Способ профилактики криза отторжения почечного аллотрансплантата Советский патент 1993 года по МПК A61K33/16 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической и экспериментальной трансплантологии при трансплантации почки.

Цель изобретения заключается в уменьшении частоты развития острых кризов отторжения почечного аллотрансплантата и снижении количества осложнений, связанных с применением препаратов стероидных гормонов.

Цель достигнута тем, что в заявленном способе, включающем внутривенное введение препаратов стероидных гормонов, реципиенту во время операции и в раннем послеоперационном периоде, отличительным является то, что непосредственно перед включением почки в кровоток реципиента больному внутривенно вводят перфторуглеродную эмульсию (ПФУЭ) в дозе 10-15 мл/кг.

Препарат ПФУЭ является плазмозаме- нителем с газотранспортной функцией, изготовлен на основе эмульсии

перфторуглеродов и имеет следующий состав, г:

перфтордекалин15,2

перфторпараметил- циклогексил-

перидии7,6

проксанол-окслиэтилированный пропилен- гликоль (М.В. 8000)3,8 хлорид натрия0,6 хлорид калия 0,04 хлорид магния -0.02 Бикарбонат натрия 0,15 Хлорид кальция0,03 d-глюкоза 0.18 высокомолекулярный плазмоэкспандер (Альбумин или

оксиэтилкрахмал)3.0

Заявляемый способ включает в себя следующие приемы:

- во время операции трансплантации почки за 25-30 мин. до предлагаемого времени включения трансплантата в кровоток

Ё

00

ю XI ю ел

СА)

реципиента проводят внутривенную инфу- зию препарата ПФУКЭ в дозе 10-15 мл/кг; -за 10-15 мин до предлагаемого времени включения почки в кровоток реципиента осуществляют введение препарата стероидных гормонов, например метилпреднизо- лона в дозе 5 мг/кг;

-с первых суток после операции больному назначают профилактическую имму- носупрессивнуютерапию метилпреднизолоном. азатиоприном и сан- диммуном в начальных дозах 0,5, 1,0 и 7 мг/кг соответственно;

-одновременно с проведением профилактической иммуносупрессии осуществляютвнутривенноевведениеметилпр еднизолона в течение 4 суток по схеме: 5-2,5-2,5 -1.25 мг/кг.

Способ апробирован в экспериментах на 8 беспородных собаках в ходе которых после выполнения билатериальной нефрэк- томии осуществляли аллотрансплантацию почки на подвздошные сосуды с наложением урётероцистоанастомоза по 3Kcf рапузыр- ной методике. Трансплантаты пер ед пересадкой консервировали в растворе Ев- роколлинз в течение 12 часов при температуре 4-6 град.ц.

В контрольной группе исследовано 12 собак-реципиентов. Профилактику отторжения трансплантантов в этой группе осуществляли по способу-прототипу.

Кризы отторжения диагностировали используя иммунологические, биохимические и морфологические методы исследования. Мониторинг животных проводили в течение 20 сут после операции.

Установлено, что кризы отторжения развились в контрольной группе исследований у 6 животных. В группе животных, у которых использован заявляемый способ, кризы развивались у 2 животных (достоверность различий подтверждена точным методом фишера: Р ТМФ 0-05).

Осложнения, связанные с применением высоких доз стероидных гормонов, оценивали по развитию инфекционных осложнений. В группе животных, у которых использовали профилактическую иммуно- супрессию по заявляемому способу инфекционные осложнения были выявлены у 3 собак-реципиентов. В контрольной группе- у 7. (Достоверность различий подтверждена точным методом фишера: Р ТМФ 0,05).

Аналогичная серия экспериментов была проведена на двух группах кроликов вида Шиншилла. Контрольная группа животных включала 10 аллотрансплантаций почки выполненных с помощью микрохирургической техники. В экспериментальной группе (12

животных) - использован заявляемый способ. В результате применения заявляемого способа выявлено снижение частоты развития острых кризов отторжения в экспериментальной группе животных на 50,0% и уменьшение количества инфекционных осложнений на 40,6% по сравнению с контролем (Р ТМФ 0.05).

С целью выяснения механизмов профи0 лактического, в отношении острых кризов отторжения почечного аллотрансплантата, действия ПФУЭ проведено изучение его действия на лимфоцитарную взвесь. ПФУЭ добавляли в среду инкубации лимфоцитов в

5 количестве эквивалентном дозе введения препарата в кровь реципиентов. Изучение результатов лимфоцитотоксического теста, реакции бластгрансформации лимфоцитов (ФГА), определение ферментативной актив0 ности лимфоцитов по Na-K-АТФазе показало отсутствие достоверных изменений соответствующих результатов указанных тестов в сравнении с контролем.

