i Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии. j Целью изобретения является придание (композиции противовирусного и иммуномо- дулирующего свойств. j Применение лимфокинов сдерживается |ввиду узкой области терапевтического ис- )пользования и значительной токсичности, которая наблюдается при высоких дозах, (необходимых для того, чтобы вызвать реакцию в раковой опухоли человека или при вирусных заболеваниях. Существует сине- ргетическая связь между лимфокинами и днРНК, которая значительно снижает необходимые дозы лимфокинов, в частности 1L- 2, и одновременно расширяет их область (терапевтического применения. Специаль- 1ные комбинации днРНК плюс 1L-2 при ле- чении раковых, вирусных и воспалительных (заболеваний существенно увеличивают процент выживания животных, носителей |меланомы человека.
j Лимфокины получают при помощи тех- j нологии рекомбинантной ДНК. Термин 1L-2
относится к клеткам-убийцам, активированным рекомбинантными лимфокинами. Последние продуцируются в лабораторных условиях при воздействии на кровяные клетки человека (полученные лейкаферезом) при помощи 1L-2. Затем эти клетки снова вводят пациенту, где АК-клетки при продолжении стимулирования 1L-2 будут убивать или регулировать опухоль пациента.
Наиболее чувствительными опухолями являются опухоли почек и меланома. при этом настоящее изобретение имеет широкую область применения при других видах рака, вирусных расстройствах и различных воспалительных состояниях.
Синергетическая комбинация днРНК в качестве нетоксичного элемента и лимфоки- на в качестве токсичного элемента значительно снижает необходимые дозы лимфокинов, особенно 1L-2, до умеренных, нетоксичных доз и одновременно расширяет область их терапевтического применения. Синергетическая комбинация,в частности, интерферона или различных ин00
со о
о
00
со
терлейкинов, таких как 1L-2 в качестве компонента лимфокина, является эффективным средством для регулирования развития опухоли человека, в частности рака легких и почек и злокачественной меланомы, или при других расстройствах.
Композиция, являющаяся предметом изобретения, представляет собой днРНК и интерлейкин, применяемые одновременно или последовательно, концентрации которых приводят к увеличению содержания как К-, так и АК-клеток в организме без увеличения токсичности. Одновременно с использованием вышеупомянутой днРНК/лимфокин-терапией, настоящее изобретение включает также применение материала, который ингибирует активатор циклооксигеназы. В качестве примера настоящее изобретение включает одновременное применение индометаци- на, ингибитора простагландина, при этом высвобождается управляющий простаг- ландин и полученная в результате К-клетка снижает реакцию регулирования.
Таким образом, естественные ингибиторы искомых К-клеток уничтожаются и популяция К-клеток соответственно увеличивается.
Количество компонентов комбинации варьируется в соответствии с клиническими наблюдениями и результатами терапии. Общие количества днРНК дают пиковую концентрацию в крови 0,1-1000 мкг днРНК на 1 мл в системном кровообращении сразу же после применения, измеренную в точке, удаленной от места вливания. Если лимфо- кином является интерферон, в предпочтительном варианте а- интерферон, то обеспечивается количество 0,01-100000 ИРЕд на 1 мл жидкости организма пациента. Когда лимфокином является 1L-2, топрименяемое количество лежит в области.от примерно 102 1L-2 единиц на 1 кг массы пациента до значения, приближающегося к неприемлемым уровням токсичности, которое, может быть очень высоким, например 106 единиц. Самые эффективные, с приемлемыми значениями токсичной реакции, величины лежат в области примерно 103-104 1L-2 единиц на 1 кг массы тела.
Исследования на живых организмах и в лаборатории подтверждают, что днРНК (и плохо сочетаемые днРН К, в частности) обладают синергетическим фармакологическим действием в общем случае, с интерлейки- ном (в частности, с 1L-2), которые приводят к усиленной биологической реакции (противоопухолевой, противовирусной, иммуно- модуляторной) с значительно более низкой токсичностью. Доза 1L-2, необходимая, например, для противоопухолевой реакции, может быть уменьшена в 30-100 раз. Сине- ргетический фармакологический эффект подтверждается как на уровне К (натураль- ных убийц)-чувствительных, так и на уровне К-стойких опухолевых или инфицированных вирусов клеток; К-стойкие опухолевые или инфицированные вирусом клетки вызываются также LAK (активированными лимфокином убийцами)-клетками. Эта активность совершенно однозначна с использованием в качестве маркеров моноклональных антител, в которых наблюдается значительное увеличение одновременно как К-клеток (с
5 использованием моноклональногоантитела азиало-Gml), так и LAK-клеток (с использованием моноклонального антитела Thy 1, 2). Эти антитела являются легкодоступными реагентами моноклональных антител, Одно0 временное использование соединений,которые уменьшают биологический уровень различных естественных антагонистов К- клеток (таких, как простагландин), еще более улучшает синергетический эффект.
