Способ отбора высокобелковых форм люпина узколистного Советский патент 1993 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биохимическим анализам белков растений, и может быть использовано в селекции при отборе высокобелковых форм люпина узколистного.

Цель изобретения - повышение эффективности отбора за счет возможности целенаправленного выделения форм люпина узколистного С генетически обусловленным бо/ее высоким содержанием белка.

Предлагаемый способ отбора высоко- бе/ ковых форм люпина узколистного имеет признаки, сходные с признаками, присутствующими у прототипа, заключающиеся в измельчении семян и определении у них содержания белка.

У заявляемого решения появляются новые, отличные от известного решения при- знски, заключающиеся в том, что из муки семян экстрагируют белки, осаждают их, а оставшейся в надосадочной жидкости части бел|ков проводят электрофорез в 15% полиакриламидном геле и отбирают образцы, имеющие ярко выраженную зону при ОЭП 0,4.

Благодаря указанным новым признакам у заявляемого решения появляются новые свойства, не совпадающие со свойством известного решения, в результате чего возможно достижение более высокой эффективности отбора за счет возможности целенаправленного выделения форм люпина узколистного с генетически обусловленным более высоким содержанием белка.

Способ осуществляется следующим образом.

Семена люпина измельчают, навеску муки экстрагируют 0,2 М NaCI в соотношении 1:20, центрифугируют при 11-12000 g в течение 20 мин. В надосадочной жидкости осаждают белки при рН 3,8-4,0. Более высокие значения рН не дают полного осаждения балластных белков. Более низкие значения рН нежелательны из-за сильного закисления раствора, мешающего проведе(Л

С

00

со VI VJ

(Л

со

нию электрофореза. Надосадочную жидкость снова центрифугируют и используют для электрофореза о 15%-лом полиакрила- мидном геле. Используют 0,05 М трис-гли- циновый буфер, рН 8,3. Электрофорез проводят в плоском геле при силе тока 20- 30 мА на пластинку и напряжения 250 В. Электрофорез проводят 1,5 ч. Затем гель фиксируют20% ТХУ стечение часа и промывают водой. Окраску проводят кумасси G - 250%, 0.2% раствором в смеси этанол: уксусная кислота: вода в соотношении 1:1:2 в течение 1,5 ч. Краску отмывают 10%-ной уксусной кислотой.

Анализируют электрофореграммы и отбирают образцы, которые имеют ярко выраженную зону при ОЭП 0,4 (см.чертеж).

П р и м е р. В опыте использовали семена 14 сортообрззцов люпина узколистного, различающихся по содержанию белка, которое определяли известным способом (N х 6,25).

Берут навеску муки семян люпина узколистного и экстрагируют белки 0,2 М NaCI о соотношении мука: 0,2 М 1:20 в течение 3 ч при 4°С. Затем экстракт центрифугируют при 11-12000 g в течение 20 мин. В нэдосадочной жидкости осаждают основную массу запасных белков при рН 3,8-4,0. После 1,5-2 ч образования осадка его центрифугируют, а оставшиеся в надосадочной жидкости белки используют для электрофореза. Электрофорез проводят в пластинках 15% ПААГ. В ячейку геля наносят вытяжку в количестве 0,04 мл. Используют трис-глици- новый буфер рН 8,3. Электрофорез проводят при силе тока 20-30 мА на пластинку и напряжении 250 В, Проводят электрофорез 1,5 ч. Затем гель фиксируют 20% ТХУ в течение часа и промывают дистиллированной водой, Окраску проводят кумасси G-250, 0,2%-ным раствором в смеси этанол: уксус0

5

0

5

0

5

0

пая кислота: вода в соотношении 1:1:2 в течение 1,5 ч. После окрашивания гель промывают водой и отмывают краситель 10%- ной уксусной кислотой. При анализе электрофореграмм выделяют образцы, которые имеют ярко выраженную зону при ОЭП 0,4, взаимосвязанную с более высоким содержанием белка.

В таблице представлены результаты определения содержания белка и анализ электрофореграмм различных сортообразцов люпина.

Использование предложенного способа отбора высокобелковых форм люпина узколистного обеспечивает ускорение процесса за счет целенаправленного выделения форм люпина с генетически обусловленным более высоким содержанием белка. Этим способом одному человеку можно проанализировать свыше 20 образцов в течение рабочего дня. Кроме того, данный способ дает возможность использовать для анализа семена с одного растения, что очень важно для селекционеров, а не семена с разных растений для образования средней пробы, как это требуется в известном способе.

Формула изобретения

Способ -отбора высокобелковых форм люпина узколистного, включающий измельчение семян, определение содержания белка и отбор высокобелковых образцов, отличающийся тем, что определение содержания белка проводят путем экстракции измельченных семян солевым раствором, центрифугирования нздосадочной жидкости, осаждения балластных запасных белков при рН 3,8-4,0 и электрофореза полученной вытяжки с последующим анализом полученных белковых спектров и отбор ое- дут по наличию в спектрах ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4.

Продолжение таблицы

Использование: сельское хозяйство, растениеводство, луговодство, селекция, биохимическая генетика. Сущность изобретения: высокобелковые формы люпина узколистного отбирают и идентифицируют по наличию в их белковом спектре ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4, при этом отработана специфическая методика элект- рофоретического разделения белков, 1 табл., 1 фиг.

фп

сорто- образцы