Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам FUSаRIUм SамвUсINUм FUск Советский патент 1989 года по МПК A01H1/04 

1

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в селекции картофеля на устойчивость к болезням.

Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудозатрат.iСпособ осуществляется следующим образом.

Навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 М NaCI. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутствии. По способноти солераствори- мых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибиро- вать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили.

Пример. Клубень картофеля пробуравливают сверлом по вертикальной и горизонтальной осям. Высечку высуш. Вают на воздухе, смалывают и среднюю навеску муки в 50 мг экстрагируют 20 мл 0,2 М NaCl. Экстракт центрифугируют при 8000 об/мин в течение 15 .мин и получают таким образом надосадочную жидкость (НЖ), содержащую солерастБоримые белки.

Ферментный препарат, |;еобхолимый для анализа, получают из культуральной жидкости гриба возбудителя сухой фузариозной гнили путем осаждения белка сульфатом аммония до 80% насьш ения, растворения осадка в дистиллированной воде и пропусканием через колонку с акрилексом Р-iOO. Активную ферментную фракцию лиофилизи- руют и используют для работы. Из одного 1 л культуральной жидкости получают около 250 мт лиофилизированного фермента возбудителя болезни. Для анализа используют концентрацию 140 мкг/мл 0,2 М NaCl.

Для осуществления способа берут I мл ферментного препарата, 1 мл 0,06 М фосфатного буфера рХ 7,6. 1 мл 1% казеина в

О

to

0,06 М фосфатном буфере, рН 7,6 и инкубируют реакционную смесь в термостате при 37°С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Одновременно ставят контрольную пробу на реактивы. Для этого смешивают 1 мл фосфатного буфера, 3 мл 5%-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл фермента. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Таким образом получают активность ферментного препарата ().

Далее определяют активность фермента в присутствии солерастворимых белков. Для этого берут 1 мл ферментного препарата, 1 мл НЖ, 1 мл казеина и инкубируют реакциюнную смесь при 37°С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5%-ной ТХУ. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Контрольная проба состоит из 1 мл НЖ, 3 мл 5%-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл ферментного препарата. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию. Получают Дол.

Ингибиторную активность солерастворимых белков из картофеля выражают в микрограммах угнетенного фермента на грамм воздушно-сухой массы и определяют по формуле

(Дт-До«)р

г 1 Li. ут )

Л,-т

где ИЕ - ингибиторная единица;

Д - экстинкция пробы с ферментом за вычетом контроля;

До„ - экстинкция пробы со смесью фермент-надосадочная жидкость за вычетом контроля; V - объем экстракта; т - навеска материала;

140 - содержание фермента в мкг/мл.

На основе экспериментальных данных выявлено, что существует тесная корреляционная зависимость между активностью соле- растворимого белка по отношению к фер- 10 менту фитопатогенного гриба и устойчивостью сортообразцов картофеля к инфекции. Показатель активности в среднем 40 мкг на г воздушно-сухого вешества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг --о восприим- ,с чивости, 26 мкг - о средней восприимчивости (таблии,а).

Способ позволяет оценить большое количество образцов за короткий промежуток времени (30 образцов в трехкратной пов- торнс)сти за 7-часовой рабочий день). Для 20 определения требуется незначительное количество материала (50 мг). Способ прост в исполнении, не требует дефицитных, а также вредных для здоровья реактивов.

25

Формула изобретения

Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам Fusarium sambucinum Fuck путем определения биохимическго показателя, отличающийся тем, что, с целью уско- 30 рения оценки и снижения трудозатрат, в качестве биохимического показателя используют активность протеолитических ферментов возбудителя в присутствии солераство- римых белков картофеля, по величине которой оценивают устойчивость картофеля.

Формула изобретения

Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам Fusarium sambucinum Fuck путем определения биохимическго показателя, отличающийся тем, что, с целью уско- 0 рения оценки и снижения трудозатрат, в качестве биохимического показателя используют активность протеолитических ферментов возбудителя в присутствии солераство- римых белков картофеля, по величине которой оценивают устойчивость картофеля.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции картофеля на устойчивость к болезням. Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудозатрат. Для оценки устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 M NACL. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутствии. По способности солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибировать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили. Показатель активности в среднем 40 мкг/г воздушно-сухого вещества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг/г - о восприимчивости к указанному заболеванию. 1 табл.