5ДнРНК действуют как биохимические
катализаторы, увеличивая селективное уничтожение клеток опухолей применяемых 1L-2, продуцируемым LAK-клетками, без токсического действия. Этот факт установ0 лен при проведении исследований на культурах клеток. Линию клеток рака почек человека, обозначаемую через 7860, выращивают в стандартных чашках Петри и подвергают воздействию различных
5 потенциальных клеток-убийц, Периферийные клетки крови, полученные от здорового человека, именуют клетками-эффекторами (клетками-убийцами), а клетки рака почек - клетками-жертвами. Степень уничтожения
0 последних (именуемая цитотоксичностью) измеряют различными методами, включая использование сверхжиэнеспособных штаммов или радиоизотопов. Погибшие клетки опухоли высвобождают ранее погло5 щенные радиоактивные метаболические предшествующие соединения и не могут далее поглощать внеклеточные питательные вещества. Например, амплиген, плохо сочетаемая днРНК, увеличивает активность че0 ловеческих LAK-клеток (полученных из крови здорового человека) значительно больше, чем с использованием только 1L-2. При концентрации 1L-2 в 1000 единиц на 1 мл уже достигается максимальная гибель
5 клеток, и невозможно ее поднять еще больше при помощи днРНК. Катализатор, днРНК, в этой системе, если он используется один, плотностью инертен. Следовательно, воздействие на клетки опухоли не является результатом простого арифметического
суммирования 2 маргинально активных агентов.
j В отдельных экспериментах также покарано, что днРНК (плохо сочетаемая днРНК) не заставляет лимфоциты продуцировать 1L-2. ДнРНК может работать в системе лимфокин 1L-2 при помощи различных других средств, включая изменение плотно- ст/1 некоторых антигенов на клетках-жертвах таким образом, что эффективность действия клеток-убийц возрастает. Кроме того, днРНК и 1L-2 вместе могут изменять эффекты после гибели клеток, например увеличение связывания клеток эффекторов- или увеличение продуцирования раз- цитотоксичных факторов, или увеличение циркуляции клеток-убийц от одной клетки-жертвы опухоли к другой клетке- ж ртве опухоли.
Исследования на животных показывают более высокую выживаемость и уменьшение скорости распространения опухоли, Опухоль меланомы человека, именуемая ВР, вводят в подушечку лапки мышей не- сшльких групп. Мыши не могут отторгнуть ка чужеродную человеческую опухоль. У необработанных мышей клетки опухоли быстро размножаются, распространяются в легкие, и животные погибают. Обработан- нь м мышам вводят дозы в 103-104 единиц/кг 1L-2 (примерно 2500 единиц на мь шь) и днРНК (500 мкг), что эквивалентно примерно 100-300 мг для пациента массой 60 кг. Оба биологических препарата дают дв;э раза в неделю.
Показано значительное снижение ме- та|:тазов в легких животных, обработанных дн-РНК плюс 1L-2, что очев идно является неожиданным по сравнению с результатами, полученными при применении двух этих агентов отдельно. Такое уменьшение мета- CTJISOB в легких коррелирует с увеличением выживания. Аналогичные результаты пол- для интерферона (альфа) 2000 ЕИР (единиц интерферона), когда плохо сочетаемая днРНК (500 мкг дважды в неделю) в комбинации приводит и дальнейшему увеличению ингибирования опухоли (р 0,02). Важным фактором является то, что комбинации лимфокина (днРНК) не вызывали обнаруживаемой токсичности у животных.
Преимущества терапевтического синергизма на уровне человека.
j Терапия с использованием комбинаций, являющейся предметом изобретения, снижает токсичность лимфокинов в общем случае и 1L-2 в частности в клинической медицине. 1L-42 является эффективным при низких дозах толь ко 103-10 единиц на 1 кг, если его используют в комбинации с днРНК,
в то время как при использовании без днРНК он совсем неэффективен при таких безопасных дозах.
При вирусных расстройствах могут быть
получены аналогичные терапевтические преимущества. Например, терапевтические вмешательства, которые воздействуют только на иммунные дефициты (чувствительны к 1L-2) при HIV-инфекциях, оказывается,
являются производящими обратный эффект. Считается, что клетки-помощники Т4 с ТАС-рецепторами чувствительны к лимфо- кину 1L-2, но в жертвах вируса СПИД-11.-2 вызывают размножение клеток, которые являются непосредственно уязвимыми для HIV-инфекции, и в результате наблюдается ухудшение состояния пациента. При помощи добавления днРНКи 1L-2 можно добиться расширения и улучшения спектра 1L-2 и,
потенциально, других лимфокинов, таких как интерферон и ТНФ, в качестве полезных противовирусных агентов.
