Способ получения биологически активного препарата из дрожжей Советский патент 1993 года по МПК A61K35/72 

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к технологии получения иммуностимулирующего препарата.

Сущность предлагаемого изобретения сводится к тому, что биологически активный препарат получают путем гидролиза дрожжей (пекарских ГОСТ 20085 или кормовых ГОСТ 171-81). Дрожжи разделяют на две части, одну часть разрушают кислотным гидролизом, а другую, равную, щелочным. После проведения обоих гидролизов, гидролизаты смешивают. Устанавливают нейтральное значение рН, отделяют осадок, который промывают три-четыре раза дистиллированной водой. Промытый осадок содержит до 90% Сахаров, представленных глюканом. Полученный осадок ресуспенди- руют в физрастворе до концентрации 1 мг/кл и используют в качестве биологически активного вещества.

Пример. 50 грамм сухих пекарских дрожжей заливают 200 мл дистиллированной воды. Полученную суспензию разделяют на две равные части, к одной части добавляют HCI, доводя конечную концентрацию кислоты до 0,5 М. Ко второй части

приливают NaOH, доводя ее концентрацию до 0,5 М. Гидролиз обеих частей проводят в течение одного часа при ЮОоС в емкостях с обратным холодильником. После окончания гидролиза - гидролизаты смешивают, охлаждают до комнатной температуры и устанавливают рН-7,0. Смесь гидролизатов центрифугируют, отделяют осадок, который промывают 3 раза дистиллированной во-- дои, очищая его от растворимых белков и полисахаридов. Полученный препарат сус- пендируют в физиологичеком растворе и стерилизуют и применяют для нормализации иммунного статуса животных.

П р и м е р 2. Делают две навески кормовых дрожжей по 25 грамм. Одну навеску дрожжей ресуспендируют в 100 мл 1 М HCI, другую в 1 М NaOH. Обе части гидролизуют в колбах с обратным холодильником при 120°С в течение одного часа. После гидролиза, гидролизаты объединяют, охлаждают, устанавливают нейтральное значение рН, Осадок отделяют отстаиванием, сливая над- осадочную жидкость, далее осадок промывают дистиллированной водой,

00

о

00 W

со

стерилизуют и готовят рабочее разведение пропарата.

П р и м е р 3. Биологическую активность препаратов исследуют in vivo и in vitro. Общепринятыми методами определяют количество антителообразующих клеток селезенки (тест Ерне) и индекс стимуляции, количество макрофагов и фагоцитарный индекс, комплемент фиксирующую активность препарата и лизоцимную активность сыворотки крови. Изучали способность препарата защищать мышей от заражения сальмонеллезом. Мышам вводили препарат, полученный по примеру 1 и 2, а через 48 часов их заражали вирулентным штаммом Salmonella.tlphimyrium 415 в дозе 10 LDso. Учет гибели животных вели в течение 10 дней и рассчитывали процент выживших мышей.

0

5

Из таблицы следует, что предложенный способ позволяет получать препарат, проявляющий высокую биологическую активность, воздействуя на разные звенья иммунной системы организма.

Формула изобретения Способ получения биологически активного препарата из дрожжей, включающий гидролиз дрожжей и отделение целевого продукта, отличающийся тем, что, дрожжи разделяют на две равные части, одну часть подвергают кислотному гидролизу 1М раствором HCI, а другую - щелочному гидролизу 1М раствором NaOH, гидролиз проводят при температуре 100-120°С в течение 1 ч, затем полученные гидролизаты смешивают, доводят рН до нейтрального значения и отделяют целевой продукт в виде нерастворимой фракции, :

Использование: биотехнология, ветеринария, получение иммуностимулирующего препарата. Сущность изобретения; Сухие дрожжи делят на две части, одну часть подвергают щелочному гидролизу 1 М раствором щелочи при 100-120°С в течение 1 ч, а другую - кислому гидролизу 1 М раствором HCI в тех же режимах. Полученные гидролизаты смешивают, доводят рН до нейтрального значения и отделяют целевой продукт в виде нерастворимой фракции. Препарат проявляет иммуностимулирующую активность. 1 табл.

Изучение биологической активности препаратов in vitro и in vivo