случае проведения способа в марте-мае (фиг. 7) месяце коэффициент размножения может достигнуть 1:1200.

Формула изобретения

Способ микроразмножения шафрана посевного (Crocus satlvus L), включающий получение растений из сегментов клубнелуковиц, отличающийся тем, что сегменты клубнелуковиц размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге-Скугу, 1 мг/л никотиновой кислоты,10 мг/л тиамина, 1 мг/л пиридокси- на, 10 мг/л глицина, 10 мг/л аденина, 10 мг/л тирозина, 100 мг/л инозита, 5 мг/л фолиевой кислоты, 500 мг/л гидролизата казеина, 70 мг/л агара, 0,1-5,0 мг/л гиббе- реллрвой кислоты, 0,1-10,0 мг/л бензилами- нопурина и 20-30 г/л глюкозы, культивируют в течение 0,5-2,0 месяцев, затем переносят на питательную среду 2, содержащую все компоненты среды 1 и дополнительно 0,1-5,0 мг/л зеатина, 0,1-1,0 мг/л нафтилуксусной кислоты, культивируют до образования побегов в основании и появления клубнелуковичек, покрытых сухими чешуями, отделяют клубнелуковички и

переносят на среду 3, содержащую половинный набор компонентов среды 1 по концентрации и дополнительно 0,5-5,5 мг/л индолилуксусной кисоты, культивируют до появления корней и побегов, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, и выдерживают во влажном субстрате во влажной камере до формирования нормальных растений.

Таблица 1

Использование: биотехнология, микроразмножение растений. Сущность изобретения: сегменты клубнелуковиц помещают на питательную среду, культивируют до определенной стадии и переносят на другие среды и субстраты, выращивая до получения растений. 2 табл., 7 ил.

Таблица2

V f. t месяцм.