СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОРБЕНТА Российский патент 1998 года по МПК B01J20/10 B01J20/32 

Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано для выявления специфической реакции антиген-антитело в диагностике с помощью иммуноферментного анализа, реакции иммунофлуоресценции и бактериологического метода.

Известен способ получения иммуносорбента на основе целлюлозы, включающий ковалентное связывание белкового лиганда с носителем. Недостатком способа является низкий уровень специфичности сорбента, кроме того, органический носитель непрочен, подвержен разрушению при воздействии микроорганизмов [1]
Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения полиакриламидного иммуносорбента методом эмульсионной полимеризации, содержащего магнитный порошок (Fe₂O₃) [2]
Недостатками указанного способа являются низкий уровень специфической емкости иммуносорбента, длительность и многостадийность процесса его получения, использование дорогостоящих импортных токсичных реактивов.

Цель изобретения повышение специфической емкости, чувствительности и упрощение способа получения иммуносорбента.

Цель достигается тем, что для увеличения специфической емкости, чувствительности иммуносорбента проводят модифицирование кремнеземного носителя аэросила 0,2 0,4% -ным раствором декстрана с последующим окислением полученного сорбента перхлоратом натрия.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что осуществляется активирование носителя органическим полимерным материалом декстраном, представляющим собой полисахарид линейный полимер на основе циклической формы глюкозы, где звенья связаны α -1,6-гликозидной связью. При последующем оксилении модифицированного сорбционного материала раствором перхлората натрия получаемый продукт активирован альдегидными группами, которые способны к химическому взаимодействию с чумными, туляремийными и холерными иммуноглобулинами.

1. Пример 1. Смесь, состоящую из 5 г аэросила и 1 г магнитного порошка, суспендируют в 100 мл 0,5%-ного водного раствора декстрана и далее выдерживают при температуре 24^oC 1 ч. Полученный сорбент высушивают при 100 - 110^oC в течение 30 мин. К полученному препарату добавляют 50 мл водного раствора, содержащего 2 г перхлората натрия, инкубируют смесь в темноте 1 ч. Затем сорбент отмывают 100 мл дистиллированной воды. К 0,02 г носителя приливают 1 мл чумных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 4 мг/мл. Смесь оставляют при 24^oC в течение 2 ч, далее надсадочную жидкость удаляют, а носитель трижды по 10 мл промывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия. Длительность получения иммуносорбента составляет 4,5 ч.

Результаты определения специфической емкости иммуносорбента проводят методом иммунофлуоресценции. К 0,5 мл 10%-ного раствора иммуносорбента приливают 1 мл чумного микроба в концентрации 10³ микробных тел (м.т.)/мл и инкубируют смесь 1 ч при 24^oC. Далее иммуносорбент отмывают 50 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Вносят 0,5 мл иммуноглобинов чумных люминесцирующих в рабочем разведении и инкубируют 30 мин. 30 мин. Отмывают сорбент 0,9%-ным раствором хлорида натрия и проводят регистрацию результатов в люминесцирующем микроскопе Люмам P-2 по общепринятой DASS-системе. Параллельно с опытной пробой измеряют люминесценцию контрольной пробы (иммуносорбент без контакта с чумным микробом). Специфическая емкость иммуносорбента, измеренная методом иммунофлуоресценции, составляет 10 у.е. /мг. Чувствительность метода составляет 10³ м.т./мл чумного микроба.

Пример 2. Способ получения иммуносорбента осуществляют по методике примера 1, но для модифицирования аэросила используют 0,4%-ный раствор декстрана. Специфическая емкость составляет 10 у.е./ мг. Чувствительность метода составляет 10³ м.т./мл чумного микроба.

Пример 3. Способ получения иммуносорбента осуществляют по методике примера 1, но для модифицирования аэросила используют 0,3%-ный раствор декстрана. Специфическая емкость составляет 9 у.е. /мг. Чувствительность метода составляет 10³ м.т./мл чумного микроба.

Пример 4. Способ получения иммуносорбента осуществляют по методике примера 1, но для модифицирования аэросила используют 0,2%-ный раствор декстрана. Специфическая емкость составляет 6 у.е./мг. Чувствительность метода составляет 10³м.т /мл чумного микроба.

Пример 5. Способ получения иммуносорбента осуществляют по методике примера 1, но для модифицирования аэросила используют 0,1%-ный раствор декстрана. Специфическая емкость составляет 4 у.е./мг. Чувствительность метода составляет 10³ м.т./мл чумного микроба.

Пример 6. Способ получения иммуносорбента осуществляют по методике примера 1, но на последнем этапе синтеза к 0,02 г активированного носителя приливают 1 мл туляремийных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 4 мг/мл. Специфическая емкость иммуносорбента составляет 10³м.т./мл туляремийного микроба.

Пример 7. Способ получения иммуносорбента осуществляют по методике примера 1, но на последнем этапе синтеза к 0,02 г активированного носителя приливают 1 мл холерных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 4 мг/мл. Специфическая емкость иммуносорбента составляет 10 у.е./мг. Чувствительность метода составляет 10³м.т./мл. холерного вибриона.

В отличие от прототипа предлагаемый способ получения иммуносорбента повышает специфическую емкость препарата в 3 3,5 раза, увеличивает чувствительность и при этом сокращается длительность синтеза иммуносорбента в 9 раз. Результаты представлены в таблице.

Как видно из таблицы, для модифицирования аэросила оптимален раствор декстрана с концентрацией 0,2 0,4% При увеличении концентрации до 0,5% не наблюдается увеличение специфической емкости иммуносорбента, тогда как уменьшение до 0,1% снижает специфическую емкость иммуносорбента.

Положительный эффект и преимущества предлагаемого способа получения иммуносорбента объясняются тем, что в процессе получения композиционного органо-минерального носителя осуществляется активирование его поверхности декстраном. При последующем поверхностном окислении функциональных групп полисахарида образуются высокоактивные группы, которые реагируют с молекулами лиганда белковой природы иммуноглобулины чумные, туляремийные и холерные. Иммуносорбент, полученный по предлагаемому способу, обеспечивает повышение специфической емкости, чувствительности, характеризуется механической, химической и микробиологической устойчивостью. Кроме того, в отличие от прототипа способ отличается простотой технологии получения, исключающей токсические химические реагенты.

Изобретение относится к иммунохимии и применяется для выявления специфической реакции антиген-антитело в диагностике с помощью иммуноферментного анализа, реакции иммунофлуоресценции и бактериологического метода. Сущность: способ заключается в активировании аэросила органическим модификатором декстраном. При последующем окислении модифицированного сорбционного материала раствором перхлората натрия, носитель активирован альдегидными группами, способными к химическому взаимодействию с чумными, туляремийными и холерными иммуноглобулинами. 1 табл.

Способ получения иммуносорбента, предусматривающий ковалентное связывание лиганда белковой природы с модифицированным носителем, отличающийся тем, что в качестве носителя используют аэросил, модифицированный 0,2 0,4% раствором декстрана и окисленный перхлоратом натрия.