Способ микроразмножения шафрана посевного (CRocUS SатIVUS L.) Советский патент 1993 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу микроразмножения шафрана посевного с помощью культуры ткани In virto, который может быть использован для нужд фармацевтической, пищевой, парфюмерной и медицинской отраслей промышленности.

Цель изобретения - увеличение процента образования клубнелуковиц и, следо- вательно, увеличение коэффициента размножения.

Поставленная цель достигается новым способом микроразмножения шафрана посевного (Crokus sativus L.) с использованием клубнелуковиц, причем клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту, помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скугу, витамины, мг/л: никотиновая кислота 1; тиамин 10; пиридоксин 10; аминокислоты мг/л; глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозин 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 500; агар 70;, которая дополнительно содержит регуляторы роста мг/л: индолилуксус- ную кислоту 0,1-1,0; зеатин 0,5-1,0 и глюкоза 30 г, а затем культивируют до образования каллуса при освещенности 4-5 тыс.лкс. и температуре 7-10°С, потом переносят на такую же свежую питательную среду, культивируют в тех же условиях до образования клубнелуковичек, затем их помещают в среду 2, состоящую из половинной нормы солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот глюкозы и агара по среде 1, который дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 0,1-1,0 мг/л и зеатин 0,1-1,0, культивируют до появления побегов и корней, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, выдерживают во влажном субстрате во влажной камере.

Пример 1. Клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7 см в ширину и 1 см в высоту, помещают в стерильные условия на питательную среду 1, состоящую из минеральных солей поМурасигеиСкугу, макросоли г/л: NH4N03 33; КМОз 38; CaCl2

СО

С

00

о

V4 00

4 CJ

СО

2Н20 8,8; 7H20 7,4; микросоли мг/л: НзВОз 620; MnS04 HzO 2230; ZnS04

4H20 68; KJ- 83 ; N32M04 2H20 25; CuS04 5H20 2,5; Cod2 6H20 2,5; витамины мг/л: никотиновая кислота 1; тиамин 10; пиридоксин 10; аминокислоты мг/л: глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозит 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 500 мг/л, глюкоза 20 г/л, агар 70 г/л и индоли- луксусная кислота 0,1-1,0 мг/л, зеатин 0,5- 1,0 мг/л, культивируют до образования каллуса при 7°С, при освещенности 4 тыс.лкс. Затем каллусы помещают на такую же свежую питательную среду и культивируют при тех же условиях. Поверхность каллусов становилась бугристой (фиг. 1), а затем на ней появлялись зародышеподобные структуры 9фиг. 2 и 3), превращающиеся постепенно в клубнелуковички. Их извлекают из питательной среды, отделяют друг от друга и помещают на питательную среду 2, состоящую из половинной нормы минеральных солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкозы, агара по среде 1, индолилуксусную кислоту 0,1 мг/л и зеатин 0,1 мг/л, культивируют 2 мес до образования побегов (фиг. 4) и корней (фиг. 5). Затем все извлекают из среды культивирования, отмывают от агара, выдерживают в воде при комнатной температуре, затем в растворе 0,4% гетероауксина и высаживают во влажный песок при 25°С и освещенности 4-5 тыс.лкс, накрыв стеклянным колпаком на сутки. Растение готово до посадки в открытый грунт (фиг,6).

Пример 2. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 1,5 см в ширину и 1,5 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 0,6 мг/л, зеатин 0,7 мг/л, культивируют при 8°С до образования каллуса при освещенности 4,5 тыс.лкс., а среда 2 дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 0,6 мг/л, зеатин 0,6 мг/л.

ПримерЗ. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 2 см в ширину и 2 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 1,0 мл/л, зеатин 1,0 мг/л, культивируют при 10°С при освещенности 5,0 тыс.лкс., среда 2 дополнительно содержит зеатин 1,0 мг/л, индолилуксусную кислоту 1,0 мг/л.

Результаты примеров представлены на фиг. 1-6.

Фиг. 1 - бугристая поверхность каллуса.

Фиг. 2 - появление эмбриоидоподоб- ных структур.

Фиг. 3 - превращение эмбриоиподоб- ных структур в клубнелуковички.

Фиг. 4 - образование побегов на клуб- нелуковичках.

Фиг. 5 - клубнелуковички с корнями и побегами.

Фиг. 6 - растение в вазоне во влажном песке готово к посадке в грунт.

В табл. 1 приведены данные влияния различных Сахаров на образование каллусов; в табл. 2 - влияние различных фитогор- монов на образование каллусов.

Как следует из примеров, в результате

заявленного способа из одной клубнелуковицы можно получить до 1000 растений в

год, т.е. коэффициент размножения 1:8001:1200.

25

Формула изобретения

Способ микроразмножения шафрана посевного (Crocus sativus L), включающий получение растений из сегментов клубнелуковиц, отличающийся тем, что сегменты

клубнелуковиц 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге «Скугу, 1 мг/л никотиновой кислоты, 10 мг/л тиамина, 10 мг/л пиридоксина, 10

Мг/л глицина, 10 мг/л аденина, 10 мг/л тирозина, 100 мг/л инозита, 5 мг/л фолиевой кислоты, 500 мг/л гидролизата казеина, 70 мг/л агара, 0,1-1,0 мг/л индолилуксусной кислоты, 0,1-1,0 мг/л зеатина, 3, г/л глюкозы, культивируют при температуре 7-10°С и освещенности 4-5 тыс.лкс. до образования каллуса, переносят на свежую питательную среду того же состава и культивируют до образования клубнелуковичек, которые переносят на среду 2, содержащую половинную по концентрации норму компонентов среды 1 и дополнительно 0,1-1,0 мг/л индолилуксусной кислоты, культивируют до появления корней и побегов, помещают в

раствор, стимулирующий корнеобразова- ние, и выдерживают во влажном субстрате во влажной камере до формирования нормальных растений.

Таблица 1

Использование: биотехнология, микро- клональное размножение растений. Сущность изобретения: большое количество растений шафрана посевного получают путем его микроклонального размножения на модифицированных питательных средах му- расиге-Скуга. 2 табл., 6 ил.

Таблица 2

Ж. 4

ФИГ.5