Способ диагностики криза отторжения почечного трансплантата Советский патент 1991 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической трансплантологии и трансплантационной иммунологии.

Цель изобретения - повьшение точности диагностики криза отторжения.

Способ осуществляют следующим образом.

За 1-1,5 ч до операции и в динамике после нее (можно и ежедневно, если необходимо тщательное наблюдение) осуществляют забор венозной крови в количестве 3 мл с гепарином (25 ЕД на 1 мл забранной крови). Затем выделяют лимфоциты на фиколл-верографине путем центрифугирования при 1500 об/мин 20 мин.

Выделенные лимфоциты разделяют на две порции и доводят их концентрацию до в мп,- одну порцию лимфоцитов инкубируют в 1 мл инкубационной смеси, содержащей, мМ: Nad 100, КС1 20; MgCl2 2,5; этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) 0,5, IaN35, трис-HCl рН 7,4 50, при 37°С, а другую порцию лимфоцитов в 1 мл аналогичной инкубационной смеси с добавлением 0,5 мМ уабаи- на в течение 15 мин. После чего в - каждую пробирку вводят го 1 мл раствора аденозинтрифосфат натрия (АТФ-Na) (2,5 мМ).

Через 20 мин реакцию останавливают путем введения в каждую пробирку по 1 мп 2,5 мМ трис-ацетатного буфера рН 4,3, содержащего для определения неорганического фосфора 0,2% мо- либдата аммония, и сразу же добавляют 0,2 мл смеси 1% аскорбата и 5 мМ раствора CuSO,.. Количество неорганического фосфора определяют фотокало- риметрически через 20 мин в каждой пробирке при длине волны 735 им. Кон

центрацню неорганического фосфора, образующуюся при распаде АТФ лимфоцитов, рассчитывают по разности концентрации его в среде инкубации без уабаина и в его присутствии.

Через 24 ч повторно берут кровь.

Криз отторжения почечного трансплантата диагностируют при увеличении

16494364

она составила 0,0115 мгР/мл«ч (увеличение по сравнению с исходным было в 11,5 раза). Клинически криз был диагностирован на 24-е сутки. Лечение криза стероидными гормонами привело к снижению концентрации неорганического фосфора до 0,0019 мг на 32-е сутки. Функция трансплантата

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической трансплантологии. Цель изобретения - повышение точности способа. После проведения операции по трансплантации почек У больного в динамике осуществляют забор крови, из которой получают взвесь лейкоцитов. Затем определяют в них активность калийнатрие- вой атефазной активности и при увеличении этой активности в 5 раз в сравнении с предыдущим исследованием диагностируют криз отторжения почечного трансплантата. В сравнении с прототипом увеличивается точность способа.

концентрации неорганического фосфора, JQ восстановилась на 33-и сутки.

образующегося при распаде АТФ лимфоцитов крови больного более чем в пять раз по сравнению с величиной, определенной в первые сутки после трансплантации почки.

Пример 1. Больная находилась в клинике по поводу хронического гло мерулонефрита, ХПН терминальной стадии. Выполнена трансплантация почки в правую подвздошную область. До пересадки почки концентрация фосфора (Р) при распаде АТФ лимфоцитов составляла 0,001 мг Р/мл.ч. В послеоперационном периоде больной назначена иммуносупрессивная терапия: метипред 0,5 мг/кг, азатиоприн 1 мг/кг и сан- диммун 8 мг/кг Функция трансплантата в первые 5 сут была удовлетворительной. Исследование концентрации фосфора при распаде АТФ лимфоцитов на 3-й сутки после операции выявило увеличение до 0S0095 мг Р/мл«ч, т.е. увеличение содержания Р увеличилось в 9,5 раз. Клиническая картина криза отторжения имела место на 6-е сутки после операции,, Криз купирован стероидами на 10-е сутки после операции, при этом концентрация неорганическопо фосфора составила 0,0019 мг Р/мл.ч.

На 23-и сутки после операции определяли концентрацию неорганического фосфора при распаде АТФ лимфоцитов,

15

20

25

30

35

40

У 17 больных после пересад ки наблюдали клиническую карт воз отторжения трансплантата

случаях. При этом увеличение рации неорганического фосфора зующегося при распаде АТФ лим реципиентов, более чем в 5 ра дали за 3-4 сут до развития к кой картины. Ложных реакций н дали. Только в одном случае к торжения наблюдали повышение рации неорганического фосфора 4,5 раза. Таким образом, дост ность диагностики кризов отто почечного трансплантата соста 96,5%. Предлагаемьй способ по достоверность диагностики кри торжения с 42-83 до 96,5%.

Формула изобрет Способ диагностики криза о ния почечного -трансплантата пу бора крови в динамике после о определения ферментативной ак ти, отличающийся что, с целью повышения точнос соба, определяют аденотрифосф активность в лимфоцитах и при личении в 5 раз по сравнению зультатом предыдущего исследо диагносцируют криз отторжения ного трансплантата,

восстановилась на 33-и сутки.

У 17 больных после пересадки почки наблюдали клиническую картину кри- воз отторжения трансплантата в 28 случаях. При этом увеличение концентрации неорганического фосфора, образующегося при распаде АТФ лимфоцитов реципиентов, более чем в 5 раз наблюдали за 3-4 сут до развития клинической картины. Ложных реакций не наблюдали. Только в одном случае криза отторжения наблюдали повышение концентрации неорганического фосфора в 4,5 раза. Таким образом, достоверность диагностики кризов отторжения почечного трансплантата составила 96,5%. Предлагаемьй способ повышает достоверность диагностики криза отторжения с 42-83 до 96,5%.

Формула изобретения Способ диагностики криза отторжения почечного -трансплантата путем забора крови в динамике после операции, определения ферментативной активности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют аденотрифосфатазную активность в лимфоцитах и при ее увеличении в 5 раз по сравнению с ре-, зультатом предыдущего исследования диагносцируют криз отторжения почечного трансплантата,