Следовательно ПФУЭ не обладает пря5 мым иммуносупрессивным действием. Более вероятен его эффект в плане воздействия на трансплантат, который наряду с доказанным благоприятным действием препарата на структурную

0 полноценность мембранных образований клеток органа и стимулирующим воздействием на систему энергообразования может заключаться в следующем: в связи с реологическими свойствами препарата происхо5 дит быстрое удаление лейкоцитов - пассажиров и дендритных клеток, которые обладают мощными антигенными факторами, из сосудистого русла органа; в связи с физико-химическими свойствами - экрани0 рование клеток сосудистого эндотелия. Такая блокада благоприятствует тому, что лимфоциты реципиента не способны распознавать генетическую структуру почечного аллотрансплантата, что необходимо для

5 индукции нормальной трансплантационной реакции. Следствием этого является то, что введение ПФУЭ реципиенту при сочетании его с обычными компонентами профилактической иммуносупрессии позволяет сокра0 тить число кризов отторжения аллотрансплантата, снизить дозировки стероидных гормонов, и, соответственно, уменьшить число осложнений, связанных с их применением, что полностью соответст5 вует цели заявляемого способа,

Пример 1. В эксперименте на беспородной собаке № 1 весом 18 кг под комбинированнымэндотрахеальнымобезболиванием выполнена билатеральная нефрэктомия. Через 1,5 сут произведен забор одной почки у собаки № 2 с последующей консервацией органа в растворе Евро- коллоинз при температуре 4-6°С в течение 1 часов. После консервации выполнена трансплантация почки собаки № 2 собаке N 1 на подвздошные сосуды справа. Восстановление мочевыводящих путей произведено путем наложения уретероцистоанастомоза по экстрапузырной методике.

Во время операции, за 30 мин до предпо- лагаемого времени включения трансплантата в кровоток, собаке-реципиенту произведена инфузия ПФУЭ в дозе 10 мл/кг. За 15 мин до начала реперфузии трансплантата произведена внутривенная инфузия метипреда в до- зе5 мг/кг,

В послеоперационном периоде, начиная с первых суток, собаке вводили метип- ред в дозе 0,5 мг/кг, азатиоприн в дозе 1 мг/кг и сандиммун в дозе 7 мг/кг. В течение первых 4 суток одновременно с указанной профилактической иммуносупрессией собаке выполняли инфузии метипреда внутривенно по схеме: 5 мг/кг - 2,5 мг/кг 2 дня - 1,25 мг/кг. В течение 20 сут после операции каждые 2 дня проводили забор крови для выполнения анализов биохимичекого и иммунологического мониторинга. Результаты исследований показали, что азотовыдели- тельная функция трансплантата восстано- вилась через 7 сут после операции. В течение всего периода наблюдения иммунологических признаков криза отторжения трансплантата выявлено не было.

Через 20 сут после операции собаку забили под тиопенталовым наркозом путем кровопускания из бедренной артерии, и изъятый трансплантат подвергали гистологическому исследованию, в ходе которого признаков отторжения не наблюдали.

Пример 2. Под комбинированным эндотрахеальным наркозом выполнена би- латеральная нефрэктомия у кролика № 1. Через 1,5 сут под аналогичным обезболиванием выполнена нефрэктомия у кролика М 2. Изъятый орган отмыт раствором Еврокол- линз и помещен в термостатированный кон- вейер для консервации в течение 12 ч при

температуре 4-б°С. После консервации с использованием микрохирургической техники выполнена трансплантация почки на подвздошные сосуды кролику № 1. Произведено восстановление мочевыводящих путей путем наложения уретероцистоанастомоза.

За 30 минут до восстановления кровотока в трансплантате кролику-реципиенту внутривенно ввели препарат ПФУЭ в дозе 15 мл/кг. За 15 минут до реперфуэии трансплантата проведена инфузия метипреда в дозе 5 мг/кг.

Профилактическую иммуносупрессию осуществляли теми же препаратами и в тех же дозировках, что и в примере № 1.

В течение 15 сут каждые 2 дня проводили забор крови для проведения биохимического и иммунологического мониторинга. Его результаты показали, что физиологический уровень мочевины и креатинина крови восстановился на 6 сутки после операции. В течение периода наблюдения иммунологических признаков криза отторжения не выявлено.

Спустя указанный период наблюдения животное было забито произведено гистологическое исследование трансплантата, которое не выявило признаков реакции отторжения и инфекционного поражения органа. Параллельно гистологическому исследованию подвергнуты другие и паренхиматозные органы и ткани, прилегающие к месту операции. При этом данных в пользу инфекционно-воспалительного процесса в них выявлено не было.

Формула изобретения Способ профилактики криза отторжения почечного аллотрансплантата. включающий введение лекарственных препаратов, отличающийся тем, что, с целью уменьшения числа острых кризов отторжения аллотрансплантатов и осложнений, связанных с использованием стероидных гормонов, перед включением почки в кровоток реципиента внутривенно вводят препарат перфторуглеродной эмульсии в дозе 10-15 мл/кг массы тела.

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, трансплантологии. Цель - уменьшение числа острых кризов отторжения аллотрансплантатов и осложнений, связанных с использованием стероидных гормонов. Для этого перед включением почки в кровоток реципиента ему внутривенно вводят препарат перфторуглеродной эмульсии в дозе 10-15 мл/кг массы тела.