"Питательная среда "Церебробакт" для культивирования лактобацилл" Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 

гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС при содержании аминно- го азота от 100 до

140 мг%Остальное Гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС получают путем ферментативного расщепления белоксо- держащего сырья (отход производства медицинского препарата Липоцеребри н) медицинским панкреатином, взятым в количестве 2,0 об.%, или гомогенатом поджелудочной железы свиньи (10-15 об.%) при 40-42°С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4-5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием биомассы при 90°С в течение 5-10 мин, осаждением высокомолекулярных соединений в изоэлектри- ческой точке белка, фильтрованием препарата и высушиванием.

.Пример 1. Гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС получают путем ферментативного расщеп- ления белоксо держащего сырья, разведенного дистиллированной водой 1:25, медицинским панкреатином (МРТУ 425946- 84) или гомогенатом поджелудочной железы свиньи, взятыми в количестве 2 об.% или 10-15 об.% соответственно, процесс ведут при 40-42°С в щелочной зоне рН 7,8-8,0 в течение 4-5 сут в присутствий хлороформа (3 об.%). Гидролиз прекращают прогреванием при 90°С в течение 5-10 мин, при этом коагулируют и выпадают в осадок неразгид- ролизованные белки. Оставшиеся в надоса- дочной жидкости высокомолекулярные соединения осаждают в изоэлектрической точке белка, надосадочную жидкость филь- труют и подвергают высушиванию в потоке горячего воздуха в аппаратах, используемых при получении сухого молока. Режим высушивания (на. входе 150-160°С и на выходе 90-95°С) обеспечивает получение сухо- го препарата с остаточной влажностью менее 2,5-3%. Полученный ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС имеет следующие физико-химические характеристики:

6,2-7,2

Не менее 5,0 55 Не менее 2,5-3,0

В пределах 10-11

Массовая доля аминного азота, %

Аминный коэффициентN аминный N общий

В пределах 5,0-5,5

0,45-0,50

Коэффициент

протеолиза

N остат.0,9-1,0

N общ.

Аминокислотный состав питательной основы (в 1 % р-ре):

20,0

21,3

15,3

16,5

13,3

9,8

11,5

19,5

17,8

18,5

Изолейцин

Лейцин

Валин

Треонин

Серии

Метионин

Тирозин

Фенилаланин

Цист(е)ин

Аспарагиновая к-та

Глутаминовая к-та29,8 -. Пролин 19,8 Глицин 16,3 Алании 21,2 Лизин 24,5 Гистидин 17,2 Аргинин 14,4 Триптофан 8,9 Полипептиды (молек.) Вес по электрофорезу, . .

Дал37000-24000

5500-6000 П р и м е р 2.

Подобрана концентрация ферментативного гидролиза обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС, обеспечивающая оптимальные условия жизнедеятельности лактобацилл. Результаты исследований представлены в табл.1,

Используемые концентрации лактозы, хлористого натрия и агар-агара являются общепринятыми для ПС, предназначенных для культивирования лактобацилл 3.

Изменение концентрации этих ингредиентов в указанных в формуле изобретения пределах не влияет на ростовые свойства данного вида бактерий.

Таким образом, ростстимулирующие свойства питательной среды Церебробакт на питательной основе (ПО) из ферментативного гидролизата обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани КРС сохраняются на необходимом уровне для нормального роста и развития лактобацилл при концентрации аминного азота от 50 до 140 мг%. Оптимальная концентрация 100-140 мг%.

Пример 3. Изучение возможности выращивания различных штаммов В.blfidum (производственный шт. № 1,791, ЛВА-3) в питательной среде Церебробакт представлено в табл.2.

Таким образом, из данных табл. 2 следует, что ПС Церебробакт непригодна для выращивания различных штаммов бифидо- бактерий, следовательно, она проявляет селективные свойства при культивировании лактобацилл.

Пример А. Проведено изучение влияния концентрации ПО на культурально- морфологические признаки штамма Lactobaclllus plantarum 8-РАз. Показано, что при различных концентрациях ПО от 50 до 140 мг% сохраняются типичные культураль- но-морфологические особенности данного штамма лактобацидп: грамположительные, в основном короткие толстые прямые палочки с закругленными концами, расположенные беспорядочными скоплениями и отдельными короткими цепочками по 3-5. При выращивании в полужидкой ПС при 37,5-38°С микроб вызывает в первые сутки неравномерное помутнение, через 2-3 сут микробы образуют кометообразные колонии без явного выделения стерильной зоны. В среде с концентрацией аминного азона в ПО от 50 до 80 мг% колонии имеют меньшие размеры, нетипичные морфологи- ческие характеристики сохраняются, о

Таким образом, снижение концентрации аминного азота в ПО до 50 мг% не влияет на морфологические характеристики лактббацилл.

Предлагаемая селективная питательная среда Церебробакт содержит стандартизованную питательную основу, являющуюся отходом при получении меди

цинского препарата Липоцеребрин, что позволяет производить ее в достаточно больших количествах (десятки тонн), унифицируя условия получения медицинского препарате лактобактерина,

Предлагаемая питательная среда проста в изготовлении, содержат доступные отечественные компоненты и не требует дорогостоящего оборудования для своего изготовления, обладает селективными свойствами подобно эталонной среде МРС.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования лактобацилл, содержащая питательную основу и углевод, отличающаяся тем, что, с целью унификации и стандартизации среды и упрощения технологии ее приготовления, в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 до 140 мг%, из углеводов-лактозу, и дополнительно содержит натрий хлористый и агар-агар при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лактоза

Хлористый натрий Агар-агар Ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 д 140 мг%

Таблица 1

Использование: биотехнология, питательная среда, культивирование лактоба- цилл. Сущность изобретения: обезжиренную, обезвоженную мозговую ткань крупного рогатого скота , являющуюся отходом при получении медицинского препарата ЛипоИзобретение относится к биотехнологии, микробиологической промышленности, в частности к созданию новой питательной среды (ПС), предназначенной для выращивания лактобацилл. Целью.изобретения является унификация ПС, упрощение технологии изготовления. Указанная цель достигается описываемой питательной средой, которая в качестве церебрин, подвергают легкому ферментативному гидролизу медицинским панкреатином или гомогенатом поджелудочной железы при 40-42°С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4-5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием при 90°С в течение 5-10 мин, осаждением из надосадочной жидкости неразгидролмзо- ванных белков в изоэлектрической точке с последующим высушиванием препарата. Полученный препарат - основа питательной среды Церебробакт для культивирования лактобацилл, при следующем соотношении входящих в нее компонентов, мас.%: лактоза 0,95-1,00; хлористый натрий 0,45-0,50; агар-агар 0,065-0,070; ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота с содержанием аминного азота от 100 до 140 мг % остальное. Среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогостоящего оборудования для своего производства, обеспечивает рост и развитие лактобацилл, обладает селективными свойствами подобно эталонной среде МРС. 2 табл. питательной основы содержит стандартный компонент - гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота (КРС) и состоит из следующих компонентов, мас.%: ел с ,00 О 00 Q О 00 со Лактоза Хлористый натрий Агар-агар Ферментативный 0.95-1.00 0,45-0,50 0,065-0.070

Примечание: Состав. ПС Церебробакт, мае. % .

Ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозгбвой ткани с конечной концентрацией аминного азота от 50 до 140 мг%. - Лактоза 0,975 Хлористый натрий 0,475 о Агар-агар 0,07

Таблица 2

Примечание: Состав ПС Церебробакт в этом и последующих примерах идентичен примеру 2 с концентрацией аминного азота вПО-140мг%.