Способ определения уровня секреции норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных Советский патент 1993 года по МПК G01N33/74 G01N33/58 

Изобретение относится к области физиологии и может быть использовано для изучения механизмов синаптических процессов центральной нервной системы.

Целью изобретения является повышение выживаемости экспериментальных животных за счет уменьшения травматизации головного мозга.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения уровня секреции но- радрекалина в гипоталамусе, включающем введение 3Н-норадреналина в организм и последующее определение радиоактивности гипоталамуса, предварительно проводят краниоцеребральную гипотермию (КЦГ) до температуры мозга 33-29°С, а 3Н-норад- реналин вводят внутрибрюшинно.

Пример 1. Перед началом эксперимента для блокировки терморегуляторных реакций организма животных (40 крыс весом 200-250 г) наркотизировали внутрибрюшинными инъекциями смеси 5%-ного раствора тиопентала натрия и 30%-ного раствора гаммаоксимасля- ной кислоты из расчета 30 мг/кг и 100 мг / кг массы животного, соответственно. КЦГ до

температуры мозга 33-29°С проводили на установке для программного охлаждения. Для проведения КЦГ на черепе животного (/) устанавливали стеклянные трубки, залитые f в протакрил, по которым продували пары азота. В ходе экспериментов измеряли рек- § тальную температуру и температуру в сред- немухе, которая соответствует температуре гипоталамуса. Температуру коры больших полушарий головного мозга из мер.ми тер- 00 модатчиком, стереотоксически овеянным Ю через специальную направляющую трубку, () укрепленную на черепе животного протак- д рилом. Измерение температуры осущесталя- j ли электронным термометром с диапазоном измерения (-50}-(- 50)°С (разрешающая способность 0.1°С) и 4-мя датчиками температуры (терморезисторы СТЗ-18). размещенными на конце медицинской иглы. После самоотогрева животного изучали секрецию 3Н - НА радиоизотопным методом с использованием push-pull канюли, которую вводили по сте- реотоксическим координатам в переднюю и заднюю Области гипоталамуса. Канюлю соединяли с перистальтическим насосом и

всю систему заполняли раствором Кребса - Рингера. После заполнения системы раствором канюлю вводили в передние и за- дние отделы гипоталамуса, животному внутрибрюшинно вводили 20 мкл раствора Н - НА (1 мкл/мин) при помощи микрошприца. Перфузию проводили со скоростью 25430 мкл раствором Кребса-Рингера. Собирали 20-минутные фракции. Измерение радиоактивности собранных фракций про- водили, регистрируя возникающие при радиоактивном распаде / -частицы в сцинтилляционном счетчике. Коэффициент высвобождения (Ко) рассчитывали из отношения радиоактивности исследуемой фрак- ции к радиоактивности последней фракции отмывки, имеющей стабильный уровень радиоактивности;

У радиоактивность исследуемой фракции. имп/мии радиоактивность последнейфракции отмывки, ймп/мин

, . . .,062 (передний отдел гипоталамуса)

К,--2g|| |g- 2. Ю7( задний отдел гипоталамуса)

Результаты представлены в табл.1 в сравнении с прототипом.

Из абл,1 видно, что предлагаемый способ позволяет определять уровень секреции норадрёналйна в гипоталамусе с такой жеяючностью, как и Способ по прототипу.

После определения уровня секреции проводили наблюдение за выживаемостью крыс. Результаты представлены в табл.2.

Из табл.2 видно, что к 10-м суткам выживаемость крыс выше, чем в прототипе в 2 раза, что обусловлено меньшой травматич- ноетью предлагаемого способа,

П р и м е р 2. Три группы животных ( в каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры мозга 36, 35 и 34°С. После самоотогрева исследовали уровень секреции 3Н-норадре- налинз в передних и задних отделах гипота- ламуса. Результаты свидетельству ют о том,

что. при данном температурном режиме уровень секреции существенно ниже, чем в п рототи пе (табл .3}.

Примерз. Три группы животных (в каждом по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры 33, 31, 29°С (заявляемый режим). Исследовали уровень секреции 3Н-норадреналина в передних и задних отделах гипоталамуса. Результаты представлены в табл.4.

Из табл.4 видно, что в заявляемом температурном режиме (33-29°С) секреция -норадрёналйна в гипоталамусе не отличается от прототипа.

П р и м е р 4. Три группы животных (в каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры мозга 28, 25, 22°С (температурный режим ниже заявляемого) и исследовали уровень секреции 3Н-норадреналина. Результаты указывают на то, что при данных температурах уровень секреции практически не определяется. Результаты представлены в табл.5.

Из приведенных примеров следует, что заявляемый способ позволяет определять уровень секреции 3Н-норадреналина в гипоталамусе головного мозга экспериментальных животных с минимальной трзвматизацией мозга, что.обеспечивает высокую выживаемость после окончания. эксперимента.

Ф О.р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ определения уровня секреции норадрёналйна в гипоталамусе экспериментальных животных, включающий введение Н-норадреналина в организм животного и последующее определение радиоактивности гипоталамуса, о т л и ч а ющ- и и с я тем, что, с целью повышения выживаемости животных за счет уменьшения травматизации головного мозга, предварительно осуществляют краниоцеребраль- ную гипотермию до температуры мозга 33-29°С, а 3Н-норадреналин вводят внутрибрюшинно.

Использование: в области физиологии. Сущность изобретения: животным проводят краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 33-29°С, после чего внут- рибрюшинно вводят 3Н-норадреналина и определяют радиоактивность гипоталамуса, по которой судят об уровне секреции норадреналина. Изобретение позволяет снизить травматичность способа. 5 табл.

Таблица

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5