Раствор для осуществления твердофазного иммунохимического анализа вирусных антигенов Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано-для диагностики вирусных заболеваний человека-и животных,

Использование предложенного раство- ра иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. На поверхности лунок полистиролового микропланшета адсорбируют кроличьи вирусоспецифические антитела к ящурному антигену А22 из расчета 0,1 мл на лунку (1:4000) в 0,1 М карбонатном буфере, рН 9,4-9,6 в течение 1 ч при 37°С. Затем растворы выливают и трижды промывают лунки (по 2 мин) физиологическим раствором, рН 7,1-7,2, содержащим 0,025% проксанола. В отмытые лунки вносят поО,1 мл двукратных разведений антигена на предложенном растворе-й инкубируют в течение 1 ч при 37°С. После этого растворы выливают, лунки панелей трижды промывают (по 2 мин) предложенным раствором. После этого в лунки вносят по 0,1 мл рабочего разведения (1:1000) коньюгата кроличьих

вирусоспецифических антител к антигену А22 с пероксидазой хрена и инкубируют в течение 1 ч при 37°С.

Непрореагировавшие компоненты удаляют промыванием лунок предложенным раствором. Затем в лунки вносят субстрат фермента и инкубируют в течение 10 мин при 37°С. Регистрацию результатов проводят визуально по изменению цвета.

Результаты исследований представлены в табл.1.

П р и м е р 2. Иммуноферментный анализ осуществляют как описано в примере 1, однако используют ящурный антиген 0 № 194, специфические антитела в разведении 1:2000 и конъюгат пероксидазы хрена с у- глобулином овцы, гипериммунизированной вирусом ящура 0 № 194. Результаты исследований представлены в табл.2.

Пример 3. Иммуноферментный анализ осуществляют как описано в примере 1. однако используют антиген вирусной везикулярной экзантемы свиней(ВЭС) А-48, специфические антитела в разведении 1:1600 и

fe

СО

со ел ел

конъюгат пероксидазы хренз с кроличьими антителами к вирусу ВЭС А-48 в разведении 1:2000. Результаты исследований представлены в табл.3.

П р и м е р 4. На поверхности круглодон- ных лунок полистиролового микропланшета адсорбируют антитела к вирусу болезни Ауески (В Б А) из расчета 0,1 мл на лунку (10 мкг/мл, 1:400) в 0,1 М карбонатном буфере, рН 9,6, в течение 1 ч при 37°С. Затем растворы выливают и промывают лунки 3 раза по 2 мин физиологическим раствором, рН 7,1-7,2, содержащим 0,0125% проксанола. В отмытые лунки вносят по 0,1 мл двукратных разведений антигена на предложенном растворе и инкубируют в течение 1 ч при 37°С. После этого растворы выливают, лунки панелей промывают 3 раза по 2 мин предложенным раствором. Затем в лунки вносят по 0,1 мл рабочего разведения (1:7) конъю- гата антител к вирусу болезни Ауески с эритроцитами барана и инкубируют при 37°С. Учет результатов проводят по наличию или

0

5

0

отсутствию агглютинации. Результаты исследований представлены в табл.4.

Данные, приведенные в табл. 1-4, свидетельствуют о том, что использование предложенного раствора позволяет повысить чувствительность иммунохимического анализа, что имеет большое значение для выявления вирусных антигенов. Формула изобретения Раствор для осуществления твердофазного иммунохимического анализа вирусных антигенов, содержащий хлористый натрий, поверхностно-активное вещество и дистиллированную воду, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности анализа, в качестве поверхностно-активного вещества раствор содержит проксанол при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Хлористый натрий0,8-0,9

Проксанол0.0125-0,05

Дистиллированная водаОстальное

Использование: биотехнология, диагностика вирусных заболеваний человека и жи- вотных. Сущность изобретения: для осуществления иммунохимического анализа вирусных антигенов используют раствор, в качестве поверностно-активного вещества, содержащий проксанол. Чувствительность анализа в среднем повышается в 1,5-2 раза. 4табл.

Активность антигенов выражена в величинах, обратных титру

Таблица

п 3-5

Таблица2

п 3-5

АКТИВНОСТЬ антигенов показана в величинах обратных титру

Активность антигенов выражена в величинах, обратных титру

Продолжение табл. 2

ТаблицаЭ

Таблица4