Штамм вируса гриппа А (Н3 N 2) для получения живой интраназальной гриппозной вакцины для детей Советский патент 1993 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 

штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р унаследовал от донора аттенуации гены 1,2,3, 5, 7, 8, кодирующие белки РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS, соответственно и 4 и 6 гены, кодирующие поверхностные антигены (гемагглюти- нин и нейрзминидазу) от эпидемического вируса, Температурочувствительный (разность титров при 32 и 40°С - 7,75 Ig ЭЙД 50/0,2 мл) холодоадаптированный (разность титров при 32° и 25°С) - 4,5 Ig ЭЙД 50/0,2 мл) рекомбинант А(Закарпатье) 354/89/6Р унаследовал 5 ts - мутаций в генах 1, 2, 5, 7, 8 от донора аттенуации, которые обеспечивают высокую степень ареактогенности и генетической стабильности.

Таким образом, представленный рекомбинант характеризуется сочетанием полезных признаков родительских вирусов, необходимых вакцинному штамму - антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А(3акар- патье) 354/89 (H3N2) и температурочувстви- тельностью и холодоадаптированностью, коррелирующей с аттёнуацией для человека, характерных для донора аттенуации.

Морфология штамма А(Закарпатье). 354/89/6Р (H3N2)- полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Характеристика вакционного штамма А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2).

Состав генома: гены 4 и 6.от эпидемического вируса, гены 1, 2, 3, 5, 7, 8 - от донора аттенуации. Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах 8,0 Ig ЭЙД 50/0,2 мл в течение 48 ч при 32-34°С. Гемагглютинириующая активность 1:256. РСТ40 - признак - 7,75 Ig ЭЙД 50/0,2 мл. Проявляет стабильность биологических признаков после 5-кратного пасси- рования в развивающихся куриных эмбрионах. Обладает ареэктогенностыо и выраженной иммуногенной активностью.

Испытания проводили в соответствии с требованиями МРТУ-42 № 373-70 на живую

интраназальную гриппозную вакцину для детей 3-14 лет. Вакцину вводили интрана- зально серонегативным детям. При отборе контингенов вакцинации наблюдении за

привитыми руководствовались Приказ ом МЗ СССР N 1092 от 23 октября 1981 г.

Пример: группе из 101 серонегативных ребенка 3-14лет был интраназально введем

вакцинный штамм А(Закарпатье)354/89/6Р

(H3N2). После первой вакцинации у всех привитых детей, ответивших температурной реакцией впослевакцинальном периоде, лихорадка не превышала 37,5°С, появлялась преимущественно на второй

или третий день после введения препарата и сохранялась, как правило, не более суток и лишь в единичных случаях - до 2 суток. Среди детей контрольной группы (получивших плацебо) также имели место субфиб- рильные температурные реакции, На повторное введение вакцины с интервалом в 3 недели также ни в одном случае не зарегистрировано развития сильных или средних температурных реакций ни среди

серойегативных детей, ни среди привитых (табл. 1). Таким образом, клиническое наблюдение за детьми, получившими препарат, показало ареактогенность вакцины. По данным РТГА достоверная сероконверсия была зарегистрирована у 70,3% лиц (табл. 2).

Представленные в таблицах данные испытания реактогенных и иммуногенных свойств заявляемого рекомбинантного

штамма А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) свидетельствуют о том, что штамм полностью соответствует требованиям МРТУ-42 № 373-70 на живую гриппозную вакцину для детей 3-14 лет и может быть использован

для производства этого препарата.

Формула изобретения Штамм вируса гриппа A (H3W2) ГКВ 2265 для получения живой интраназальной гриппозной вакцины для детей.

Таблица 1

Использование: медицинская вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) - рекомбинант, полученный скрещиванием эпидемического вируса А(Закарпатье) 354/89 (H3N2) с холодадаптированным тем- пературочувствительным вирусом А(Ленин- град) 134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых и деИзобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического вируса. Изобретение целесообразно использовать в здравоохранении для профилактики-гриппа среди детей живой интраназальной вакциной из штамма А(Закарпатье) 354/89/6 Р (H3N2). Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакционного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А(Закарпатье) 354/89 (H3N2). тей, свойства которого дают возможность гарантированно получать рекомбинантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А(3акар- .патье) 354/89/6Р активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре (32-34°С), разность в показателях инфекционной активности при 32°С и 40°С - 7,75 Ig ЭЙД 50/0,2 мл. Рекомбинантунаследовал от эпидемического вируса 2 гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и 6 генов, кодирующих не- гликозилированные белки - от донора аттенуации. По данным рекомбинационного анализа в геноме рекомбинанта имеется 5х8-мутаций, характерных для донора аттенуации вируса А(Ленинград) 134/47/57, на личие которых коррелирует с атеннуацией вируса для человека. Штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) ареактогенен для детей 3-15 лет при интраназальном введении и вызывает сероконверсии у 70,3% привитых с исходным титром антител 1:8. 2 табл. Вакцинный штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) получен методом рекомбинации эпидемического вируса А(3акар- патье)354/89 (H3N2) с холодоадаптированным температурочувст- вительным штаммом А(Ленинград) 134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации (разность титров при 32°С и 40°С - 7,0 Ig ЭЙД 50/0,2 мл) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки А(Ленинград) 134/47/47 (H2N2). Методом РНК:РНК гибридизации с последующим электрофорезом в полиакрила- мидном геле выявлено, что вакцинный 1 ел С 00 Сл 00 е 00

Реактогенные свойства вакцинного штамма А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2)

Иммуногенная активность вакцинного штамма А (Закар- патье/354/89/6Р (H3N2)

Таблица 2