Плохо сочетаемая двунитевая РНК является известной формой макромолекулярной
РНК, в которой дестабилизация двойной спирали предотвращает спаривание оснований. Плохо сочетаемая днРНК является хорошо известной благодаря ее свойствам индуцирования интерферона, что указывает
на механизм, не связанный с самой индукцией интерферона.
Общим терапевтическим осуществлением плохо сочетаемой двунитевой РНК является синтетическая днРНК, образованная
при помощи формирования комплексов полирибонинозиновой и полирибоцитиди- ловой уридйловой кислоты, такой как r/nr/Cx, V или G/л, где х - принимает значение от 4 до 29, например r/n r(Ci2V)n (амплиген). Основное терапевтическое преимущество плохо сочетаемых днРНК над другими формами натуральной и/или синтетической днРНК заключается в их более низкой токсичности для животных и человека. Далее ранние комплексы днРНК способны возбуждать различные, связанные с интерфероном, эффекты, но токсичность таких соединений мешает какому-либо клиническому применению
при лечении рака или связанных с ним расстройств.
Под плохо сочетаемой днРНК подразумевают ту РНК, в которой водородная связь (связывающая основания) между составляющими нитями является относительно неповрежденной, т.е. прерывается в среднем меньше, чем на одну пару оснований на каждые 29 последовательных остатков оснований, Термин плохосочетаемая
днРНК необходимо понимать соответствующим образом.
ДнРНК может быть комплексом поли- инозината и полицитидилата, содержащим долю урациловых оснований или гуанидино- вых оснований, например, от 1 в 5 до 1 в 30 таких оснований (поли 1, поли С4-29 х V или G). Плохо сочетаемой днРНК может быть поли 1.поли С, V, в котором отношение С и V составляет примерно 13 и 1, а коэффици- енты отложения поли I и поли С, V оба меньше 9 и содержатся внутри единиц друг от друга, т.е. в предпочтительном варианте от 6,5 примерно до 7,5.
ДнРНК может иметь общую формулу г/п (Ci2-isV)n. Другие подходящие примеры днРНК описаны ниже.
Плохо сочетаемые днРНК;, используемые в предпочтительном варианте реализа- ции настоящего изобретения, основаны на сополинуклеотидах, выбранных из поли (Сп, V)w поли(Сп, G), в которых п- целым числом от 4 до 29, и являются плохосочетаемыми аналогами- комплексов полирибоинозино- вой и полирибоцитидиновой кислот, образованных при помощи модификации r/n rCn с целью присоединения непарных оснований (урацила или гуанина) вдоль нити пол- ирибоцитидилата (гСп). В качестве альтернативы днРНК можно получить из поли (1). поли (С) днРНК при помощи модификации рибозиловой основы полири- боинозиновой кислоты (г/п), например, при помощи включения 2-0-метил рибо- зиловых остатков. Из этих плохо сочетаемых аналогов r/n rCn предпочтительными являются те, которые имеют общую форму- луг/п.г(С12У)п.
или
Специальными примерами плохо сочетаемой днРНКдля использования всоответ- ствии с настоящим изобретением являются:
поли() -поли(С4, V),
поли() поли(С, V),
поли() поли(С13, V),
поли() поли(С22, V),
поли() поли(С20, G),
поли() поли(С29, G) и
поли()). поли(Ср/23 JS р).
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает днРНК, в предпочтительном варианте плохо сочетаемую, лимфокин и, необязательно, соединение, которое ингибирует активатор циклооксигеназы, в качестве активных компонентов вместе с фармацевтическим носителем или разбавителем.
Использование изобретения позволит улучшить лечение рака, вирусных инфекций и иммунорегуляторных расстройств у человека.
Формула изобретения
Противоопухолевая композиция, содержащая лифокин, в частности, интерлейкин- 2, отличающаяся тем, что, с целью придания ей противовирусного и иммуно- модулирующего свойств, она дополнительно содержит днРНК формулы r/nr(C12-V)n, a в качестве лимфокина содержит «-интерферон или интерлейкин-2 при следующем количественном соотношении компонентов, мг:
0,6-0,63; 60-6109-6,3-109МЕ
7Ю4-7107МЕ.
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, Цель изобретения - придание композиции противовирусного и иммуномодулирующего свойств. Противоопухолевая композиция содержит днРНК и а -интерферон или интерлейкин-2 в определенных соотношениях. Изобретение позволяет улучшить лечение рака, вирусных инфекций и иммунорегуляторных расстройств у человека.
| Joyrna of Medicine, v | |||
| Способ получения древесного угля | 1921 |
|
SU313A1 |
