Способ выявления антигенов в биологических жидкостях Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может применяться при диагностике инфекционных, аллергических, онкологических заболеваний.

Целью изобретения является повышение чувствительности выявления антигенов в биологических жидкостях.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе выявлении антигенов в биологических жидкостях, основанном на регистрации антитело-антиген взаимодействий методом лазерной корреляционной спектроскопии, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол. м. 500000, в концентрации 0,1-0,15 мг антител на 1 мл биологической жидкости, а реакцию взаимодействия антитело-антиген осуществляют при рН 7-8.

Сущность способа заключается в следующем.

Используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол.м.

500000 (антитела-декстран). Концентрация .антител 0,1-0,15 мг на 1 мл биологической жидкости.

Из снятых экспериментально спектров исходных декстронов молекулярных масс для использования в заявленном способе декстраны мол.м. 500000 были выбраны с целью регистрации достоверных увеличений размеров частиц в результате взаимодействий антиген - антитело (связанное с декстраном).

Концентрация используемого в способе антитела, связанного с декстраном, выбрана экспериментально оптимальной 0,1-0,15 мг на 1 мл жидкости из спектров светорас- сеивания комплексов (агрегатов), образующихся в результате добавления антигена к декстран-антителам в концентрации от 0,05- до 0,20 мг/мл. Избыток антител по сравнению с антигеном необходимом для образования крупных комплексов в результате взаимодействия антитело-антиген.

00

со

00

00

д

00

Уменьшение концентрации до 0,05 мг/мл уменьшает размеры комплексов, что ухудшает достоверность регистрации. Увеличение концентрации до 0,2 мг/мл нецелесообразно, т.к. не изменяет размеров, образующихся комплексов (по сравнению с концентрацией 0,15 мг/мл).

Данные декстран и антитела добавляют к контролируемой биологической жидкости (например, крови). При этом, рН среды поддерживают 7-8.

Если в биологической жидкости присутствует антиген к данным антителам (которые в заявляемом способе пришиты к альдоенолдекстранам), что происходит реакция антиген-антитело, приводящая к появлению в жидкости крупных агрегатов, которые регистрируют методом лазерной корреляционной спектроскопии. рН среды, при котором осуществляют реакцию взаимодействия антитело-антиген, был выбран 7-8, исходя с одной стороны, из условий, благоприятных для взаимодействия антитело-антиген; с другой - из условий, в которых не наблюдается еще деградация используемого полисахарида.

Использовались альдоенолдекстраны, мол.м. 500000, к которым при рН 7 присоединены антитела против овальбумина.

Получение альдоенолдекстрана:

0,428 г №104 растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор охлаждают до 10-13°С и при перемешивании осторожно присыпают 0,496 г декстрана мол.м. 500000. Реакцию проводят при рН 3, при температуре 20°С в течение 24 ч, в темноте. Затем реакционную массу помещают в про-: точный диализатор. Диализ ведут в течение 5 сут при рН 6. Продукт лиофильно высушивают. К 0,2 мл физиологического раствора, содержащего декстран-антитело против овальбумина в концентрации (0,5-0,75) мг антител на 1 мл, добавляют 0,8 физиологического раствора (биологической жидкости),

содержащего 210 овальбумина на 1 мл (антигена). рН среды поддерживают 0,ОТ М фосфатным буфером в пределах 7-8. Реакцию антиген-антитело (образование комп- лекса агрегатов) регистрируют методом

лкс.

В заявляемом способе использована гетеродинная схема измерений, в которой регистрируется биение между рассеянным

светом и опорной волной. Гетеродинная схема измерений применена потому, что она позволяет получить в 2 раза большую статистическую обработку данных измерений. Математическая обработка резуль.татов эксперимента состоит в том, чтобы по имеющемуся спектру мощности фотона восстановить искомую ФР процессов, происходящих в излучаемой системе по соответствующим лоренцианам с полуширинами, или по временам релаксации.

В таблице представлено сравнение по чувствительности на антиген (сыворотка) для различных методов: по экспериментальным данным и по данным литературы.

Таким образом, при использовании заявляемого способа достигается увеличение чувствительности в 100-1000 раз. Следует отметить высокую воспроизводимость результатов и специфичность выявления антигенов.

Формул а изобретения

Способ выявления антигенов в биологических жидкостях, включающий регистрацию реакций антитело-антиген методом лазерной корреляционной спектроскопии, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном, мол.м. 500000, в концентра- ции 0,1-0,15 мг антител на 1 мл биологической жидкости и реакцию взаимодействия антитело-антиген осуществляют при рН 7-8,

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может применяться при диагностике инфекционных, аллергических, онкологических заболеваний. Целью данного изобретения является повышение чувствительности выявления антигенов в биологических жидкостях. Цель достигается тем, что в известном способе выявления антигенов в биологических жидкостях, основанном на регистрации антитело - антиген взаимодействий методом лазерной корреляционной спектроскопии, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол.м. 500000, в концентрации 0,1-0,15 мг антител на 1 мл биологической жидкости, а реакцию взаимодействия антитело - антиген осуществляют при рН 7-8. 1 табл.